(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210417036.4 (22)申请日 2022.04.20 (71)申请人 中国医学 科学院血液病医院 （中国 医学科学院血液学研究所） 地址 300000 天津市和平区南京路28 8号 (72)发明人 秘营昌　侯降雪　宋洋　刘凯奇　 王建祥　 (74)专利代理 机构 天津英扬昊睿专利代理事务 所(普通合伙) 12227 专利代理师 吴扬 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) (54)发明名称 RARG-HNRNPM融合基因检测及临床应用试剂 盒 (57)摘要 本发明为一种RARG ‑HNRNPM融合基因检测及 临床应用试剂盒， 其特征在于其包含基于Taqman 探针的变异型 急性早幼粒细胞白血病诊断和/或 检测试剂盒检测RARG ‑HNRNPM融合基因绝对定量 的试剂， 利用本发明对变异型急性早幼粒细胞白 血进行检测， 首次发现并验证了变异型APL中特 殊融合基因RARG ‑HNRNPM， 可用于检测患者标本 中该融合基因表达水平， 可用于疾病确诊和MRD 进行监测。 权利要求书2页 说明书5页 序列表2页 附图3页 CN 115058515 A 2022.09.16 CN 115058515 A 1.一种RARG ‑HNRNPM融合基因检测及临床应用试剂盒， 其特征在于其包含基于Taqman 探针的变异型急性早幼粒细胞白血病诊断和/或检测试剂盒检测RARG ‑HNRNPM融合基因绝 对定量的试剂， 该试剂盒包括上游引物、 下游引物、 Taqman探针、 内参、 PCR反应混合液、 DEPC ‑H2O。 2.按照权利要求1所述的一种RA RG‑HNRNPM融合基因检测及临床应用试剂盒， 其特征在 于上游引物为RARG ‑HNRNPM上游引物； 下游引物为RARG ‑HNRNPM下游引物； 探针为RARG ‑HNRNPM探针： 一条RARG ‑HNRNPM融合基因的Taqman探针； 内参为内参GAP DH； PCR反应混合液为PCR反应缓冲液。 3.按照权利要求2所述的一种RA RG‑HNRNPM融合基因检测及临床应用试剂盒， 其特征在 于 RARG‑HNRNPM上游引物为ATGA AAATCACCGACCTCCG； RARG‑HNRNPM下游引物为C CTTGACTTTCCTTCAGCGT； RARG‑HNRNPM探针为AGCACTA AGGTTGGTGAGGTAAC； 内参GAPDH为Hs02786 624_g1 inventoried(Ap plied Biosystems)； PCR反应缓冲液为TaqmanTM Gene Expression  Master Mix 4369016(Applied   Biosystems)， 包括反应所需的dNTP,Ca2+,Mg2+等； 阳性对照为包 含带有RARG ‑HNRNPM融合基因的目的质粒 标准品； 阴性对照为APL细胞系NB4的cDNA。 4.按照权利要求1所述的一种RA RG‑HNRNPM融合基因检测及临床应用试剂盒， 其特征在 于 所述RARG ‑HNRNPM融合基 因Taqman探针的5 ’端标记有FAM基团， Taqman探针3 ’端标记有 TAM基团； 所述内参基因GAP DH的Taqman探针5 ’端标记有FAM基团， 3 ’端标记有NFQ基团。 5.按照权利要求4所述的一种RA RG‑HNRNPM融合基因检测及临床应用试剂盒， 其特征在 于所述FAM基团为荧光报告基团NFQ基团为淬灭基团， 当待测样品中存在目标DNA分子时， 探 针与目标DNA分子结合， 探针降解释放荧光报告基团发出荧光， 待测样 品中不存在目标DNA 分子， 荧光报告基团淬灭， 不发出荧 光。 6.按照权利要求1所述的一种RA RG‑HNRNPM融合基因检测及临床应用试剂盒， 其特征在 于试剂盒具体操作步骤： 一、 标本采集、 分离单个核细胞， 提取 单个核细胞mRNA； 二、 单个核细胞mRNA逆转录为cDNA作为待测样品； 三、 配置反应体系， 于实时荧光PCR仪上机检测， 反应条件： 50℃预热2min； 95℃预变性 10min； 95℃15s， 6 0℃1min， 反应40循环； 95℃15s， 6 0℃1min， 95℃1s； 四、 将上述得到的结果进行分析： 所得结果使用QuantStudioTMDesign&Analysis   Software进行分析， 试剂盒判别结果如下： ①当内参、 阳性样本对照和阴性样本对照均正常时， 待测样本无目的基因扩增， 信号曲权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115058515 A 2线则判为结果阴性； ②当内参、 阳性样本对照和阴性样本对照均正常时， 待测样本有目的基因扩增， 信号曲 线则判为结果阳性； ③当内参和(或)阳性样本对照和(或)阴性样本对照出现异常时， 待测样本目的基因扩 增信号曲线无意 义， 需调整后重新扩增。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115058515 A 3