(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210401707.8 (22)申请日 2022.04.18 (71)申请人 北京起源聚禾 生物科技有限公司 地址 102600 北京市大兴区中关村科技园 区大兴生物医药产业基地华佗路50号 院5号楼4层401室 (72)发明人 王林海　刘沛　 (74)专利代理 机构 北京同辉知识产权代理事务 所(普通合伙) 11357 专利代理师 孙艳敏 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 子宫内膜良恶性病变联合标志物、 检测引物 探针组及试剂盒 (57)摘要 本发明公开了子宫内膜良恶性病变联合标 志物、 检测引物探针组及试剂盒， 所述联合标志 物包括26个目标基因的特定甲基化区域， 针对这 些甲基化区域的检测引物和探针， 能够通过荧光 定量PCR来进行检测， 检测结果采用logistic回 归算法即可对子宫内膜良恶性病变的风险评估， 包括有效区分子宫肌瘤、 子宫肉瘤、 子宫内膜不 典型增生以及子宫内膜癌等良恶性病变。 本发明 通过多基因甲基化联合检测， 显著提高对子宫内 膜恶性病变的检测的灵敏度以及特异性。 本发明 试剂盒特别适用于以宫颈脱落细胞作为样本进 行子宫内膜良恶性病变的鉴别诊断， 具有取样简 单便捷、 检测速度快、 准确性高特异性 等优点。 权利要求书2页 说明书9页 序列表18页 附图1页 CN 114480661 A 2022.05.13 CN 114480661 A 1.子宫内膜良恶性病变联合标志物， 其特征在于， 包括以下26个目标基因的甲基化区 域： ADCY4基因甲基化区域： SEQ  ID NO:82， ADRA1A基因甲基化区域： SEQ  ID NO:83， AMPD3基因甲基化区域： SEQ  ID NO:84， CDO1基因甲基化区域： SEQ  ID NO:85， CELF4基因甲基化区域： SEQ  ID NO:86， CHAD基因甲基化区域： SEQ  ID NO:87， CYP26C1基因甲基化区域： SEQ  ID NO:88， DRD4基因甲基化区域： SEQ  ID NO:89， FZD7基因甲基化区域： SEQ  ID NO:90， GNA12基因甲基化区域： SEQ  ID NO:91， GRM6基因甲基化区域： SEQ  ID NO:92， GYPC基因甲基化区域： SEQ  ID NO:93， HAND2基因甲基化区域： SEQ  ID NO:94， HSPA1L基因甲基化区域： SEQ  ID NO:95， HS3ST2基因甲基化区域： SEQ  ID NO:96， ITGA5基因甲基化区域： SEQ  ID NO:97， LTB4R2基因甲基化区域： SEQ  ID NO:98， MAGI2基因甲基化区域： SEQ  ID NO:99， MTMR7基因甲基化区域： SEQ  ID NO:100， NDUFS2基因甲基化区域： SEQ  ID NO:101， NEFM基因甲基化区域： SEQ  ID NO:102， PTGDR基因甲基化区域： SEQ  ID NO:103， RASSF1基因甲基化区域： SEQ  ID NO:104， SPDYA基因甲基化区域： SEQ  ID NO:105， TJP2基因甲基化区域： SEQ  ID NO:106， TRH基因甲基化区域： SEQ  ID NO:107。 2.子宫内膜良恶性病变联合检测引物探针组， 其特征在于， 包括用于对应检测权利要 求1所述26个目标基因的 甲基化区域的 甲基化状态， 核苷酸序列如下 所示： ADCY4基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:1~3， ADRA1A基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:4~6， AMPD3基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:7~9， CDO1基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:10~12， CELF4基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:13~15， CHAD基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:16~18， CYP26C1基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:19~21， DRD4基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:22~24， FZD7基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:25~27，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114480661 A 2GNA12基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:28~30， GRM6基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:31~33， GYPC基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:34~36， HAND2基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:37~39， HSPA1L基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:40~42， HS3ST2基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:43~45， ITGA5基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:46~48， LTB4R2基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:49~51， MAGI2基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:52~54， MTMR7基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:55~57， NDUFS2基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:58~60， NEFM基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:61~63， PTGDR基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:64~66， RASSF1基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:67~69， SPDYA基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:70~72， TJP2基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:73~75， TRH基因甲基化区域对应 检测引物和探针为SEQ  ID NO:76~78； 所述探针的核苷酸序列5 ’端标记荧 光基团， 3 ’端标记淬灭基团。 3.根据权利要求2所述的引物探针组， 其特征在于， 还包括内参基因GAPDH的检测引物 和探针， 核苷酸序列如SEQ  ID NO:79~81所示， 内参基因检测探针的核苷酸序列5 ’端标记荧 光基团， 3 ’端标记淬灭基团， 同一检测体系中内参基因检测探针标记的荧光基团与标志物 基因检测探针标记的荧 光基团不同。 4.子宫内膜良恶性病变联合检测试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求2或3所述的引物 探针组。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括PCR反应液， 所述PCR反应液每一 人份由浓度1U/ μL的甲基化特性的Taq  DNA聚合酶0.5~1 μL、 浓度10  mM的dNTPs  2~5 μL、 浓 度2~5 mM 的Mg2+ 2~6 μL、 10×DNA聚合酶buf fer 5 μL和纯化水补足 15 μL组成。 6.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括样本甲基化前处理试剂， 所述样 本甲基化前处 理试剂为甲基化检测样本前处 理试剂盒， 备案号京大械备2020 0110号。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114480661 A 3