(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210399736.5 (22)申请日 2022.04.15 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114854870 A (43)申请公布日 2022.08.05 (73)专利权人 中国农业科 学院北京畜牧兽医研 究所 地址 100193 北京市海淀区 圆明园西路2号 (72)发明人 蒋琳　李业芳　张政凯　马月辉　 浦亚斌　 (74)专利代理 机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 专利代理师 黄爽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01)C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) 审查员 宋如生 (54)发明名称 与山羊耐热性状相关的SNP标记及其检测方 法 (57)摘要 本发明提供一种与山羊耐热性状相关的SNP 标记及其检测方法。 所述SNP分子标记位于山羊 第8号染色体第29824686bp处； 所述位点上存在 T/G碱基突变， 与山羊耐热性状具有显著的相关 性。 本发明的SNP标记能够用于山羊分子标记辅 助育种。 本发明提供的分子标记不受山羊的年 龄、 性别等限制， 可用于耐热山羊选育， 甚至刚出 生即可进行准确地筛选， 大大加快了耐热山羊的 育种进程。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 114854870 B 2022.12.06 CN 114854870 B 1.与山羊耐热性状相关的SNP标记， 其特征在于， 所述SNP标记含有山羊如SEQ  ID NO:3 所示序列第426bp处的多态性 为T/G的核苷酸序列。 2.根据权利 要求1所述的SNP标记， 其特征在于， 所述SNP标记包含的多态性位点的基因 型为GG的个体耐热性显著高于TG、 T T基因型。 3.用于检测权利要求1或2所述SNP标记的引物， 其特征在于， 包括如SEQ  ID NO:1所示 的正向引物和如SEQ  ID NO:2所示的反向引物。 4.含有权利要求3所述引物的检测试剂或试剂盒。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括dNTP  Mixture、 TaKaRa Ex Taq DNA聚合酶、 PCR反应缓冲液、 标准阳性模板中的至少一种。 6.鉴定或选 育耐热山羊品种的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 1)提取待测山羊的基因 组DNA； 2)以待测山羊的基因 组DNA为模板， 利用SEQ  ID NO:1‑2所示的引物进行PCR扩增反应； 3)分析PCR扩增产物。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中所用PCR扩增反应体系以50μl计 包括： 50～100ng/μl待测山羊的基因组DNA  1μl， 10pmol/μl正向引物和反向引物各1μl， 10mmol/L  dNTPs Mixture 1 μl， 1.25U/2 5 μl TaKaRa Ex Taq DNA聚合酶1 μl， 2 ×PCR反应缓 冲液25 μl和余 量的双蒸水。 8.根据权利 要求6所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中所用PCR扩增反应程序为： 95℃预 变性5min； 95℃变性30s， 55℃或60℃退火30s， 72℃延伸1 ‑2min， 共30 ‑35个循环； 72℃保温 2min。 9.根据权利 要求6‑8任一项所述的方法， 其特征在于， 步骤3)包括： 检测 PCR扩增产物第 426bp处的基因型， 基因型为G G的个体耐热性显著高于TG、 T T基因型。 10.权利要求1或2所述SNP标记、 权利要求3所述引物或权利要求4或5所述检测试剂或 试剂盒的以下任一应用： (1)用于耐热山羊品种的鉴定及改良； (2)用于山羊耐热性状早期预测； (3)用于与山羊耐热性状相关的分子标记辅助育种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854870 B 2与山羊耐热性状相关的SNP标记及其检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学及遗传育种领域， 具体地说， 涉及一种与山羊耐热性状相 关的SNP标记及其检测方法。 背景技术 [0002]NFIB基因编码的蛋白是GFAP的转录激活剂， 对大脑的正常发育至关重要。 该蛋白 可以识别并结合存在于病毒和细胞中启动子以及腺病毒复制起源的重复序列5' ‑ TTGGCNNNNNGCCAA ‑3'。 在高温和低温环境下山羊群体中进行选择信号筛选， 发现NFIB基因 座位的多态性变异对山羊热适应性的影响达 到显著水平。 [0003]随着全球气温逐步升高和集约化养殖加剧， 山羊对热环境的适应性问题逐渐成为 规模化养殖场不得不面临的一项挑战。 山 羊处于极端的高温环境下， 机体会出现热应激， 进 而在生理、 泌乳、 繁殖等环节给行业造成经济损失。 山 羊对热环境的适应性是一个复杂的生 物过程， 涉及到许多不同的生物过程和调节蛋白。 近年来， 分子遗传技术的飞速发展， 使DNA 分子标记技术在山羊遗传多样性研究中起着重要作用， 为更好地开 发和利用优良品种的优 良经济特性及保护和 合理的利用品种资源， 有必要开发山羊特异的分子标记， 应用于耐热 性山羊的选 育， 并为耐热性 山羊的分子 育种提供一定的理论依据。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供与山羊耐热性状相关的SNP标记及其检测方法。 [0005]为了实现本发明目的， 第一方面， 本发明提供一种与山羊耐热性状相关的SNP标 记， 所述SNP标记含有山羊如SEQ  ID NO:3所示序列第426bp处的多态性为T/G的核苷酸序 列。 [0006]所述SNP标记位于山羊第8号染色体第29824686bp处； 所述位点上存在T/G碱基突 变， 与山羊耐热性状具有显著的相关性； 所述SNP标记基于山羊基因组序列信息版本号 ASM170441v1， 2016年8月。 [0007]进一步地， 所述SNP标记包含的多态性位点的基因型为GG的个体耐热性显著高于 TG、 TT基因型。 [0008]第二方面， 本发明提供用于检测所述SNP标记的引物， 包括如SEQ  ID NO:1所示的 正向引物和如SEQ  ID NO:2所示的反向引物。 [0009]第三方面， 本发明提供含有所述引物的检测试剂或试剂盒。 [0010]进一步地， 所述试剂盒还包括dNTP  Mixture、 TaKaR a Ex Taq DNA聚合酶、 PCR反应 缓冲液、 标准阳性模板等中的至少一种。 [0011]第四方面， 本发明提供鉴定或选 育耐热山羊品种的方法， 包括以下步骤： [0012]1)提取待测山羊的基因 组DNA； [0013]2)以待测山羊的基因组DNA为模板， 利用SEQ  ID NO:1‑2所示的引物进行PCR扩增 反应；说　明　书 1/5 页 3 CN 114854870 B 3