(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210379959.5 (22)申请日 2022.04.12 (71)申请人 中山大学 地址 510275 广东省广州市海珠区新港西 路135号 (72)发明人 吴忠道　胡云逸　李丁昊　沈佳　 孙希　 (74)专利代理 机构 广州粤高专利商标代理有限 公司 44102 专利代理师 段卉 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种检测新型 冠状病毒LAMP引物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种检测新型冠状病毒LAMP 引物及其应用， 所述LA MP引物其核苷酸如SEQ  ID  NO： 1～6所示。 本发明利用所述LAMP引物采用环 介导等温扩增技术与侧向流动试纸条法结合的 方法， 提高检测结果的直观性。 所述检测方法和 检测试剂盒基于RT  LAMP LFD技术检测新型冠状 病毒， 操作简单、 灵敏度高、 特异性强， 与传统荧 光RT‑PCR检测方法相比， 缩短检测时间， 减少仪 器设备限制， 适用于基层医疗机构和人群筛查现 场， 有良好的应用价 值和推广前 景。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图2页 CN 114836576 A 2022.08.02 CN 114836576 A 1.一种检测新型 冠状病毒的LAMP引物， 其特 征在于， 其核苷酸如SEQ  ID NO： 1～6所示。 2.根据权利要求1所述的LAMP引物， 其特征在于， 核苷酸如SEQ  ID NO： 5所示引物的5 ′ 末端标记有Bi otin， 核苷酸如SEQ  ID NO： 6所示引物的5 ′末端标记有FAM 。 3.权利要求1或2所述的LAMP引物在制备检测新型 冠状病毒的试剂盒中的应用。 4.一种检测新型 冠状病毒的试剂盒， 其特 征在于， 含有权利要求1或2所述的LAMP引物。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 还含有LAMP反应试剂和/或LAMP反应稳 定剂。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述 LAMP反应稳定剂为液体石蜡油。 7.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述LAMP反应试剂为10 ×Reaction   buffer、 MgSO4、 dNTP Mix、 ddH2O和/或Bst3.0  DNA polymerase中的一种或几种。 8.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特 征在于， 还 含有LFD检测试纸条。 9.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特 征在于， 还 含有LFD检测样品稀释液。 10.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒的LAMP反应程序为： 65℃ 30min， 80℃5mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114836576 A 2一种检测新型冠状病毒LAMP引物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及病毒检测技术领域， 具体地， 涉及一种检测新型冠状病毒LAMP引物及 其应用。 背景技术 [0002]新冠肺炎患者初期临床表现为体温高、 咳嗽、 乏力、 呼吸急促， 影像学CT结果可作 为肺炎的初步征象。 后 期可逐渐出现呼吸困难， 严重者可出现急性呼吸窘迫综合征、 代谢性 酸中毒等症状。 因此， 开发对患者和无症状病毒携带者的快速、 准确的检测方法， 是遏制新 冠病毒传播的有效途径之一。 [0003]目前， 检测新冠肺炎 的方法主要包括流行病学诊断、 临床诊断和实验室诊断三大 类。 实验室诊断主要包括免疫学检测和分子生物学检测。 免疫学诊断方法主要有包括抗原 检测如免疫层析法和抗体检测如酶联免疫吸附试验、 化学发光免疫测定、 免疫层析测定等。 虽然这些方法也被广泛应用于临床诊断和流行病 学调查， 但同时也暴露出不少问题。 病原 学诊断方法易漏检， 且常需重复多次。 免疫 学诊断并非直接检测病原体， 敏感性较低且特异 性不足。 分子生物学技术主要以核酸扩增技术为基础， 为病毒的诊断提供了快速、 灵敏、 特 异及稳定的检测方法。 常用于检测新型冠状病毒的核酸检测方法有RT ‑PCR、 实时荧光定量 PCR(RT‑qPCR)。 其中， 实时定量RT ‑PCR(qRT‑PCR)是世界卫生组织(WHO)推荐的SARS ‑CoV‑2 检测的金标准， 但对实验场所、 实验设备及操作人员要求高、 耗时长， 不适用于基层医疗机 构检测、 现场人群筛查以及高危人群的自我检测。 [0004]2000年， Notomi报道了一种新的核酸扩增技术， 即环介导等温核酸扩增  (Loop‑ Mediated Isothermal Amplification  of DNA， LAMP)。 这种新的核 酸扩增技术特异性甚高 且快速高效。 该技术的关键是需要能识别靶序列上8个特定区域的6个特异引物， 和一种具 有链置换特性的DNA聚合酶， 即Bst  DNA聚合酶。 反应恒定温度为60～65℃， 时间仅需要 30min到60min。 LAMP技术相比PCR具有以下优点： 灵敏度高； 特异性强； 快速高效， 在 1h内即 可完成， 若在 靶序列上进一步设计两条促环形成引物， 扩增时间将在原 来的基础上减少1/3 ～1/2； 设备简单， 在 恒温金属浴锅或水浴锅中即可完成。 [0005]LFD检测方法是利用乳胶微球免疫层析技术， 用乳胶微球标记链霉亲和素捕获扩 增产物， 检测线上包被羧基荧光素FAM单克隆抗体， 当待检样品里有Biotin和Biotin(FAM)   修饰的目标检测物时， 会形成乳胶微球标记物—目标检测物—抗体复合物而富集在检测线 上， 形成有色沉淀线， 从而特异性地检测出目标产物， 并具有高特异性、 高灵敏度、 简便、 安 全及成本低的特点, 发明内容 [0006]本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足， 提供一种检测新型冠状病毒LAMP   引物及其应用。 [0007]本发明的第一个目的是提供一种检测新型 冠状病毒的LAMP引物。说　明　书 1/9 页 3 CN 114836576 A 3