(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210463156.8 (22)申请日 2022.04.29 (71)申请人 中南大学湘雅医院 地址 410008 湖南省长 沙市湘雅路87号 (72)发明人 贺曦　刘彦伶　王俊岭　袁艳春　 (74)专利代理 机构 长沙湘之星知识产权代理事 务所(普通 合伙) 43271 专利代理师 刘向丹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种肌萎缩侧索硬化致病基因、 检测试剂盒 及引物组 (57)摘要 本发明涉及生物 技术及医学领域， 具体公开 了一种肌萎缩侧索硬化致病基因， 致病基因为突 变的TRMT2B基因， 所述突变的 TRMT2B基因与野 生 型TRMT2B基因的差异包括1个突变， 突变为野生 型TRMT2B基因编码区第1356号碱基G突变为A， 突 变的TRMT2B基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所 示。 本发明还公开了一种肌萎缩侧索硬化检测产 品检测试剂盒及肌萎缩侧索硬化检测产品检测 引物组， 其中， 产品检测盒检测灵敏度佳， 准确度 高， 引物组可应用于肌萎缩侧索硬化检测产品如 芯片、 试剂盒 或生物试剂的制备。 权利要求书1页 说明书8页 序列表6页 附图4页 CN 114703278 A 2022.07.05 CN 114703278 A 1.一种肌萎缩侧索硬化致病基因， 其特征在于， 致病基因为突变的 TRMT2B基因， 所述突 变的TRMT2B基因与野生型 TRMT2B基因的差异包括1个突变， 突变为野生型 TRMT2B基因编码 区第1356号碱基G突变为A， 突变的 TRMT2B基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.根据权利 要求1所述的肌萎缩侧索硬化致病基因， 其特征在于， 突变的 TRMT2B基因能 通过影响线粒体功能引发肌 萎缩侧索硬化的发生。 3.一种肌萎缩侧索硬化检测产品检测试剂盒， 其特征在于， 基于如权利要求1所述的 TRMT2B基因设计， 包括核苷酸序列号如如SEQ  ID NO.25所示的正向扩增引物B12B13 ‑F及核 苷酸序列号如SEQ  ID NO.26所示的反向扩增引物。 4.根据权利要求3所述的肌萎缩侧索硬化检测产品检测试剂 盒， 其特征在于， 检测试剂 盒还包括DNA扩增酶、 缓冲液、 dNTP混合物。 5.根据权利要求4所述的肌萎缩侧索硬化检测产品检测试剂盒， 其特征在于， 所述DNA 扩增酶为Taq  DNA聚合酶， Taq  DNA聚合酶的浓度为1U/ μL； 所述缓冲液为MgCl2溶液， MgCl2溶 液的浓度为10mM； 所述dNTP混合物的浓度为10  mM。 6.根据权利要求5所述的肌萎缩侧索硬化检测产品检测试剂 盒， 其特征在于， 检测试剂 盒中， 引物组、 DNA扩增酶、 缓冲液、 水的体积比为2:1:2:  4。 7.根据权利要求6所述的肌萎缩侧索硬化检测产品检测试剂 盒， 其特征在于， 检测试剂 盒使用时， 加入的DNA模板与缓冲液的体积比为1:1， DNA模板的浓度为5 0ng/ μL。 8.一种肌萎缩侧索硬化检测产品检测引物组， 其特征在于， 基于如权利要求1所述的突 变的TRMT2B基因设计， 包括如下14组扩增引物对中的至少一组， 14组扩增引物对为： 。 9.根据权利要求8所示的肌萎缩侧索硬化检测产品检测引物组， 其特征在于， 当引物 组 包含如SEQ  ID NO.27所示的引物B14 ‑F及如SEQ  ID NO.28所示的引物B14 ‑R时， 引物组还包 括测序引物， 测序引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.29所示。 10.如权利要求8 或9所示的引物组在肌萎缩侧索硬化检测产品中的应用， 其特征在于， 所述产品包括芯片、 试剂盒 或生物试剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114703278 A 2一种肌萎缩侧索硬化致病基因、 检测试剂盒及引物组 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术及医学领域， 具体涉及一种肌萎缩侧索硬化致病基因、 检测 试剂盒及引物组。 背景技术 [0002]肌萎缩侧索硬化 （Amyotrophic  Lateral Sclerosis,  ALS） 是一种罕见的严重神 经退行性疾病， 其病理表征为上运动神经元与下运动神经元， 包括大脑皮质、 锥体束、 皮质 脑干束、 脑干运动核团以及脊髓前角运动神经元等进行性的退变； 临床表现为肌肉的萎缩 与无力等。 ALS好发于55 ‑65岁人群， 25岁以下发病的为青少年型ALS （Juvenile  ALS,  JALS） 。 在中国人群中， ALS的发病率大约为0.8 ‑1.2/10万人， 并呈现逐年升高的趋势， 严重 威胁我国国民健康。 ALS的诊断主要依靠El  Escorial 或者Awaji量表， 通过评估进行性无力 累及的范围， 上运动神经元与下运动神经元的累及情况， 并辅助其他检查来进行诊断。 当 前， ALS的治疗 方式十分有限， 目前仅能通过药物Riluzole和Edaravone延缓疾病的进展， 然 而， 即使按时用药， 绝大多数患者 仍在发病后3 ‑5年内死亡。 [0003]目前， ALS的发病机制尚不清楚。 环境因素， 包括吸烟、 性别因素、 创伤及毒物暴露 等都与ALS的发病相关。 而越来越多的证据 表明， 遗传因素在ALS发病中起了重要的作用。 双 生子的研究表明， ALS的遗传度为61%。 通过对家族性ALS （Familial  ALS， FALS） 及散发患者 的研究， 目前已鉴定了多个与ALS相关的基因， 包括了 SOD1、SETX、ALS2、FUS、OPTN、ATXN2、 SQSTM1、 C9orf72、 SPTLC1、 SIGMAR1 等40余个基因。 其 中，SOD1、 TDP43、 FUS 及C9orf72基因的 变异， 在约60%的FALS以及11%的ALS散发患者中被鉴定到。 C9orf72基因GGGGCC拷贝数变异 是欧美人群中ALS最常见的致病基因， 约33.7%的FALS患者以及5.1%的散发患者均携带该基 因的变异。 而最早定位并克隆的ALS致病 基因SOD1， 在中国人群中大约有30.6%的FALS患者 以及1.5%的散发患者均携带该基因的变异。 尽管如此， 超过90%患者的遗传学病因仍不清 楚。 ALS的遗传学病因复杂， 临床异质性高， 因此， 定位更多的疾病相关基因， 为其诊断、 预防 与治疗提供新的思路， 并开发相关的检测产品用于快速检测迫在眉睫。 发明内容 [0004]本发明所解决的技术问题在于提供一种肌萎缩侧 索硬化新的致病基因， 并提供了 该致病基因在制备肌 萎缩侧索硬化检测产品中的应用。 [0005]本发明所解决的技 术问题采用以下技 术方案来实现： 一种肌萎缩侧索硬化致病基因， 致病基因为突变的 TRMT2B基因， 所述突变的 TRMT2B基因与野生型 TRMT2B基因的差异包括1个突变， 突变为野生型 TRMT2B基因编码区第 1356号碱基G突变为A， 突变的 TRMT2B基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 [0006]进一步地， 突变的 TRMT2B基因能通过影响线粒体功能引发肌萎缩侧索硬化的发 生。 [0007]一种肌萎缩侧索硬化检测产品检测试剂盒， 基于突变的 TRMT2B基因设计， 包括核说　明　书 1/8 页 3 CN 114703278 A 3