(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210379092.3 (22)申请日 2022.04.12 (71)申请人 江西农业大 学 地址 330045 江西省南昌市 市辖区经济开 发区志敏大道1 101号 (72)发明人 廖光联　徐小彪　黄春辉　贾东峰　 钟敏　曲雪艳　刘青　涂贵庆　 肖委明　 (74)专利代理 机构 江西省专利事务所 3 6100 专利代理师 殷勇刚 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6809(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于鉴定毛花猕猴桃叶片AsA含量高低 的SNP分子标记及其 开发和应用方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于鉴定毛花猕猴桃 叶 片AsA含量高低的SNP分子标记， 所述SNP分子标 记的位置为Chr 05： 19338016， 其中野 生型基因组 碱基为G， AsA含量高于200mg/100g， 为AsA类型； 杂合突变型基因组碱基为G/A， AsA含量151 ‑ 200mg/100g， 为中间型AsA类 型； 纯和突变型基因 组碱基为A， AsA 含量低于150mg/100g， 为低AsA类 型。 本发明还公开了一种用于鉴定毛花猕猴桃叶 片AsA含量高低的SNP分子标记的开发和应用方 法。 猕猴桃叶片AsA含量高低在现代育种工作中 仍是一个重要的选育性状， 此标记的开发利用可 为猕猴桃分子标记辅助育种奠定 基础。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 114672583 A 2022.06.28 CN 114672583 A 1.一种用于鉴定毛花猕猴桃叶片AsA含量高低的SNP 分子标记， 其特征在于， 所述SNP分 子标记的位置为Chr05： 19 338016， 其中野生型基因组碱基为G， AsA含量高于2 00mg/100g， 为 AsA类型； 杂合突变型基因组碱基为G/A， AsA含量151 ‑200mg/100g， 为中间型AsA类型； 纯和 突变型基因 组碱基为A， AsA含量低于15 0mg/100g， 为低AsA类型。 2.一种权利 要求1所述SNP 分子标记的开发方法， 其特征在于， 基于所述SNP 分子标记设 计特异性引物， 并将PCR产物进行桑格测序， 在Chr05： 19338016位点处碱基为G时， AsA含量 高于200mg/100g， 为高AsA 类型； 杂合突变 型基因组碱基为 G/A， AsA含量151 ‑200mg/100g， 为 中间型AsA类型； 纯和突变型基因 组碱基为A， AsA含量低于15 0mg/100g， 为低AsA类型。 3.如权利要求2所述的开发方法， 其特征在于， 所述特异性引物包括上游引物F ‑5’和下 游引物R‑5’， 其中， 上游引物F ‑5’的核苷酸序列为gctagttactgtagactagt； 下游引物R ‑5’的 核苷酸序列为t tggtcatctg gaatgcaat。 4.一种权利要求1所述SNP分子标记的应用方法， 其特征在于， 应用于鉴定毛花猕猴桃 叶片AsA含量高低。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114672583 A 2一种用于鉴定毛花 猕猴桃叶片A sA含量高低的SNP分子标记及 其开发和应用方 法 技术领域 [0001]本发明属于毛花猕猴桃叶片抗坏血酸 （AsA） 含量鉴定领域， 具体涉及一种用于鉴 定毛花猕猴桃叶片AsA含量高低的SNP分子标记。 本发明还涉及该SNP分子标记的开发和应 用方法。 背景技术 [0002]猕猴桃是原产于中国的猕猴桃科猕猴桃属的特色浆果， 果实营养密度较高， 花色 多样极具观赏性， 是鲜食与观赏兼备的多年生落叶藤本果树。 目前， 全世界共有猕猴桃属植 物54个种及21个变种。 猕猴桃的鲜果富含AsA和氨基酸， 目前市场上主要以鲜食为主， 也可 加工成果脯、 果 酒、 果汁等， 均具有独特的风味， 因此深受大众青睐。 毛花猕猴桃为中 国特有 的猕猴桃属中的一个重要种类， 广泛分布于浙江、 福建、 江西、 湖南、 广西、 广东和贵州等地， 是继中华猕猴桃和美味猕猴桃之后极具开发潜力的特色浆果， 野生种质资源十分丰富， 具 有丰富的遗传多样性， 可为猕猴桃种质创新与新品种培育提供宝贵的原始素材。 毛花猕猴 桃为典型的雌雄异株果树， 在生产上需要配置相应的授粉雄株， 才能保障果园产量。 雄株花 粉质量及适配性对雌株果实具有重要影响。 雄株叶片组织也具有较高的AsA等营养保健物 质， 在采集完花粉后， 其叶片可以制成茶， 供人饮用。 随着高通量测序技术的发展， 基于全基 因组重测序的单核苷酸多态性位点 （Single  nucleotide  polymorphism， SNP） 越来越受到 关注， SNP分子标记具有在基因组内分布广泛、 密度高、 变异稳定、 多态性强、 检测容易等优 点。 目前在葡萄、 苹果、 草莓、 香蕉、 柑橘、 梨上已有应用。 因此， 开展基于高通量测序数据开 发的SNP分子标记特异 性引物研究， 可为猕猴桃重要抗性性状以及经济性状定位、 遗传多样 性分析、 分子标记辅助育种奠定基础。 发明内容 [0003]本发明要解决的技术问题是提供一种用于鉴定毛花猕猴桃叶片AsA含量高低的 SNP分子标记， 本发明要解决 的另一个问题是提供一种用于鉴定毛花猕猴桃叶片AsA含量高 低的SNP分子标记的应用方法， 通过本发 明可为猕猴桃重要抗性性状以及经济性状定位、 遗 传多样性分析、 分子标记辅助育种奠定基础。 [0004]本发明通过以下技 术方案解决上述 技术问题， 一种用于鉴定毛花猕猴桃叶片AsA含量高低的S NP分子标记， 其特征在 于， 所述S NP 分子标记的位置为Chr05： 19338016， 其中野生型基因组碱基为 G， AsA含量高于200mg/100g， 为AsA类型； 杂合突变型基因组碱基为G/A， AsA含量151 ‑200mg/100g， 为中间型AsA类型； 纯 和突变型基因 组碱基为A， AsA含量低于15 0mg/100g， 为低AsA类型。 [0005]本发明要解决的另一个问题是提供一种用于鉴定毛花猕猴桃叶片AsA含量高低的 SNP分子标记的开发方法， 其特征在于， 基于所述SNP分子标记设计特异性引物， 并将PCR产 物进行桑格测序， 在Chr05： 19338016位点处碱基为G时， AsA含量高于200mg/100 g， 为高AsA说　明　书 1/5 页 3 CN 114672583 A 3