(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210436541.3 (22)申请日 2022.04.22 (71)申请人 江苏先声医学诊断有限公司 地址 210023 江苏省南京市玄武区玄武大 道699-18号28幢 申请人 南京先声医学检验实验室有限公司 　 北京先声医学检验实验室有限公司 (72)发明人 李珊　李振中　周水莲　潘吾思　 程彪　李诗濛　任用　 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) G16B 30/10(2019.01) (54)发明名称 适于ONT测序 平台的用于感样本中鼻病毒检 测的靶向区段和引物组及其应用 (57)摘要 本申请涉及生物信息学技术领域， 具体基于 生信引物设计提供了一种适于ONT测序平台的用 于感样本中鼻病毒检测的靶向区段和引物组及 其应用。 本发明引物能快速、 高效、 高特异、 高灵 敏地从呼吸道感染体征和症状的患者中识别和 鉴别鼻病毒不同类型。 权利要求书2页 说明书9页 序列表3页 附图5页 CN 114921588 A 2022.08.19 CN 114921588 A 1.一种适于ONT测序平台的、 且用于感染样本中鼻病毒检测的靶序列， 其特征在于， 所 述引靶序列同时包含人鼻病毒的5 ’NCR和VP基因序列， 所述靶序列如SEQ  IDNO.15‑16所示 序列。 2.一种适于ONT测序平台的感染样本 中鼻病毒检测的引物组合， 其特征在于， 所述引物 针对人鼻病毒的5 ’NCR和VP基因序列， 所述引物组合包括如下引物： (1)HRV‑A引物： 正向引物： CG GTAMCYTTGTRCGCCWGTT(SEQ ID NO.1)； 反向引物： ARDGCATCSG GBARYTTCCACC(SEQ ID NO.2)； (2)HRV‑C引物： 正向引物:GKWCA AGYACTTCTGTTTCCC(SEQ ID NO.3)； 反向引物:G GTGWTCKTG GAATCCATGCT(SEQ  ID NO.4)； 其中， M,Y,R,W,S,B,D为简并碱基， 遵 从简并碱基密码表， M(A/C),K(G/T),Y(C/T),R(A/ G),W(A/T),S(G/ C),B(G/T/ C),D(G/A/T)。 3.根据权利要求2所述的引物组合， 其特征在于， 所述引物扩增的人鼻病毒的5 ’NCR和 VP基因序列如SEQ  ID NO.15‑16所示。 4.权利要求2 ‑3任一所述的引物组合， 其特征在于， 所述(1)HRV ‑A和(2)HRV ‑C引物序列 分别如下： HRV‑A引物： 正向引物F.1:CG GTAACTTTGTACGCCAGTT(SEQ ID NO.5) 反向引物R.1:AG GGCATCCGGCAATTTCCACC(SEQ ID NO.6) 正向引物F.2:CG GTAACCTTGTACGCCAGTT(SEQ ID NO.7) 反向引物R.2:AG GGCATCCGGTAATTTCCACC(SEQ ID NO.8) 正向引物F.3:CG GTAACTTTGTACGCCAGTT(SEQ ID NO.9) 反向引物R.3:AGTGCATC CGGCAATTTCCACC(SEQ ID NO.10) HRV‑C引物： 正向引物F.4:G GACAAGCACTTCTGTTTCCC(SEQ ID NO.11) 反向引物R.4:G GTGTTCTTGGAATCCATGCT(SEQ  ID NO.12) 正向引物F.5:G GTCAAGTACTTCTGTTTCCC(SEQ ID NO.13) 反向引物R.5:G GTGTTCGTGGAATCCATGCT(SEQ  ID NO.14)。 5.根据权利要求2 ‑4任一所述引物组合， 其特征在于， 所述引物能够特异性扩增人鼻病 毒基因， 同时能够兼容 性扩增种属内不同序列的人 鼻病毒， 保证种属特异和种内兼容。 6.一种适于ONT测序平台的、 且用于感染样本中鼻病 毒检测的检测试剂盒， 其特征在于 包含权利要求1 ‑4任一所述引物组合， 或权利要求5所述的靶序列。 7.权利要求1 ‑4任一所述的引物 组合或权利要求5所述的靶序列在制备适于ONT测序平 台的、 且用于感染样本中鼻病毒检测的检测试剂盒种的应用。 8.权利要求1 ‑4任一所述的引物组合或权利要求5所述的靶序列在感染样本鼻病毒检 测中的应用。 9.一种基于ONT测序平台的感染样本鼻病 毒检测方法， 其特征在于， 包含利用权利要求 1‑4任一所述引物组合或权利要求6所述试剂盒对感染样本DNA进行扩增的步骤。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114921588 A 210.根据权利要求9所述的检测方法， 其特 征在于， 进一 步包括测序和生信分析步骤。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114921588 A 3