(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210391926.2 (22)申请日 2022.04.14 (71)申请人 山东省寿光市三木种苗有限公司 地址 262703 山东省潍坊市寿光市区圣城 路中段 申请人 山东省西甜瓜 育种工程 技术研究中 心有限公司 　 东北农业大 学 (72)发明人 刘钊　栾非时　宋正峰　刘识　 刘树森　高鹏　郎丰孝　王学征　 冯翠艳　刘宏宇　杜黎黎　 (74)专利代理 机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权 代理有限公司 2321 1 专利代理师 邓宇(51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 鉴定西瓜种皮裂纹性状的分子标记、 方法、 引物对、 试剂盒及其应用 (57)摘要 鉴定西瓜种皮裂纹性状的分子标记、 方法、 引物对、 试剂盒及其应用， 属于分子标记辅助育 种技术领域。 为了更好地鉴定西瓜种皮裂纹性 状， 获得与西瓜种皮裂纹性状紧密连锁的染色体 区段及分子标记， 本发明提供了一种与西瓜种皮 裂纹性状紧密连锁的分子标记， 该分子标记存在 一处InDel位点的变化。 通过引物对对西瓜幼苗 基因组DNA进行PCR扩增， 利用聚丙烯酰氨 凝胶电 泳检测PCR产物， 即可对西瓜种皮是否具有裂纹 性状进行区分。 上述鉴定方法， 操作 简便， 准确度 高， 为西瓜种皮形态分子鉴定提供了行之有效的 分子育种工具。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图1页 CN 114836562 A 2022.08.02 CN 114836562 A 1.一种与西瓜种皮裂纹性状紧密连锁的InDel分子标记， 其特征在于， 所述InDel分子 标记为核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示的117bp核苷酸片段和核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所 示的128bp核苷酸片段； 所述SEQ  ID NO.1与种皮无裂纹性状紧密连锁， 所述SEQ  ID NO.2与 种皮裂纹性状紧密连锁。 2.引物对在鉴定西瓜种皮裂纹性状中的应用， 其特征在于， 所述引物对包括核苷酸序 列如SEQ ID NO.3所示的上游引物和核苷 酸序列如SEQ  ID NO.4所示的下游引物， 所述应用 为利用引物对扩增西瓜基因组DNA获得扩增产物， 再通过检测扩增产物来鉴定西瓜种皮是 否有裂纹。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述西瓜基因组DNA取自幼苗期、 抽蔓期或 结果期的任一 一个时期。 4.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述应用中检测扩增产物是通过聚丙烯酰 氨凝胶电泳进行检测， 若扩增产 物为117bp的一个片段， 或者同时包含117bp和128bp两个片 段， 则判定具有种皮无裂纹性状； 若扩增产物为128bp的一个片段， 则判定具有种皮裂纹性 状。 5.一种鉴定西瓜种皮裂纹性状的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)提取待测西瓜的基因 组DNA； (2)以步骤(1)获得的基因组DNA为模板， 利用引物对进行PCR扩增， 获得PCR产物； 所述 引物对包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示 的下游引物； (3)通过检测PCR产物， 判断西瓜种皮是否有裂纹。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)所述判断方法为利用聚丙烯酰氨 凝胶电泳检测PCR产物， 若PCR产物为117bp的一个片段， 或者同时包含117bp和128bp两个片 段， 则判定具有种皮无裂纹性状； 若PCR产物为128bp的一个片段， 则判定具有种皮裂纹性 状。 7.权利要求5或6任意一项所述的方法在西瓜种皮裂纹性状辅助鉴定、 辅助育种及西瓜 种皮裂纹性状筛 选中的应用。 8.一种用于鉴定西瓜种皮裂纹性状的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒含有引物对； 所 述引物对包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的上游引物和 核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所 示的下游引物。 9.一种权利要求8所述的试剂 盒的使用方法， 其特征在于， 利用所述引物对对西瓜基因 组DNA进行扩增， 获得PCR产物， 再利用聚丙烯酰氨凝胶电泳对PCR产物进行检测。 10.权利要求9所述的试剂盒在西瓜种皮裂纹性状辅助鉴定、 辅助育种及西瓜种皮裂纹 性状筛选中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114836562 A 2鉴定西瓜种皮裂纹性状的分子标记、 方 法、 引物对、 试剂盒及 其应用 技术领域 [0001]本发明涉及鉴定西瓜种皮裂纹性状 的分子标记、 方法、 引 物对、 试剂盒及其应用， 属于分子标记辅助育种技 术领域。 背景技术 [0002]西瓜(Citrullus  lanatus)为葫芦科西瓜属一年蔓生草本植物， 在我国及世界范 围内广泛栽培， 是世界上重要的水果型 蔬菜之一。 西 瓜除果肉可以食用之外， 其种子及种皮 富含的不饱和脂肪酸(以亚油酸为主)对人体具有保健作用及营养价值。 亚油酸具有降血 脂、 抗血栓、 提高大脑记忆力和注 意力等多种功能， 对人体具有重要的保健作用。 因此， 对西 瓜种皮性状进行研究， 在西瓜育种中具有重要的研究价 值。 [0003]InDel分子标记是由于核苷酸片段存在缺失或插入序列， 致使PC R扩增后产生片段 长度多态性的一种分子标记， 该类标记在基因组中分布广泛， 操作简便， 结果易于观察， 在 相同物种不同材 料中具有普遍适用性。 发明内容 [0004]为了更好地鉴定西瓜种皮裂纹性状， 获得与西瓜种皮裂 纹性状紧密连锁的染色体 区段及分子标记， 本发明提供了一种 与西瓜种皮裂纹性状紧密连锁的InDel分子标记， 所述 InDel分子标记为核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示的117bp核苷酸片段和核苷酸序列如SEQ   ID NO.2所示的128bp核苷酸片段； 所述SEQ  ID NO.1与种皮无裂纹性状紧密连锁， 所述SEQ   ID NO.2与种皮裂纹性状紧密连锁。 [0005]本发明还提供了引物对在 鉴定西瓜种皮裂 纹性状中的应用， 所述引物对包括核苷 酸序列如SEQ  ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示的下游引物， 所述 应用为利用引物对扩增西瓜基因组DNA获得扩增产物， 再通过检测扩增产物来鉴定西瓜种 皮是否有裂纹。 [0006]进一步地限定， 所述西瓜基因组DNA取自幼苗期、 抽蔓期或结果期的任一一个时 期。 [0007]进一步地限定， 所述应用中检测扩增产物是通过聚丙烯酰氨凝胶电泳进行检测， 若扩增产物 为117bp的一个片段， 或者同时包含117bp和128bp两个片段， 则判定具有种皮无 裂纹性状； 若扩增产物为128bp的一个片段， 则判定具有种皮裂纹性状。 [0008]本发明还提供了一种鉴定西瓜种皮裂纹性状的方法， 包括如下步骤： [0009](1)提取待测西瓜的基因 组DNA； [0010](2)以步骤(1)获得的基因组DNA为模板， 利用引物对进行PCR扩增， 获得PCR产物； 所述引物对包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ  ID NO.4 所示的下游引物； [0011](3)通过检测PCR产物， 判断西瓜种皮是否有裂纹。说　明　书 1/6 页 3 CN 114836562 A 3