(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210408025.X (22)申请日 2022.04.19 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114507740 A (43)申请公布日 2022.05.17 (73)专利权人 广州滴纳生物科技有限公司 地址 510700 广东省广州市黄埔区伴河路 96号1栋619房 (72)发明人 阳卫超　黄利军　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 张灵莉 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 WO 2022003572 A1,202 2.01.06 US 954640 3 B1,2017.01.17 WO 2022003572 A1,202 2.01.06 US 20173 56051 A1,2017.12.14 CN 10897 7544 A,2018.12.1 1 CN 106232833 A,2016.12.14 CN 112538529 A,2021.0 3.23 CN 113454243 A,2021.09.28 CN 114317740 A,202 2.04.12WO 2021237896 A1,2021.12.02 WO 20120 31008 A2,2012.0 3.08 RU 2630669 C1,2017.09.1 1 WO 2021091239 A1,2021.0 5.14 US 2016090634 A1,2016.0 3.31 Jie Ding et al.Alcoho l Consumption Promotes the I nvasion and Pro liferation of Gastric Cancer. 《Journal of Nutriti onal Oncology》 .2019,第04卷(第04期), Yuan-Yuan Liu et al.L oss of fra gile histidine triad and ampl ification of 1p36.22 and 11p15.5 i n primary g astric adenocarcinomas. 《World Journal of Gastroentero logy》 .2012,第18卷(第3 3期), Juan Li et al.Discoveries of the specific expres sion of lncRNAs and mRNAs in hippocampus of rats after traumatic brain injury. 《Ibrai n》 .2021,第07 卷(第02 期), Ju Dong Yang et al.DNA Methylati on Markers for Detecti on of Cholangiocarcinoma: Discovery,Val idation, and Clinical Testi ng in Biliary Brushi ngs and Plas ma. 《Hepato logy Communications》 .2021,第0 5卷(第08 期), 审查员 张扬 (54)发明名称 用于胃肠癌诊断的生物标志物、 核酸产品和 试剂盒 (57)摘要 本发明涉及一种用于胃肠癌诊断的生物标 志物、 核酸产品和试剂盒。 该生物标志物选自 ADHFE1基因、 FAM19A4基因和VSTM2B基因中的至 少两种， 通过检测生物标志物的甲基化水平诊断 胃肠癌。 权利要求书1页 说明书18页 序列表2页 附图3页 CN 114507740 B 2022.07.29 CN 114507740 B 1.一种胃肠癌的生物标志物的检测引物对和探针组合， 其特征在于， 所述生物标志物 为ADHFE1基因、 FAM19A4基因和VSTM2B基因， 通过检测所述生物标志物的启动子至第一外显 子区域的 甲基化水平诊断 胃肠癌； 所述检测引物对和探针组合包括检测引物对， 所述检测引物对包括如下引物对： 用于 检测ADHFE1基因甲基化水平的ADHFE1引物对、 用于检测FAM19A4基因的甲基化水平的 FAM19A4引物对和用于检测VSTM2B基因甲基化水平的VSTM2B引物对， 所述ADHFE1引物对针 对ADHFE1基因的启动子至第一外显子区域设计， 所述FAM19A4引物对针对FAM19A4基因的启 动子至第一外显子区域设计， 所述VSTM2B引物对针对VSTM2B基因的启动子至第一外显子区 域设计； 所述ADHFE1引物对的核苷酸序列如SEQ  ID No： 1~2所示； 所述FAM19A4引物对的核 苷酸序列如SEQ  ID No： 3~4所示； 所述VSTM2B引物对的核苷酸序列如SEQ  ID No： 5~6所示； 所述检测引物对和探针组合还包括与所述检测引物对对应的检测探针， 与 所述检测引 物对对应的检测探针上连接有荧光基团； 与所述AD HFE1引物对对应的检测探针的核苷 酸序 列如SEQ ID No： 7所示； 与所述FAM19A4引物对对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ  ID No： 8所示； 与所述VSTM2B引物对 对应的检测探针的核苷酸序列如SEQ  ID No： 9所示。 2.根据权利要求1所述的检测引物对和探针组合， 其特征在于， 还包括内参引物对和与 所述内参引物对 对应的内参探针， 所述内参引物对 包括如下引物对中的至少一组： 针对ACTB基 因设计的ACTB引物对、 针对GAPDH基 因设计的GAPDH引物对、 针对ALDOA基因 设计的ALDOA引物对和针对PGK1基因设计的PGK1引物对； 所述内参探针上 连接有与所述检测探针不同的荧 光基团。 3.根据权利要求2所述的检测引物对和探针组合， 其特征在于， 所述ACTB引物对的核苷 酸序列如SEQ  ID No： 10~11所示， 与所述ACTB引物对对应的内参探针的核苷酸序列如SEQ   ID No： 12所示。 4.根据权利要求1~3任一项所述的检测引物对和探针组合， 其特征在于， 检测探针上连 接的荧光基团选自FAM、 H EX、 VIC、 C Y5、 ROX、 Texsa  Red、 JOE及Quasar  705中的一种。 5.一种用于胃肠癌诊断的试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求1~4任一项所述的检测引 物对和探针组合。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述胃肠癌 为胃癌、 结直肠癌和/或腺瘤 息肉。 7.根据权利要求5或6所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括核酸提取试剂、 甲基化转化试 剂、 质控试剂、 PCR反应试剂和 测序试剂中的至少一种。 8.根据权利 要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 所述PCR反应试剂包括PCR缓冲液、 dNTP、 MgCl2和TaqDNA聚合酶。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114507740 B 2用于胃肠癌诊断的生物标志物、 核酸产品和试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 特别是涉及一种用于胃肠癌诊断的生物标志物、 核酸 产品和试剂盒。 背景技术 [0002]由于胃肠道肿瘤早期症状多数不明显， 发病多较隐匿， 多数病人出现明显症状时 已属于中晚期， 且多伴有淋巴结转移。 其中： 8 0%的早期胃癌无症状， 部分病人可有消化不良 症状， 进展期胃癌最常见的症状是体重减轻 （约60%） 和上腹痛 （50%） ， 另有贫血、 食欲缺乏、 厌食、 乏力等症状。 结直肠癌发病率 从50岁开始明显上升， 75岁 ‑80岁达到高峰， 然后缓慢下 降， 但30岁以下的青年肠癌并非罕见。 肠癌起病也隐匿， 早期仅见粪便隐血阳性， 之后可出 现排便习惯与粪便性状改变、 腹痛、 指检时可发现直肠肿块， 另有贫血、 低热、 进行性消瘦、 恶病质、 腹腔积液等症状。 等到以上症状出现时， 往往病情已不是早期， 而临床上大多数胃 肠癌患者都是在出现症状后才就诊。 因此， 目前胃肠道肿瘤患者 生存率较低。 [0003]如果患者能在无症状时主动进行胃肠癌筛查， 早期发现率就会明显提高， 预后就 越好。 因此， 胃肠癌筛查相当重要。 然而， 传统的临床诊断主要借助于影像学检查和肿瘤标 志物进行胃肠癌早期筛查， 诊断敏感性低， 不 适用于早筛早诊。 发明内容 [0004]基于此， 有必要针对提供一种胃肠癌的生物标志物， 通过检测血液中上述生物标 志物的甲基化水平来诊断胃肠癌， 可以改善传统的胃肠癌诊断产品的灵敏度较低的问题， 利于胃肠癌的早筛早诊。 [0005]此外， 还提供一种用于诊断 胃肠癌的核酸产品和诊断试剂盒。 [0006]一种胃肠癌的生物标志物， 所述生物标志物选自ADHFE1基因、 FAM19A4基因和 VSTM2B基因中的至少两种， 通过检测所述 生物标志 物的甲基化水平诊断 胃肠癌。 [0007]经验证， 选用ADHFE1基因、 FAM19A4基因和VSTM2B基因中的至少两种作为诊断胃肠 癌的生物标志 物， 通过检测这些 标志物的甲基化水平来诊断 胃肠癌， 灵敏度高， 特异性 好。 [0008]