(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210416571.8 (22)申请日 2022.04.20 (71)申请人 黑龙江八一农垦大 学 地址 163300 黑龙江省大庆市龙凤区新 风 路5号 (72)发明人 杜吉到　张琦　任心雨　张文静　 韩金鹏　唐钰鑫　褚多　马悦　 张欣林　李思琪　杨一鸣　吴贵生　 耿思琦　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 专利代理师 王颖 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种基于SSR分子标记构建小豆的指纹图谱 (57)摘要 本发明公开了一种基于SSR分子标记构建小 豆的指纹图谱， 涉及植物品种鉴别技术领域。 所 述分子标记包括VaSSR01 ‑VaSSR13， 分别通过如 SEQ ID NO： 1‑26所示的引物对扩增得到。 本发明 还公开了如SEQ  ID NO： 1‑SEQ ID NO： 26所示的 引物组合、 包括该引物组合的试剂盒以及小豆的 指纹图谱的构建方法， 通过构建的DNA指纹图谱 构建成小豆的指纹图谱， 该指纹图谱可以100％ 准确鉴定不同品种的小豆， 检测效果好且节约时 间、 成本等优点， 本发明可为小豆品种DNA指纹鉴 定提供技 术支持。 权利要求书1页 说明书7页 序列表5页 附图1页 CN 115011715 A 2022.09.06 CN 115011715 A 1.一种用于鉴别小豆的分子标记组合， 其特征在于， 所述分子标记包括VaSSR01、 VaSSR02、 VaSSR03、 VaSSR04、 VaSSR05、 VaSSR06、 VaSSR07、 VaSSR08、 VaSSR09、 VaSSR10、 VaSSR11、 VaSSR12和VaSSR13； 所述VaSSR01通过如SEQ  ID NO： 1‑2所示引物对扩增得到， 所 述VaSSR02通过如SEQ  ID NO： 3‑4所示引物对扩增得到， 所述VaSSR03通过如SEQ  ID NO： 5‑6 所示引物对扩增得到， 所述VaSSR04通过如SEQ  ID NO： 7‑8所示引物对扩增得到， 所述 VaSSR05通过如SEQ  ID NO： 9‑10所示引物对扩增得到， 所述VaSSR06通过如SEQ  ID NO： 11‑ 12所示引物对扩增得到， 所述VaSSR07通过如SEQ  ID NO： 13‑14所示引物对扩增得到， 所述 VaSSR08通过如SEQ  ID NO： 15‑16所示引物对扩增得到， 所述VaSSR09通过如SEQ  ID NO： 17‑ 18所示引物对扩增得到， 所述VaSSR10通过如SEQ  ID NO： 19‑20所示引物对扩增得到， 所述 VaSSR11通过如SEQ  ID NO： 21‑22所示引物对扩增得到， 所述VaSSR12通过如SEQ  ID NO： 23‑ 24所示引物对 扩增得到， 所述VaS SR13通过如SEQ  ID NO： 25‑26所示引物对 扩增得到 。 2.一种用于鉴别小豆的引物 组合， 其特征在于， 包括13对特异性引物对， 所述引物对的 核苷酸序列分别如SEQ  ID NO： 1‑SEQ ID NO： 26所示。 3.一种用于鉴别小豆的试剂盒， 其特 征在于， 包 含权利要求2所示的引物组合。 4.一种小豆指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 包括： 采集不同生长习性的小豆并进行 编号， 利用权利要求2所述的引物组合对不同品种小豆的DNA进 行PCR扩增， 再对扩增产 物进 行电泳检测， 根据电泳检测结果构建所述小豆指纹图谱。 5.如权利 要求4所述的构建方法， 其特征在于， 小豆品种包括资源库号为XD017的北23、 资源库号为XD021的北26、 资源库号为XD035的山东枣庄农家种、 资源库号为XD036的宝清 红、 资源库号为XD045的LZX031、 资源库号为XD050的LZX051、 资源库号为XD053的红小豆、 资 源库号为XD054的LZX063、 资源库号为XD075的红珍珠、 资源库号为XD084的HD2、 资源库号为 XD099的FBX01、 资源库号为XD113的F JMS01、 资源库号为XD116的FLD01、 资源库号为XD120的 天津红、 资源库号为XD128的A485、 资源库号为XD130的杂豆、 资源库号为XD132的红小豆1 ‑ 1、 资源库号为XD143的保876 ‑16、 资源库号为XD166的红小豆、 资源库号为XD178的H05、 资源 库号为XD180的H06、 资源库号为XD182的H07、 资源库号为XD184的冀红9218、 资源库号为 XD188的H09‑1、 资源库号 为XD199的H14‑1。 6.根据权利要求4所述的构建方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应体系为： DNA模板 0.8 μL， l0pmo1/L上游引物 0.2 μL， 10pmo1/L下游引物 0.2 μL， 10 ×PCR buffer 2 μL， 25mmol/L  Mg2+1.2 μL， 10mmol/L  dNTP 0.5 μL， 5U/ μL  Taq酶0.2 μL， ddH2O 14.4 μL； 所述PCR  buffer不含 Mg2+。 7.根据权利 要求4所述的构 建方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应程序为： 94℃预变 性3min； 94℃变性3 0s， 56℃退火3 0s， 72℃延伸3 0s， 共30个循环； 72℃延伸5mi n， 4℃保存。 8.根据权利要求1所述的分子标记组合、 权利要求2所述的引物组合或权利要求3所述 的试剂盒在获取小豆指纹图谱中的应用。 9.根据权利要求1所述的分子标记 组合、 权利要求2所述的引物 组合、 权利要求3所述的 试剂盒或权利要求 4‑7任一项所述的构建方法在鉴别小豆品种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115011715 A 2一种基于S SR分子标记构建 小豆的指纹图谱 技术领域 [0001]本发明涉及植物品种鉴别领域， 特别是涉及一种基于SSR分子标记构建小豆的指 纹图谱。 背景技术 [0002]小豆(Vigna  angularis)起源于中国， 隶属 于豇豆属(Vigna)栽培种的一种。 我国 种植小豆至少已有2000多年的历史。 小豆属于杂粮， 小豆除富含蛋白质 、 维生素、 矿质元素 等营养物质外， 适当的食用小豆有利尿消肿的作用， 是广受欢迎的医食两用作 物。 我国的小 豆种质资源丰富， 截至2008年， 国家种质库保存量近5000份， 由于不同地区之间品种交流频 繁， 从而导致了其种类和品种繁多， 来源较为复杂， 存在大量 “同名异种 ”和“一品多名 ”种 质。 小豆品种混乱、 真假难辨， 许多生产者不能区分出当地种植的品种， 小豆种子生产者能 否生产出优质高产的小豆品质无法得到保障， 从而造成严重损失。 多年来， 品种鉴定是以形 态学标记 为依据的。 这种方法虽然简单经济， 但周期 长， 花费大， 受季节限制， 而且很多性状 的表现受栽培措施及环 境因子影响， 从而制约了鉴定的准确性。 DNA分子标记 技术则具有高 效、 准确、 不受环境条件影响、 实验操作简单等优点， 已广泛应用于植物品种真实性鉴定及 纯度检测研究。 SSR标记是近年来发展起来的建立在PCR基础上的第二代分子标记。 由于SSR 分子标记具有数量丰富、 多态性高、 遗传共显性、 谱带扩增稳定、 精度高、 检测时间短、 技术 成熟等特点， 已应用于作物遗传学研究。 目前， 小豆中也有利用分子标记技术进行研究的， 但是没有具体只针对小豆品种开发的S SR分子标记以及利用S SR分子标记构建的技 术体系。 发明内容 [0003]本发明的目的是提供一种基于SSR分子标记构建小豆的指纹图谱， 以解决上述现 有技术存在的问题， 本发明构建的指纹图谱能够准确鉴别不同品种的小豆 。 [0004]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0005]本发明提供一种用于鉴别小豆的分子标记组合， 所述分子标记包括VaSSR01、 VaSSR02、 VaSSR03、 VaSSR04、 VaSSR05、 VaSSR06、 VaSSR07、 VaSSR08、 VaSSR09、 VaSSR10、 VaSSR11、 VaSSR12和VaSSR13； 所述VaSSR01通过如SEQ  ID NO： 1‑2所示引物对扩增得到， 所 述VaSSR02通过如SEQ  ID NO： 3‑4所示引物对扩增得到， 所述VaSSR03通过如SEQ  ID NO： 5‑6 所示引物对扩增得到， 所述VaSSR04通过如SEQ  ID NO： 7‑8所示引物对扩增得到， 所述 VaSSR05通过如SEQ  ID NO： 9‑10所示引物对扩增得到， 所述VaSSR06通过如SEQ  ID NO： 11‑ 12所示引物对扩增得到， 所述VaSSR07通过如SEQ  ID NO： 13‑14所示引物对扩增得到， 所述 VaSSR08通过如SEQ  ID NO： 15‑16所示引物对扩增得到， 所述VaSSR09通过如SEQ  ID NO： 17‑ 18所示引物对扩增得到， 所述VaSSR10通过如SEQ  ID NO： 19‑2