(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210390335.3 (22)申请日 2022.04.14 (71)申请人 中国农业科 学院兰州畜牧与兽药研 究所 地址 730050 甘肃省兰州市七里河区硷沟 沿335号 (72)发明人 卢曾奎　袁超　郭婷婷　杨博辉　 刘建斌　岳耀敬　李建烨　牛春娥　 (74)专利代理 机构 北京力量专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 11504 专利代理师 毛婷 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于鉴定高山美利奴羊周岁剪毛量的 SNP分子标记及其应用 (57)摘要 本发明属于分子遗传学技术领域， 具体涉及 一种用于鉴定高山美利奴羊周岁剪毛量的SNP分 子标记及其应用。 所述SNP分子标记位于国际绵 羊参考基因组Oar_v4.0版本第5号染色体上第 20077683个核苷酸位点G/C突变。 本发明还涉及 了利用PCR技术检测上述SNP分子标记 的特异性 引物对和含有该引物对的试剂盒及核苷酸多态 性检测方法， 与传统检测法相比， 该技术具有准 确性高， 检测速度快， 成本低， 结果容易判断等优 点。 将SNP位点检测用于开展高山美利奴羊周岁 剪毛量早期选 择， 缩短培育周期、 加快培育进 程， 建立一种高山美利奴羊周岁剪毛量早期选择技 术， 减少高山美利奴羊周岁剪毛量优良性状的育 种时间， 降低育种成本， 具有很高的应用价 值。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图1页 CN 114657266 A 2022.06.24 CN 114657266 A 1.一种检测与高山美利奴羊周岁剪毛量相关的SNP分子标记的试剂在检测高山美利奴 羊周岁剪毛量中的应用， 其特征在于， 所述SNP分子标记 位于国际绵羊基因组Oar_v4.0版本 第5号染色体上第20 077683位点的碱基处； 突变碱基为G或C 。 2.一种检测与高山美利奴羊剪毛量相关的SNP分子标记的试剂在高山美利奴羊育种中 的应用， 其特征在于， 所述SNP分子标记位于国际绵羊基因组Oar_v4.0版本第5号染色体上 第20077683位点的碱基处； 突变碱基为G或C 。 3.如权利 要求1或2所述的应用， 其特征在于， 所述SNP 分子标记碱基为G时， 基因型为GG 或GC； 所述SNP分子标记碱基为C时， 基因型为CC； 所述基因型CC的高山美利奴羊周岁剪毛量 显著大于基因型GC或G G。 4.如权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述试剂包括用于扩增含有所述SNP分子标 记的核苷酸序列的引物对。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述含有SNP分子标记的核苷酸序列如SEQ   ID NO.1所示， 所述的SNP分子标记位于第194 位。 6.一种用于扩增如权利要求4所述的含有SNP分子标记的核苷酸序列的特异性引物对， 其特征在于， 所述的引物对序列为： F： 5'‑TTTTATCCACTTGACTGCA AC‑3'； R： 5'‑GCTAAAGACAAATAGAACCGTA‑3'。 7.如权利要求6所述的特异性引物对在用于检测高山美利奴羊周岁剪毛量， 或用于高 山美利奴羊育种中的应用。 8.如权利要求7所述的应用， 其特征在于， 实现检测高山美利奴羊周岁剪毛量， 或高山 美利奴羊育种的方法包括： (1)提取高山美利奴羊血 液基因组DNA为模板DNA； (2)利用特异性引物对， 将步骤(1)获得的待测高山美利奴羊血液的基因组DNA进行PCR 扩增， 获得PCR扩增产物； (3)将步骤(2)获得的PCR扩增产物纯化， 进行基因分型检测， 所述SNP分子标记碱基为G 时， 基因型为GG或GC； 所述SNP分子标记碱基为C时， 基因型为CC； 所述基因型CC的高山美利 奴羊周岁剪毛量显著大于基因型GC或G G。 9.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述PCR扩增体系25 μL： 金牌Mix  22 μL， 上、 下 游引物各1 μL， 模板DNA  1 μL。 10.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述PCR扩增程序： 98℃2min； 98℃10s， 54℃ 10s， 72℃10s， 共3 5个循环； 72℃延伸2mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114657266 A 2一种用于鉴定高 山美利奴羊周岁剪毛量的SNP分子标记及其 应用 技术领域 [0001]本发明属于分子遗传学技术领域， 具体涉及一种用于鉴定高山美利奴羊周岁剪毛 量的SNP分子标记及其应用。 背景技术 [0002]羊毛是指覆盖在羊体表面的一层具有纺织价值的纤维， 是皮肤的衍生物。 羊毛是 毛纺工业的主要原料， 约占毛 纺原料的97％， 主要用来加工服装面料、 毛线、 毛毯等产品。 在 羊毛生产和育种实践中， 羊毛性状是重要的经济性状， 主要包括毛长、 产毛量、 平均纤维直 径、 弯曲度、 断裂强度、 伸度、 净毛率、 剪毛量等多个指标， 与织造产品和经济效益密切相关。 由于人口增长， 羊毛的需求已经超过了供给。 随着市场需求的变化， 生产优质羊毛已成为山 羊育种的主 要目标。 [0003]高山美利奴羊是以甘肃高山细毛羊为母本， 澳洲美利奴羊为父本， 综合利用现代 先进生物技术和育种 技术， 经过20年育成的世界首例适应海拔2400～4070m高山寒旱生态 区， 羊毛纤维直径主体为19.0～21.5 μm 的美利奴羊新品种。 剪毛量也是决定其经济价值的 一项重要指标， 并且羊毛品质的客观检验在羊毛销售中越来越受到重视， 它 与纺织性能、 育 种和生产三 者间结合的越来越紧密。 [0004]研究表明， 羊毛性状受到遗传因素和非遗传因素的影响， 其中功能基因在毛囊发 育、 羊毛生长以及羊毛的理化特性方面发挥了重要的作用。 与传统育种方法相比， 分子标记 辅助选择方法具有许多优势， 例如可以明显缩短世代间隔， 提高选择准确性， 提前选择时 间， 同时对它低遗传力性状、 早期未表现的性状、 活体难以度量或者度量难度较大、 成本较 高的性状， 有良好的选择效果。 但是， 若想将分子标记辅助选择方法成功应用于剪毛量性状 的生产实践中， 需要寻找到调控产毛性状的关键基因或与之相连锁的分子遗传标记。 近年 来， 国内外细毛羊遗传育种专家 一直致力于挖掘控制羊毛性状的候选基因或分子标记的研 究， 但至今没有建立起细毛羊毛性状分子标记体系， 且一大批调控羊毛性状的重要基因资 源仍未得到有效的挖掘与利用。 [0005]为了加快羊毛产业的发展， 从分子水平上选择与羊剪毛量相关的候选基因或与 QTL相连锁的分子标记， 成为了育种工作者实现辅助选择的首要条件。 其中SNP是1996年由 美国麻省理工学院的人类基因组研究中心学者Lander 提出的一类 分子遗传标记， 主要 是指 基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态 性。 SNP表现出的多态 性仅涉及到 单个碱基的变异， 表现是有转换、 颠换、 插入和缺失等。 SNP分子标记具有遗传稳定、 突变率 低、 便于自动化检测等优点。 因此， 寻找与羊剪毛量紧密连锁的分子辅助标记基因， 筛选调 控剪毛量性状的功能基因， 是实现现代分子育种技术与常规育种技术有机结合， 提高繁殖 经济效率的有益手段。 [0006]本发明发现了一种影响高山美利奴羊周岁剪毛量的SNP分子标记， 位于国际绵羊 基因组Oar_v4.0版本第5号染色体上第20077683位点的碱基处， 突变碱基为G或C。 所述SNP说　明　书 1/6 页 3 CN 114657266 A 3