(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210433329.1 (22)申请日 2022.04.24 (71)申请人 常州先趋医疗科技有限公司 地址 213000 江苏省常州市武进区常武中 路18-56号常州科教城联想控股联泓 新材料创新研发大厦40 3 (72)发明人 关国良　陈巧玲　吴婧　汪建雄　 (74)专利代理 机构 北京细软智谷知识产权代理 有限责任公司 1 1471 专利代理师 刘静荣 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 用于检测单增李斯特菌的引物组及其应用 (57)摘要 本发明属于食品安全检测领域， 具体涉及用 于检测单增李斯特菌的引物组及其应用。 本发明 的用于检测单增李斯特菌的引物组， 其核苷酸序 列如SEQ IDNO.1‑SEQ ID NO.4所示。 与现有的 PCR扩增荧光检测技术比较， 本发明设计针对单 增李斯特菌hlyA基因的环介导等温扩增(LAMP) 引物， 实现样本核酸的快速扩增， 灵敏度和特异 性均得到显著提高； 本发明的方法操作简便， 实 验仪器要求较低， 在基层或家庭中具有广阔的推 广应用前 景。 权利要求书1页 说明书8页 序列表2页 CN 114686611 A 2022.07.01 CN 114686611 A 1.用于检测单增李斯特菌的引物组， 其特 征在于， 所述引物组包括以下引物： SEQ ID NO.1:5’ ‑TTCGGCGCAATCAGTGA A‑3’, SEQ ID NO.2:5’ ‑GGAAGGTCTTGTAGGTTCATTAACAGGGAAAATGCAAGAAGAAGTC‑3’, SEQ ID NO.3:5’ ‑TCGGCAAAGCTGTTACTAAAGAGTGAGATATATGCAG GAGGAT‑3’, SEQ ID NO.4:5’ ‑TAAACTTGACGGCCATACGC‑3’。 2.根据权利要求1所述的用于检测单增 李斯特菌的引物组， 其特征在于， 所述引物组还 包括探针， 所述探针的核苷酸序列如下： SEQ ID NO.5:5’ ‑GAAAAATCTGG‑3’。 3.权利要求1或2所述的引物组的应用。 4.根据权利要求1或2所述的 的引物组在制备检测单增李斯特菌试剂盒中的应用。 5.根据权利要求1或2所述的引物组在检测单增李斯特菌中的应用。 6.检测单增李斯特菌的方法， 其特征在于， 所述方法包括使用权利要求1或2所述的引 物组， 并通过环介导等温扩增 ‑生物传感芯片 ‑人工智能技术平台对待测样品进 行检测的步 骤。 7.根据权利要求6所述的检测单增李斯特菌的方法， 其特征在于， 所述环介导等温扩增 的程序为： 将待测样品注入微流控芯片的LAMP扩增腔体后， 在60 ‑70℃条件下， 扩增20 ‑ 40min。 8.根据权利要求6 ‑7任一项所述的检测单增李斯特菌的方法， 其特征在于， 环介导等温 扩增的扩增产物与生物传感芯片上 的探针结合， 生物化学信号转化成电信号， 并由人工智 能技术平台输出检测结果。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114686611 A 2用于检测单增李斯特菌的引物组及其应用 技术领域 [0001]本发明属于食品安全检测领域， 具体涉及用于检测单增李斯特菌的引物组及 其应 用。 背景技术 [0002]单核细胞增生李斯特菌又称单增李斯特菌， 是一种引起人畜共患病和食源性疾病 的病原菌。 人食用了被单增李 斯特菌污染的食物后， 会引起恶心、 头痛、 发烧、 腹痛等一般性 细菌感染引起的症状， 除此之外， 可能还会引起脑膜炎、 脊髓 炎、 败血症等； 孕妇食用了李 斯 特菌后会造成流产等较为严重的情况， 小孩和老人因免疫力低下， 易受到单增李斯特菌感 染， 其死亡率高达30％。 单增李 斯特菌可通过粪 ‑口途径污染， 也可通过眼睛、 皮肤黏膜 等途 径感染。 该菌在4℃环境下仍可生长， 是冰箱中冷藏食物的 “杀手”， 威胁了人类的健康。 因 此， 建立快速检测食物中是否存在单增李斯特菌的检测方法对人类健康有着十 分重要的意 义。 [0003]目前， 用于检测 单增李斯特菌的方法主要有细菌的分离鉴定、 PCR扩增检测法， 其 具有准确度高的特点， 但需要很长的时间及专业的技术性人员， 并且其需要的实验设备体 积大、 成本高， 需要在实验室中完成检测。 此外， PCR扩增前， DNA提取是必需的步骤， 从而难 以在基层或家 庭中普及应用。 [0004]LAMP等温扩增技术在食品安全行业有一定的应用， 尤其是在快速筛查方面， 但该 方法假阳性高， 在灵敏度和特异性方面无法做到和PCR一样高的精度， 所以LAMP等 温扩增技 术在食品安全检测行业还没有广泛使用。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一组检测单增李斯特菌的引物组、 生物探针组。 [0006]本发明的再一目的在于提供 上述引物探针组的应用。 [0007]本发明的再一目的在于提供检测单增李斯特菌的方法。 [0008]本发明针对单增李斯特菌hlyA基因设计4条特异性引物， 能够针对靶基因6个区域 进行识别。 [0009]根据本发明具体实施方式的用于检测单增李斯特菌的引物组， 所述引物组包括以 下引物： [0010]SEQ ID NO.1:5’ ‑TTCGGCGCAATCAGTGA A‑3’, [0011]SEQ ID NO.2:5’ ‑GGAAGGTCTTGTAGGTTCATTAACAGGGAAAATGCAAGAAGAAGTC ‑3’,SEQ  ID NO.3:5’ ‑TCGGCAAAGCTGTTACTAAAGAGTGAGATATATGCAGGAGGAT ‑3’,SEQ ID NO.4:5’ ‑ TAAACTTGACGGCCATACGC‑3’。 [0012]根据本发明具体实施方式的用于检测单增李斯特菌的引物组， 所述引物组还包括 探针， 所述探针的核苷酸序列如下： [0013]SEQ ID NO.5:5’ ‑GAAAAATCTGG‑3’。说　明　书 1/8 页 3 CN 114686611 A 3