(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210461172.3 (22)申请日 2022.04.28 (71)申请人 中国热带农业科 学院椰子 研究所 地址 571339 海南省文昌市文清大道496号 (72)发明人 王永　肖勇　杨耀东　吴翼　 李志瑛　刘蕊　 (74)专利代理 机构 海口翔翔专利事务有限公司 46001 专利代理师 张耀婷 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 鉴别椰子香味性状的分子标记的引物、 试剂 盒、 应用及方法 (57)摘要 本发明属于种苗质量控制及新品种选育领 域， 公开了一种鉴别椰子香味性状的分子标记的 引物、 试剂盒、 应用及方法， 包括第一引物组和第 二引物组， 第一引物组由正向引物F和反向引物 R1组成， 第二引物组由正向引物F和方向引物R2 组成。 先提取拟检测椰子样品的DNA， 再进行PCR 扩增， 扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离并拍照， 即可根据电泳条带鉴别拟检测样品是否具有香 味性状。 本发 明可以在育苗阶段剔除不具有香味 性状的劣质种苗， 无需等到多年以后发现果实不 香时再剔除高大的成年植株， 从而避免了前期种 植过程中人力、 物力和财力的浪费， 对于香水椰 子种苗质量控制及分子辅助育种具有重要意义， 在椰子种苗繁育和新品种选育领域应用前景广 阔。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 114634994 A 2022.06.17 CN 114634994 A 1.一种鉴别椰子香味性状的分子标记的引物， 其特征在于： 包括第一引物组和第二引 物组， 所述第一引物组由正向引物F和反向引物R1组成， 第二引物组由正向引物F和方向引 物R2组成， 其中， 正向引物F的核酸序列为： CGACTGCGAAGAGTGAAGGT(5' ‑3')； 反向引物R1的 核酸序列为： GTTTATCCATACAATTCCGGG(5 ' ‑3 ')； 反向引物R2的核酸序列为： GTTTATCCATACAATTCCGGC(5'‑3')。 2.一种鉴别椰子香味性状的试剂盒， 其特征在于： 包含权利要求1所述第一引物组、 第 二引物组其中的一种或两种。 3.一种权利要求1或2所述引物组在育苗阶段进行早期鉴定椰子香味性状的应用。 4.一种鉴别椰子香味性状的方法， 其特 征在于， 步骤如下： 步骤S1、 提取椰子种苗或大树的DNA； 步骤S2、 使用权利要求2所述的引物组对上述DNA进行PCR扩增； 步骤S3、 使用琼脂糖凝胶电泳分离上述PCR扩增产物； 步骤S4、 根据电泳图中的条带情况， 鉴别所检测的椰子样品是否具有香味性状： 使用第 一引物组的PCR扩增产物在1095bp 处有条带的是具有香 味性状的样 品， 相同位置无条带出 现的是不具有香 味性状的样 品； 使用第二引物组的PCR扩增产物在1095bp 处有条带的是不 具有香味性状的样品， 相同位置有条带出现的是具有香味性状的样品； 综合上述两个引物 组的鉴别结果， 即可准确鉴别椰子香味性状。 5.根据权利 要求4所述的鉴别椰子香味性状的方法， 其特征在于： 步骤S2中， PCR扩增程 序为： 95℃ 预变性2min； 95℃变性30s， 55℃退火45s， 72℃延伸1min， 重复循环30次； 72℃延 伸5min。 6.根据权利要求4所述的鉴别椰子香味性状的方法， 其特征在于： 步骤S3中， 电泳条件 为： 2％琼脂糖凝胶， 140V、 20mi n； 紫外照射并拍照。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114634994 A 2鉴别椰子香味性状的分子标记的引物、 试剂盒、 应用及方 法 技术领域 [0001]本发明属于种苗质量控制及新品种选育领域， 具体涉及 一种用于鉴别椰子香味性 状的分子标记的引物、 试剂盒、 应用及方法。 背景技术 [0002]椰子(Cocos  nucifera)是棕榈科椰子属中唯一的一个种， 单子叶多年生常绿乔 木， 是热带地区重要的木本油料作物和食品能源作物， 经济寿命达40 ‑80年， 自然寿命可达 100年以上， 被誉为热 带地区的“生命之树 ”。 [0003]椰子可分为高种椰子、 矮种椰子以及介于两者之间的杂 交种， 其中矮种椰子可按 果皮颜色分为黄矮、 红矮和绿矮， 而 “香水椰子 ”属于绿矮中的一种， 椰子水、 椰肉以及叶片 都有令人愉悦的糯米香味， 在市场上备 受欢迎， 价格约为其他绿矮椰子的两倍， 我国每年从 泰国、 马来西亚等东南亚国家进口大量香水椰子。 研究表明， 香水椰子的香味来源于2 ‑乙 酰‑1‑吡咯啉(2 ‑acetyl‑1‑pyrroline， 2AP)， 受椰子氨基醛脱氢酶(CnAMADH2)等位基因控 制。 [0004]单核苷酸多态性(Single  nucleoti de polymorphism， SNP)主要是指在基因组水 平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性， 在植物农艺性状关联分析、 生物遗传连 锁图谱构建、 分子标记分子育种等领域应用广泛。 与其他分子标记相比， SNP分子标记分布 广泛、 准确性高， 能有效避免形态学和环境因素的干扰， 从而实现对靶基因及目标性状的早 期鉴定。 [0005]椰子主要靠种果育苗， 导致种苗纯度不高、 品种一致性差， 椰子从种苗定植到开花 结果通常需要3 ‑5年， 而等到品种性状稳定并确认椰子果是否具有香 味可能需要6 ‑8年。 种 植管理过程中需要花费大量的人力、 物力和财力， 种苗品种不纯可能会给椰子种植户造成 重大经济损失， 并打击种植户或投资者对香水椰子推广种植的积极性， 阻碍椰子种植业发 展。 此外， 对拟改良的目标性状进行早期鉴定是缩短多年生作物育种周期的重要技术手段。 我国20世纪90年代引进香水椰子后， 经多年引种试种培育了 “文椰4号”香水椰子品种， 在 鲜 果市场备受关注， 海南省近年来已推广种植近4万亩。 但目前种苗市场混乱， 香水椰子的种 苗质量无法保障。 因此， 开发鉴别椰子香味性状的分子标记及方法对于香水椰子种苗鉴定 及分子标记辅助育种具有重要意 义。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供一种鉴别椰子香味性状的分子标记的引物， 对于香水椰子 种苗鉴定以及分子标记辅助育种具有重要意义， 在椰子种苗质量控制以及新品种选育领域 应用前景广阔。 [0007]为了实现上述目的， 本发明的技术方案为： 提供一种鉴别椰子香味性状的分子标 记的引物， 包括第一引物组和第二引物组， 所述第一引物组由正向引物F和反向引物R1组 成， 第二引物组由正向引物F和方向引物R2组成， 其中， 正向引物F的核酸序列为：说　明　书 1/3 页 3 CN 114634994 A 3