(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210442124.X (22)申请日 2022.04.25 (71)申请人 郑州安图生物工程股份有限公司 地址 450016 河南省郑州市经济技 术开发 区经北一路87号 (72)发明人 牛炳棵　段晓蒙　张娟丽　李江浩　 乔晓芳　李晓霞　郑业焕　付光宇　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 张柳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6876(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 引物探针组合以及试剂盒 (57)摘要 本发明涉及医学检测技术领域， 特别涉及引 物探针组合以及试剂盒。 本发明提供了一种快速 检测人CYP2C19基因多态性的方法和试剂盒， 具 体涉及基因多态性检测特异性引物、 探针和试剂 盒。 所述引物和探针包 括CYP2C19*2引物及探针、 CYP2C19*3引物及探针、 CYP2C19*17引物及探针、 内控引物及探针。 本发明的引物、 探针和试剂盒 具有特异性强、 灵敏度高、 操作简单的特点， 可准 确检出低值0.1ng/μL的基因组DNA 。 本发明还 提 供一种检测试剂盒， 包含CYP2C19基因多态性检 测特异引物、 探 针、 dNTPs、 rTth酶及UDG酶。 权利要求书2页 说明书15页 序列表8页 附图10页 CN 114807337 A 2022.07.29 CN 114807337 A 1.引物探针组， 其特 征在于， 包括： (I)、 上游引物具有如SEQ  ID No.1、 SEQ  ID No.5、 SEQ  ID No.9、 SEQ  ID No.10和/或 SEQ ID No.13任意所示的核苷酸序列； 和/或 (II)、 下游引物具有SEQ  ID No.2、 SEQ  ID No.3、 SEQ  ID No.6、 SEQ  ID No.7、 SEQ  ID  No.11和/或SEQ  ID No.14任意所示的核苷酸序列； 和/或 (III)、 探针具有如SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.8、 SEQ  ID No.12和/ 或SEQ ID No.15任意 所示的核苷酸序列； (IV)、 具有如(I)～(III)任意所示的核苷酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个碱基 获得的核苷酸序列， 且功能与(I)～(I II)任意所示的核苷酸序列的功能相同； 和/或 (V)、 具有与(I)～(IV)任意所示的核苷酸序列至少有80％同源性的核苷酸序列； 所述多个为2个至10个。 2.如权利要求1所述的引物探针组在制备检测人CYP2C19基因多态性的试剂、 试剂盒 和/或装置中的应用。 3.如权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述试剂、 试剂盒和/或装置包括PCR反应液 W、 PCR反应液M和/或PCR反应液E； 所述PCR反应液W包括具有如SEQ  ID No.1、 SEQ  ID No.2、 SEQ  ID No.5、 SEQ  ID No.6、 SEQ ID No.9、 SEQ  ID No.11、 SEQ  ID No.13和/或SEQ  ID No.14任意所示的核苷酸序列的 引物、 具有如SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.8、 SEQ  ID No.12和/或SEQ  ID No.15任意所示的核 苷酸序列的探针， 和/或PCR反应缓冲液； 和/或 所述PCR反应液M包括具有如SEQ  ID No.1、 SEQ  ID No.3、 SEQ  ID No.5、 SEQ  ID No.7、 SEQ ID No.10、 SEQ  ID No.11、 SEQ  ID No.13和/或SEQ  ID No.14任意所示的核苷酸序列的 引物、 具有如SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.8、 SEQ  ID No.12和/或SEQ  ID No.15任意所示的核 苷酸序列的探针， 和/或PCR反应缓冲液； 和/或 所述PCR反应液E包括醋酸锰； 和/或 所述PCR反应缓冲液包括dNTPs、 甘油、 超纯水、 酶、 金属离子、 渗透保护剂、 表面活性剂、 稳定剂、 防腐剂和/或 缓冲液。 4.如权利要求2或3所述的应用， 其特征在于， 所述试剂、 试剂盒和/或装置的反应体系 和反应程序包括： 所述反应体系包括： 20 μL的所述PCR反应液W或所述PCR反应液M、 10 μL的所述PCR反应液 E和/或50 μL的核酸模板； 和/或 所述反应程序包括： 5.如权利要求2至4任一项所述的应用， 其特征在于， 所述引物探针组、 试剂、 试剂盒和/ 或装置的检测结果的判断标准包括： 当具有如SEQ  ID No.12所示核苷酸序列的探针 所属通道的检测结果： CtW－CtM＜‑2.5时 为CYP2C19*17CC型； CtW－CtM＞2.5时为CYP2C19*17TT型； |CtW－CtM|≤2.5时为CYP2C19*17CT权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114807337 A 2型； 和/或 当具有如SEQ  ID No.8所示核苷酸序列的探针所属通道的检测结果： CtW－CtM＜‑2.5时 为CYP2C19*3GG型； CtW－CtM＞2.5时为CYP2C19*3AA型； |CtW－CtM|≤2.5时为CYP2C19*3GA型； 和/或 当具有如SEQ  ID No.4所示核苷酸序列的探针所属通道的检测结果： CtW－CtM＜‑2.5时 为CYP2C19*2G G型； CtW－CtM＞2.5时为C YP2C19*2 AA型； |CtW－CtM|≤2.5时为C YP2C19*2GA型。 6.试剂， 其特征在于， 包括如权利要求1所述的引物探针组以及可接受的辅料和/或助 剂。 7.如权利 要求6所述的试剂， 其特征在于， 所述试剂还包括PCR反应液W、 PCR反应液M和/ 或PCR反应液E； 所述PCR反应液W包括具有如SEQ  ID No.1、 SEQ  ID No.2、 SEQ  ID No.5、 SEQ  ID No.6、 SEQ ID No.9、 SEQ  ID No.11、 SEQ  ID No.13和/或SEQ  ID No.14任意所示的核苷酸序列的 引物、 具有如SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.8、 SEQ  ID No.12和/或SEQ  ID No.15任意所示的核 苷酸序列的探针， 和/或PCR反应缓冲液； 和/或 所述PCR反应液M包括具有如SEQ  ID No.1、 SEQ  ID No.3、 SEQ  ID No.5、 SEQ  ID No.7、 SEQ ID No.10、 SEQ  ID No.11、 SEQ  ID No.13和/或SEQ  ID No.14任意所示的核苷酸序列的 引物、 具有如SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.8、 SEQ  ID No.12和/或SEQ  ID No.15任意所示的核 苷酸序列的探针， 和/或PCR反应缓冲液； 和/或 所述PCR反应液E包括醋酸锰； 和/或 所述PCR反应缓冲液包括dNTPs、 甘油、 超纯水、 酶、 金属离子、 渗透保护剂、 表面活性剂、 稳定剂、 防腐剂和/或 缓冲液。 8.试剂盒， 其特征在于， 包括如权利要求1所述的引物探针组， 以及可接受 的辅料和/或 助剂。 9.如权利 要求8所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括PCR反应液W、 PCR反应液 M和/或PCR反应液E； 所述PCR反应液W包括具有如SEQ  ID No.1、 SEQ  ID No.2、 SEQ  ID No.5、 SEQ  ID No.6、 SEQ ID No.9、 SEQ  ID No.11、 SEQ  ID No.13和/或SEQ  ID No.14任意所示的核苷酸序列的 引物、 具有如SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.8、 SEQ  ID No.12和/或SEQ  ID No.15任意所示的核 苷酸序列的探针， 和/或PCR反应缓冲液； 和/或 所述PCR反应液M包括具有如SEQ  ID No.1、 SEQ  ID No.3、 SEQ  ID No.5、 SEQ  ID No.7、 SEQ ID No.10、 SEQ  ID No.11、 SEQ  ID No.13和/或SEQ  ID No.14任意所示的核苷酸序列的 引物、 具有如SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.8、 SEQ  ID No.12和/或SEQ  ID No.15任意所示的核 苷酸序列的探针， 和/或PCR反应缓冲液； 和/或 所述PCR反应液E包括醋酸锰； 和/或 所述PCR反应缓冲液包括dNTPs、 甘油、 超纯水、 酶、 金属离子、 渗透保护剂、 表面活性剂、 稳定剂、 防腐剂和/或 缓冲液。 10.检测方法， 其特征在于， 包括使用如权利要求1所述的引物探针组、 如权利要求6或7 所述的试剂和/或如权利要求8或9所述的试剂盒对待测样品进 行实时荧光P CR， 根据如权利 要求2至5任意所述的应用的所述判断标准对待测样品进行C YP2C19基因多态性 鉴定。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114807337 A 3