(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210390629.6 (22)申请日 2022.04.14 (71)申请人 深圳闪量科技有限公司 地址 518057 广东省深圳市光明区凤 凰街 道凤凰社区观光路招商局光明科技园 A3栋C705.B6栋4C.B5栋A201 (72)发明人 林协　岳敏　戴珩　 (74)专利代理 机构 上海十蕙一兰知识产权代理 有限公司 313 31 专利代理师 刘秋兰 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01)C12R 1/01(2006.01) C12R 1/35(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 同时检测猫多种病原体的引物池及PCR快速 检测试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种同时检测猫多种病原体 的引物池及PCR快速检测试剂盒， 所述同时检测 猫多种病原 体PCR快速检测试剂盒包括： PCR反应 液冻干粉、 引物池冻干粉和缓冲液， 其中所述引 物池冻干粉包 括SEQ ID NO:1～SEQ  ID NO:24所 示的引物对和湮灭探针。 本发明试剂盒还包括微 阵列qPCR检测卡盒， 所述微阵列qPCR检测卡盒中 的每个子检测区分别固定有与对应的湮灭探针 杂交的荧光核酸， 每个子检测区仅固定某一种病 原体的荧光核酸， 如此来区分检测样本中的病原 体。 本发明针对此还进行了多重PCR来检测猫多 种病原体做了引物的体系优化， 并设计了全新的 引物和探针池， 可 以达到在临床上灵敏、 特异性 地满足对猫多种 病原体的快速 检测。 权利要求书2页 说明书8页 序列表7页 附图5页 CN 114891785 A 2022.08.12 CN 114891785 A 1.一种同时检测猫多种 病原体的引物池， 其特 征在于包括如下引物对： 如SEQ ID NO:1所示的Bb ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:2所示的Bb ‑R反向引物； 如SEQ ID NO:4所示的ClaF ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:5所示的ClaF ‑R反向引物； 如SEQ ID NO:7所示的FIV ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:8所示的FIV ‑R反向引物； 如SEQ ID NO:10所示的FCV ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:11所示的FCV ‑R反向引物； 如SEQ ID NO:13所示的FHV1 ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:14所示的FHV1 ‑R反向引物； 如SEQ ID NO:16所示的FCV ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:17所示的FCV ‑R反向引物； 如SEQ ID NO:19所示的CF ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:20所示的CF ‑R反向引物； 如SEQ ID NO:22所示的FCoV ‑F正向引物， 如SEQ  ID NO:23所示的FCoV ‑R反向引物。 2.如权利要求1所述的同时检测猫多种病原体的引物池， 其特征在于还包括如下湮灭 探针： 如SEQ ID NO:3所示的Bb ‑P湮灭探针； 如SEQ ID NO:6所示的ClaF ‑P湮灭探针； 如SEQ ID NO:9所示的FIV ‑P湮灭探针； 如SEQ ID NO:12所示的FCV ‑P湮灭探针； 如SEQ ID NO:15所示的FHV1 ‑P湮灭探针； 如SEQ ID NO:18所示的FCV ‑P湮灭探针； 如SEQ ID NO:21所示的CF ‑P湮灭探针； 如SEQ ID NO:24所示的FCoV ‑P湮灭探针。 3.一种同时检测猫多种病原体PCR快速检测试剂盒， 包括： PCR反应液、 引物池和缓冲 液， 其特征在于所述引物池为权利要求1或2所述的引物池。 4.如权利 要求3所述的同时检测猫多种病原体PCR快速检测试剂盒， 其特征在于， PCR反 应液为PCR反应液冻干粉， 所述引物池为引物池冻干粉。 5.如权利要求3所述的同时检测猫多种病原体PCR快速检测试剂盒， 其特征在于， 所述 同时检测猫多种 病原体PCR快速检测试剂盒还具有PCR质控品。 6.如权利要求5所述的同时检测猫多种病原体PCR快速检测试剂盒， ， 其特征在于， 所述 PCR质控品由阳性质控品和阴性质控品组成。 7.如权利要求6所述的同时检测猫多种病原体PCR快速检测试剂盒， 其特征在于， 所述 阳性质控品为质粒或核酸模板标准品， 所述阴性质控品为灭菌后焦碳 酸二乙酯处 理水。 8.如权利要求7所述的同时检测猫多种病原体PCR快速检测试剂盒， 其特征在于， 所述 质粒核酸模板DNA标准品的序列分别如SEQ  ID NO:25， SEQ  ID NO:26， SEQ  ID NO:27， SEQ   ID NO:28， SEQ  ID NO:29， SEQ ID NO:30， SEQ ID NO:31， SEQ  ID NO:32所示。 9.如权利要求4所述的同时检测猫多种病原体PCR快速检测试剂盒， 其特征在于， 所述 PCR反应液冻干粉包括耐热DNA聚合酶、 逆转录酶、 RNA酶抑制剂、 二价镁离子和三磷酸脱氧 核糖核苷酸。 10.如权利要求3所述的同时检测猫多种病原体PCR快速检测试剂 盒， 其特征在于， 所述 缓冲液为pH＝8.0的Tris缓冲液。 11.如权利要求9所述的同时检测猫多种病原体PCR快速检测试剂 盒， 其特征在于， 所述 PCR反应液冻干粉和所述引物池冻干粉用所述缓冲液配置成如下浓度的PCR反应液： 耐热权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114891785 A 2DNA聚合酶的浓度为0.01～1单位/μL优选0.01～0.1单位/μL、 逆转录酶100 ‑400U/μL优选 100‑150U/ μL、 RNA酶抑制剂30 ‑50U/ μL优选35 ‑45U/ μL、 二价镁离子的浓度为1～4mmol/L优 选2.5～3.5mmol/L、 三磷酸脱氧核糖核苷酸的浓度为10～ 500 μmol/L优选100～200 μmol/L、 以及各引物和各湮灭探针的浓度分别为10～5 00nmol/L优选10 0～200nmol/L。 12.如权利要求11所述的同时检测猫多种病原体PCR快速检测试剂盒， 其特征在于， 所 述PCR反应液冻干粉和所述引物池冻干粉用所述 缓冲液配置成如下浓度的P CR反应液： 耐热 DNA聚合酶的浓度为0.05 单位/ μL、 逆转录酶125U/ μL、 RNA酶抑制剂40U/ μL、 二价镁离子的浓 度为3mmol/L、 三磷酸脱氧核糖核苷酸的浓度为200 μmol/L、 以及各引物和各湮灭探针的分 别浓度20 0nmol/L。 13.如权利要求3所述的同时检测猫多种病原体PCR快速检测试剂盒， 其特征在于所述 试剂盒还包括微阵列qP CR检测卡 盒， 所述微阵列qPCR检测卡 盒中的每个子检测区分别固定 有与对应的湮灭探针杂交的荧 光核酸。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114891785 A 3