(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210480148.4 (22)申请日 2022.04.25 (71)申请人 中国人民解 放军军事科学院军事医 学研究院 地址 100850 北京市海淀区太平路27号 (72)发明人 沈丽萍　戚振华　王琪　李亚琼　 王治东　 (74)专利代理 机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权 代理有限公司 2321 1 专利代理师 邓宇 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种snoRNA生物标志物的应用及相关试剂 盒 (57)摘要 一种snoRNA生物标志物的应用及相关试剂 盒， 属于生物医药技术领域。 为了探索snoRNAs在 CRC中的生物学功能和机制， 进而 为CRC诊断和治 疗提供新的思路， 本发明通过对SNORD15B和 SNORA5C这两个基因在CRC组织和邻近正常组织 中表达量进行分析， 发现SNORD15B和SNORA5C这 两个基因在CRC组织和 邻近正常组织中的差异表 达， 并通过体外实验证实它们对CRC细胞增殖和 克隆形成具有促进作用。 通过临床队列分析， 发 现SNORD15B和SNORA5C高表达与CRC患者临床预 后负相关。 本研究数据表明， SN ORD15B和SNORA 5C 是CRC发病过程中发挥促癌作用的snoRNA分子， 是潜在的CRC诊断和预后标志 物。 权利要求书1页 说明书9页 序列表3页 附图6页 CN 114959028 A 2022.08.30 CN 114959028 A 1.一种snoRNA生物标志物在制备结直肠癌 检测试剂盒中的应用， 所述snoRNA生物标志 物为核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示的SNORD 15B基因或核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示的 SNORA5C基因。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述试剂盒用于结直肠癌诊断和/或预后 评估； 与正常癌旁组织相比， 所述SNORD15B基因或SNORA5C基因在结直肠癌细胞或组织中高 表达。 3.扩增权利要求1所述SNORD15B基因的引物在制备 结直肠癌检测试剂盒中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述试剂盒用于结直肠癌诊断和/或预后 评估； 与正常癌旁组织相比， 所述SNORD15B基因在结直肠癌细胞或组织中 高表达。 5.根据权利要求3所述的应用， 其特 征在于， 所述引物的序列为： 正向： 5'‑GTCACGTC CTGCTCTTGGTC‑3'； 反向： 5'‑CACTTCTGCCAAAGGAACTCG‑3'。 6.扩增权利要求1所述SNORA5 C基因的引物在制备 结直肠癌检测试剂盒中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述试剂盒用于结直肠癌诊断和/或预后 评估； 与正常癌旁组织相比， 所述SNORA5 C基因在结直肠癌细胞或组织中 高表达。 8.根据权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 所述引物的序列为： 正向： 5'‑TTCAGTGCCCGTTTCTGTCATA ‑3'； 反向： 5'‑CAAACTTATCCCCAGGTCCCAG‑3'。 9.一种结直肠癌诊断试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利 要求1所述的SNORD15B 基因或SNORA5 C基因或权利要求5所述的引物或权利要求8所述的引物。 10.一种结直肠癌预后评估试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要求1所述的 SNORD15B基因或SNORA5 C基因或权利要求5所述的引物或权利要求8所述的引物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114959028 A 2一种snoRNA生物标志物的应用及相关试剂盒 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及一种snoRNA生物标志物的应用及相关试 剂盒。 背景技术 [0002]结直肠癌(C RC)是一种常见的恶性肿瘤， 最常发生在直肠和乙状结肠， 目前已成为 世界范围内严重的公共卫生问题。 根据WHO的2020年全球癌症数据， 全球新增194万CRC病 例， 其中有94万死亡病例， 其 发病率和死亡率均居第二位。 流行病学研究表明， CRC的发病机 制受到多种因素的影响， 如遗传、 年龄、 生活方式、 环 境、 肠道微生物组和慢 性炎症等。 在CRC 的早期阶段， 难以观察到明显的临床症状， 但随着疾病的发展， 会出现诸如肠道习惯改变、 便血、 腹泻和腹痛等表现。 在CRC的晚期， 会 出现贫血和体重下降等全身性消耗症状。 在早期 阶段诊断CRC是消除肿瘤或延长患者生存时间的关键步骤。 目前， 粪便隐血试验(FOBT)和结 肠镜检查仍然是早期大肠癌诊断的最重要方法(E.Dekker,P.J.Tanis,J.L.A.Vleugels, P.M.Kasi,M.B.Wallace,Colorectal  cancer,Lancet(London,England)394(2019)1467 ‑ 1480.10.1016/s0140 ‑6736(19)32 319‑0.)。 因此， 迫切需要更有效的方法来进行CRC的早期 诊断或预后预测。 [0003]非编码RNAs(nc RNAs)是一类无明显开放阅读框、 蛋白质编码能力很弱或无编码能 力的RNA分子， 占人类基因组转录产物的90％以上， 在生物体内发挥多种生物学功能。 核仁 小RNA(Small nucleolar  RNAs,snoRNAs是小的ncRNAs， 长度约为60 ‑300个核苷酸， 主要位 于核小体中。 在脊椎动物(如人类)中， sno RNAs大多由宿主基因(编码或非编码基因)内含子 区域的可变剪接衍生而来。 根据snoRNAs分子中不同的保守结构域， 主要分为两类： C/D盒 snoRNA和H/ACA盒snoRNA。 snoRNAs的主要功能是指导rRNA或snRNA转录后修饰， C/D盒 snoRNAs主要参与2' ‑O‑甲基化， 而H /ACA盒sn oRNAs主要参与假 酸化。 [0004]近几年研究表明， snoRNAs可以在多个层面调控肿瘤疾病过程， 而不仅仅是曾经认 为的那样充当"管家基因"。 随着研 究证据的积累， snoRNAs在肿 瘤诊断、 预后评估和靶向治 疗方面显示出良好的前景， 使sno RNAs相关的生物学功能研究成为肿瘤学领域的新热点。 研 究人员发现， snoRNAs在黑色素瘤、 卵巢癌、 肝癌、 肺癌、 乳腺癌等恶性肿瘤及其他疾病中均 存在异常表达(T. J. B.Rogelj,Functional  diversity  of small  nucleolar  RNAs,Nucleic  acids research  48(2020)1627 ‑1651.10.1093/nar /gkz1140.) (G.Romano,D.Veneziano,M.Acunzo,C.M.Croce,Small  non‑coding RNA and cancer, Carcinogenesi s 38(2017)485 ‑491.10.1093/car cin/bgx02 6.)。 最近的研究表明， snoRNAs 在CRC疾病过程中的作用应受到重视。 如SNORA21和SNORA42过量表达会促进CRC细胞的增 殖、 迁移和侵袭， 也会增强肿瘤的发生率， 其上调表达会导致患者生存率下降(Y.Okugawa, Y.Toiyama,S.Toden,H.Mitoma,T.Nagasaka,K.Tanaka,Y.Inoue,M.Kusunoki,C.R.Boland, A.Goel,Clinical  significance  of SNORA42 as an oncogene  and a prognostic   biomarker  in colorectal  cancer,Gut  66(2017)107 ‑117.10.1136/gutjnl ‑2015‑说　明　书 1/9 页 3 CN 114959028 A 3