(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210416534.7 (22)申请日 2022.04.20 (71)申请人 青岛市中心血站 地址 266071 山东省青岛市 市南区隆德路9 号 (72)发明人 朱于莉　孙晓通　冯智慧　 (74)专利代理 机构 北京识然知识产权代理事务 所(普通合伙) 11975 专利代理师 曾庆国 (51)Int.Cl. C12Q 1/6881(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种筛查Di(b-)稀有血型的分子标记及检 测方法 (57)摘要 本发明提供一种筛查Di(b ‑)稀有血型的分 子标记及检测方法， 所使用的引物对和探针序 列， 其中正向引 物的核苷酸序列为SEQ  IDNO:1， 反向引物的序列为SEQ  ID NO:2； 探针的序列分 别为SEQ IDNO:3和SEQ  ID NO:4。 本发明的方法， 可以实现对罕见的稀有Di(b ‑)血型进行安全、 特 异、 快速、 灵敏、 简单、 高通量的快速检测， 从而弥 补现有传统检测技术的不足。 并且 此方法非常适 用于献血员的快速检测， 与PCR法相比， qRT ‑PCR 法敏感度更高， 特异性更 强， 操作简单， 不需要进 行凝胶电泳， 大大缩短了反应时间。 同时， 由于不 存在Di(a ‑b‑)血型个体， 所以筛选稀有Di(b ‑)血 型只需要挑选仅出现蓝色荧光的样 本， 结果判断 简单快速高效。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图1页 CN 114606305 A 2022.06.10 CN 114606305 A 1.一种检测Diego血型的引物对和探针组， 其特征在于， 所述的引物对和探针序列， 其 中正向引物的核苷酸序列为SEQ  ID NO:1， 反向引物的序列为SEQ  ID NO:2； 探针的序列分 别为SEQ ID NO:3和SEQ  ID NO:4。 2.如权利要求1所述的引物对和探针组， 其特征在于， 所述的序列为SEQ  ID NO:3的探 针， 其5′端使用FAM标记， 3 ′端用MGB进行 标记。 3.如权利要求1所述的引物对和探针组， 其特征在于， 所述的序列为SEQ  ID NO:4的探 针， 其5′端用VIC进行 标记， 3′端用MGB进行 标记。 4.权利要求1‑3任一项所述的引物对和探针组在制备用于快速筛查Di(b ‑)血型的试剂 盒中的应用。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述的试剂盒为qRT ‑PCR TaqMan MGB探针检 测试剂盒。 6.一种qRT ‑PCR TaqMan MGB探针检测试剂盒， 其特征在于， 所述的试剂盒中包含有权 利要求1‑3任一项所述的引物对和探针组。 7.一种筛查Di(b ‑)血型的qRT ‑PCR的检测方法， 其特征在于， 所述的方法是使用权利要 求1‑3任一项所述的引物对和探针组进行检测， PCR反应条件为94℃3min； 94℃5sec， 60℃ 30sec， 40cycles； 所述的方法的结果描述及判定:仅出现蓝色荧光， 样品判断为Di(a+b ‑)表型； 仅出现绿 色荧光， 样品判断为Di(a ‑b+)表型； 出现 绿色和蓝色荧 光， 样本判断为Di(a+b+)表型。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114606305 A 2一种筛查Di(b ‑)稀有血型的分子标记及检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于稀有血型检测技术领域， 具体涉及一种筛查Di(b ‑)稀有血型的分子标 记及检测方法。 背景技术 [0002]Diego(Di)血型系统是目前43个血型系统中的一员， 在国际输血协会 (International  Society of Blood Transfusion,ISBT)中位于第10位。 Diego血型系统含 有23个抗原， 其中对偶抗原Dia和Dib抗原免疫原性较强， 是最具有临床意 义的一对。 [0003]Dib抗原在不同人种均属于高频抗原， 缺失Dib抗原的Di(b ‑)表型十分罕见， 属于 稀有血型， 目前亚洲人群中检出率约为0.2％， 比 “熊猫血”RhD阴性的概率还低一半。 这种稀 有的Di(b ‑)血型个体一旦输血或妊娠， 极易产生抗 ‑Dib抗体。 抗 ‑Dib抗体既可以引起新生 儿溶血病， 又可以引发溶血性输血不良反应， 因此及时发现Di(b ‑)稀有血型并做到抗原匹 配性输注是解决临床安全输血问题的关键 。 [0004]由于Di(b ‑)血型的罕见性， 抗 ‑Dib血清来源困难， 目前无商品化的抗 ‑Dib抗体， 同 时不规则抗体筛选和鉴定的谱细胞中也不包含Di(b ‑)表型， 导致常规的血清学检测方法无 法鉴定个 体的Diego血 型， 因此研发一种快速 筛选Di(b‑)血型的分子生物学 方法迫在眉睫。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种筛查Di(b ‑)稀有血型的分子标记及检测方法， 以实现对 稀有血型Di(b‑)进行特异、 灵敏、 快速、 方便的筛 选， 确保临床安全用血。 [0006]本发明首先提供一种检测Diego血型的引物对和探针组， 其中引物对和探针序列 信息如下： [0007]正向引物SLC4A1  forward： [0008]5′ ‑CTTATTCACGGGCATCCAGA‑3′(SEQ ID NO:1) [0009]反向引物SLC4A1  reverse： [0010]5′ ‑CACAGTGAG GATGAGGACGAA‑3′(SEQ ID NO:2) [0011]探针SLC4A1 ‑P‑DIA‑T： [0012]5′ ‑CCACGCTGGCCT‑3′(SEQ ID NO:3) [0013]5′端使用FAM基团标记， 3 ′端用MGB基团进行 标记； [0014]探针SLC4A1 ‑P‑DIB‑C： [0015]5′ ‑CACGCCGGCCTC‑3′(SEQ ID NO:4) [0016]其中探针SLC4A1 ‑P‑DIB‑C的5′端用VIC基团进行 标记， 3′端用MGB基团进行 标记。 [0017]其中探针有两条， 根据S LC4A1基因2561bp处的不同分别在 5′端标记不同的荧光基 团(T型为蓝色的FAM荧 光， C型为绿色的VIC荧 光)， 3′端均为非荧 光猝灭MGB基团。 [0018]本发明所提供的引物对和探针组可用于制备用于快速 筛查Di(b ‑)血型的试剂盒； [0019]所述的试剂盒， 优选为qRT ‑PCR TaqMan MGB探针检测试剂盒。说　明　书 1/5 页 3 CN 114606305 A 3