(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210454593.3 (22)申请日 2022.04.24 (71)申请人 连云港市妇幼保健院 （连云港市第 三人民医院） 地址 222000 江苏省连云港市海州区秦 东 门大街669号 (72)发明人 薛娟　 (74)专利代理 机构 连云港乐诚专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 3243 0 专利代理师 曹进 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/72(2006.01) (54)发明名称 一种基于RPA—LFS快速检测近平滑念珠菌 的引物探 针组合及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种基于RPA—LFS快速检测 近平滑念 珠菌的引物探针组合及其应用， 属于生 物检测技术领域， 包 括FKS2‑F4/R2/P引物探针组 合， 本研究能够和qPCR检测结构相同， 通过本发 明的研究对外界条件依赖性较小， 解决了现有近 平滑念珠菌诊断速度慢、 条依赖性高的技术问 题， 主要应用于近平滑念 珠菌的检测， 能够快速、 灵敏、 实时的现场检测近平 滑念珠菌 。 权利要求书1页 说明书11页 附图2页 CN 114606342 A 2022.06.10 CN 114606342 A 1.一种基于RPA—LFS快速检测近平滑念珠菌的引物探针组合， 其特征在于， 包括FKS2 ‑ F4/R2/P引物探针组合； 所述F KS2‑F4/R2/P引物探针组合中的 FKS2‑F4的序列为： CTCAGGACAAGAATTTGGGCTTCCCTTCGAT； FKS2‑R2的序列为： AATATACTCAC CACGACAAAATATCAACGAG； FKS2‑P的序列为： AAAATGGAGCTAGAGAGC CAAAATGTAGAGTGA[THF]AT TAGCTGGCAAGCC‑C3 spacer。 2.权利要求1所述的引物探针组合在近平滑念珠菌的RPA ‑LFS检测引物探针组合检测 中的应用或检测试剂盒制备中的应用。 3.一种基于RPA—LFS快速检测近平滑念珠菌的引物探针组合的应用， 其特征在于， 采 用FKS2‑F4/R2/P检测出近平 滑念珠菌 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114606342 A 2一种基于R PA—LFS快速检测近 平滑念珠菌的引物探针组合及 其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物检测技术领域， 具体涉及一种基于 RPA—LFS快速检测平滑念珠菌 的引物探针组合及其应用。 背景技术 [0002]近几十年来， 由念珠菌引起的医院感染发生率显著上升。 在这个属中， 近平滑念珠 菌是发病率最显着增加的物种， 导致新生儿和重症监护病房患者中10 ‑25％的念珠菌血症。 近平滑念珠菌感染与使用医疗器械有关， 例如中心静脉导管、 肠胃外营养管理和卫生保健 工作者接触等(Arikan  et al.2019； Goemaere  et al.2018)。 近平滑念珠菌归于真菌界、 半 知菌亚门、 芽孢菌纲、 隐球酵母目、 隐球酵母科， 假丝酵母菌属， 是医院感染分离出的第二或 第三最常见的念珠菌相关物种， 该菌 极易引发念珠菌病， 在低体重新生儿中占主导地位， 其 次是危重患者或癌症患者， 患者被感染主要通过侵入性手术， 例如中心静脉导管放置、 手术 和肠外营养等(Y acoub et al.2016； Toth  et al.2017)。 近几十年来侵袭性念珠菌病的发 病率有所增加， 在欧洲、 亚洲和南美洲的一些医院， 由近平滑念珠菌引发念珠菌病的检出率 甚至超过白色念珠菌(T óth et al.2019)， 甚至在一些医院超过白色念珠菌。 目前， 临床上 常用于该菌的鉴定方法为传统真菌培养法， 以及基于DNA扩增的PCR限制性片段长度多态 性 (PCR‑RFLP)， 随机扩增多态性DNA(RAPD)、 实时PCR、 内含子长度的PCR分析多态性， 另外基质 辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI ‑TOF MS)， 泛真菌标志物的测序分析和近年来兴起 的等温检测等也被应用于该菌的检测。 由于近平滑念珠菌感染病程进展迅速， 因此亟需快 速、 灵敏、 实时的现场检测方法满足临床诊断的迫切需求。 [0003]传统真菌培养法是真菌感染性疾病诊断的金标准， 随着分子诊断技术的不断发 展， 基于DNA扩增的PCR限制性片段长度多态性(PCR ‑RFLP)(Neji  et al.2017)， 随机扩增多 态性DNA(RAPD)(Al ‑Tekreeti  et al.2018)、 实时PCR(Souza  et al.2012)、 内含子长度的 PCR分析多态性(Feng  et al.2014)， 以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱  (MALDI‑ TOF MS)(Ferreira  et al.2011)， 泛真菌标志物的测序分析都被应用于近平滑念 珠菌的临 床检测中(Guinea  et al.2021)。 同时， 等温扩增由于不受仪器和实验室场 景限制， 更是在 现场检测中越来越多的受到重视。 目前所报道的等温扩增技术主要有环介导等温扩增技术 (LAMP)(Fallahi  et al.2020)、 依赖于核酸序列的扩增技术(Nuclear  acid sequence ‑ based amplification， NASBA)(Huang  et al.2019)、 滚环扩增技术(Rolling  circle  DNAamplification，  RCA)(Carinelli  et al.2017)、 单引物扩展技术(Single  primer  isothermal  amplification， SPIA)  (Yang et al.2021)、 依赖于解旋酶等温扩增技术 (Helicase ‑dependent  Isothermal  DNA Amplification,HAD)(Jeong  et al.2009)、 链替 代扩增技术(Strand  displaced  amplification,  SDA)(Zhan g et al.2017)等。 重组酶聚 合酶扩增(Recombinase  Polymerase  Amplication， RPA)  技术是最近兴起 的恒温扩增技 术， 能够兼顾以上方法的优点， 弥补不 足， 满足快速、 特异、 灵敏及便携的快速诊断需求的检说　明　书 1/11 页 3 CN 114606342 A 3