(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210384065.5 (22)申请日 2022.04.13 (71)申请人 江苏伟禾 生物科技有限公司 地址 225300 江苏省泰州市经济开发区药 城大道一号新药创制基地二期D幢大 楼912室 (72)发明人 陈炤源　王浩　章婷婷　崔江应　 (74)专利代理 机构 南京正联知识产权代理有限 公司 32243 专利代理师 卢霞 (51)Int.Cl. C12N 9/12(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种快速长片段扩增酶及其在KIR基因测序 中的应用 (57)摘要 本发明提供了一种快速长片段扩增酶及其 在KIR基因测序中的应用。 所述的快速长片段扩 增酶为经氨基酸序列修饰的可快速扩增长片段 的DNA聚合酶， 所述的修饰的DNA聚合酶与未修饰 的DNA聚合酶的氨 基酸序列相比， 进行如下突变： 第145位的亮氨酸L突变为谷氨酰胺Q， 第7 19位的 缬氨酸V突变为天冬酰胺N， 所述快速长片段扩增 酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO 48所 示。 本发明具有如下技术效果： 1） 本发明的DNA聚 合酶为经氨基酸序列修饰的可快速扩增长片段 的DNA聚合酶， 能够实现对长片段目的序列的快 速准确扩增； 可在一个PCR反应实现对KIR亚型基 因的全长扩增， 长至16kb； 2） 能够实现对样本 KIR 基因的快速扩增及测序分型。 权利要求书3页 说明书10页 序列表9页 附图10页 CN 114807083 A 2022.07.29 CN 114807083 A 1.一种快速长片段扩增酶， 其特征在于， 其为经氨基酸序列修饰的可快速扩增长片段 的DNA聚合 酶， 所述的修饰的DNA聚合 酶与未修饰的DNA聚合 酶的氨基酸序列相比， 进 行如下 突变： 第145位的亮氨 酸L突变为谷氨 酰胺Q， 第719位的缬氨 酸V突变为天冬酰胺 N， 所述快速 长片段扩增酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO 48所示。 2.如权利要求1所述的快速 长片段扩增酶在制备 KIR基因测序试剂中的应用。 3.一种KIR基因分型试剂盒， 其特征在于， 包含如权利要求1所述的快速长片段扩增酶， 还包括PCR反应试剂、 PCR扩增引物及测序引物。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的PCR反应试剂包括： 0.5mM脱氧核 苷酸dNTP， 40mM氯化镁MgCl2， 80mM氯化钾KCl， 60mM三羟甲基氨 基甲烷盐酸盐Tri s‑HCl， 1mM 四甲基氯化铵 TMAC， 甘油0.6％v/v， 甲酚红0.02％v/v和甜菜碱 5％v/v。 5.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的PCR扩增引物及测序引物为能够 用于检测人类自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIR常见的16种基因的PCR扩增引物和测序 引物， 所述 的16种基因包括14个KIR功能性基因2DL1、 2DL2、 2DL3、 2DL4、 2DL5、 2DS1、 2DS2、 2DS3、 2DS4、 2DS5、 3DL1、 3DL2、 3DL3和3D S1， 以及2个假基因2D P1和3DP1。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的PCR扩增引物包括16个特异性扩 增引物组， 每 个特异性扩增引物组含有的引物对核苷酸序列如下表所示： 权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114807083 A 27.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的测序引物包括8个通用测序引物 组， 每个引物核苷酸序列如下表所示： 权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114807083 A 3