ICS 65.020.20 CCS B 05 山 37 东 省 地 方 标 准 DB37/T 3690.3—2020 液体菌种制备技术规程 第 3 部分：平菇 Technical specifications for the preparation of liquid spawn— Part 3:Pleurotus ostreatus 2020-12-04 发布 2021-01-01 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 3690.3—2020 目 次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 基本要求 ........................................................................... 2 4.1 4.2 4.3 4.4 工作人员卫生要求 ............................................................... 场所要求 ....................................................................... 厂房要求 ....................................................................... 生产设施与设备要求 ............................................................. 2 2 2 2 5 生产技术 ........................................................................... 3 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 工艺流程 ....................................................................... 母种活化 ....................................................................... 摇瓶液体菌种生产 ............................................................... 发酵罐液体菌种生产 ............................................................. 贮藏 ........................................................................... 3 3 3 4 5 6 生产档案 ........................................................................... 6 附录 A（规范性） 平菇液体菌种生产记录事项 ............................................. 7 I DB37/T 3690.3—2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是DB37/T 3690《液体菌种制备技术规程》的第3部分。DB37/T 3690已经发布了以下部分： ——第 1 部分：香菇； ——第 2 部分：黑木耳； ——第 3 部分：平菇； ——第 4 部分：灵芝。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东省农业农村厅提出并组织实施。 本文件由山东省农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：山东省农业技术推广总站、泰安市农业科学研究院、山东省农业科学院农业资源 与环境研究所、济南市农业技术推广站、菏泽市定陶区特色农产品服务中心。 本文件主要起草人：赵淑芳、高瑞杰、高霞、王庆武、高中强、司元明、张燕、崔慧、桑卫民、黄 春燕、韩建东、王晓婷、彭玮航、孙振福、张晓雱、马化彬。 II DB37/T 3690.3—2020 液体菌种制备技术规程 第 3 部分：平菇 1 范围 本文件规定了平菇（Pleurotus ostreatus）液体菌种的术语和定义、基本要求、生产技术和生产 档案管理等要求。 本文件适用于平菇液体菌种的制备。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 150.1 压力容器 第1部分：通用要求 GB 4789.28 食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 12728 食用菌术语 GB 19172 平菇菌种 GB 50073 洁净厂房设计规范 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 3 术语和定义 GB/T 12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 食用菌液体菌种发酵罐 edible mushroom liquid spawn fermenter 进行食用菌液体菌种培养的专用发酵设备，是利用生物发酵原理，给菌丝生长提供最佳的营养、酸 碱度、温度、供氧量等生长条件，使菌丝快速生长，迅速扩繁，在短时间达到一定菌球数量的专用容器。 3.2 罐压 jar pressure 在液体菌种发酵制备过程中发酵罐内保持的空气压力（表压）。 注： 单位为MPa。 3.3 通气量 ventilation volume 在液体菌种培养过程中发酵罐体积与每分钟通入发酵罐中无菌空气体积的比例。 注： 用 V/V（发酵罐体积/通入空气体积）表示。 3.4 接种量 inoculation amount 液体菌种体积与培养基体积的比例。 注： 用百分数表示。 1 DB37/T 3690.3—2020 3.5 液体菌种菌龄 period of liquid spawn running 液体菌种接入培养基开始计算的液体菌种培养时间。 3.6 发酵罐空消 empty fermenter sterilization 对尚未加水投料的空发酵罐进行高压灭菌。 3.7 发酵罐实消 fermenter sterilization 对投料后的发酵罐进行高压蒸汽灭菌。 3.8 空气过滤器 air filter 能对食用菌液体菌种发酵罐所用空气进行滤除杂菌和其他杂质，达到无菌洁净要求的设备。 3.9 摇瓶液体菌种 liquid spawn in shake flask 装至玻璃菌种瓶内在磁力搅拌器或恒温摇床上培养的液体菌种。 3.10 终止 pH initial pH value of medium 液体菌种达到放灌指标时的培养基pH。 4 基本要求 4.1 工作人员卫生要求 工作人员应该保持个人卫生，进液体菌种发酵车间应穿戴经消毒处理的工作服、口罩、鞋、帽等。 4.2 场所要求 生产场所应符合NY/T 528的环境卫生要求，场地开阔、路面硬化。生产用水应符合GB 5749要求。 4.3 厂房要求 4.3.1 厂房设计应符合 NY/T 528 环境卫生要求，增设摇瓶菌种培养室、发酵罐菌种培养室。 4.3.2 应设置与工作人员数量相适应的更衣室，车间入口处应设置洗手、消毒和干手设施。过道应设 置风淋室。 4.3.3 车间地面应能防水、防腐蚀、防渗漏、防滑，易清洗，有适当的排水坡度（1.0°～1.5°）和 良好的排水系统；墙壁和天花板应能防潮、防霉、防水。 4.3.4 车间安装排气管道或者排风设备。 4.3.5 摇瓶菌种培养室、发酵罐菌种培养室应符合 GB 50073 要求。 4.3.6 车间设封闭式废物桶。 4.4 生产设施与设备要求 4.4.1 生产设施 培养基配制室、摇瓶菌种培养室、发酵罐菌种培养室规模要配套，布局合理，摇瓶菌种培养室、发 酵罐菌种培养室要有调温设施，其中培养基配制室空间洁净度应达到万级以上。菌种检验室和母种制作 室要有相应的实验检测设备和制种用的灭菌设施。 2 DB37/T 3690.3—2020 4.4.2 生产设备与用具 应具有称量器、高压蒸汽灭菌锅、液体菌种发酵罐、液体菌种接种器、超净工作台、调温设备、除 湿设备、恒温培养箱、恒温摇床或磁力搅拌器、冰箱、显微镜等及常规用具。压力容器应经政府有关部 门检验合格，符合GB 150.1的要求。应具有备用电源。 5 生产技术 5.1 工艺流程 工艺流程见图1。 图1 平菇液体菌种生产工艺流程 5.2 母种活化 母种活化配方及操作流程应符合NY/T 528要求。活化后母种质量应符合GB 19172要求。 5.3 摇瓶液体菌种生产 5.3.1 容器要求 使用无色或近无色专用玻璃菌种甁，可用棉塞（梳棉或化纤棉）、硅胶塞、专用封口透气膜封口。 5.3.2 培养基配方 宜选用以下配方，且培养基质应符合NY/T 528要求： a) 配方 1：马铃薯（煮汁）200 g/L、葡萄糖 20 g/L，pH 自然； b) 配方 2：葡萄糖 20 g/L、蛋白胨 3 g/L、磷酸二氢钾 1 g/L、硫酸镁 0.5 g/L、维生素 B1 5 mg/L， pH 自然； c) 配方 3：马铃薯（煮汁）200 g/L，葡萄糖 20 g/L，磷酸二氢钾 1 g/L、硫酸镁 0.5 g/L，维生 素 B1 10 mg/L，pH 自然。 5.3.3 培养基配制 按液体培养基配方配制，混合均匀，装入摇瓶中，装液量为摇甁容量的50 %～60 %，瓶塞封口，并 用报纸或牛皮纸包扎。 5.3.4 灭菌 3 DB37/T 3690.3—2020 将分装好的摇瓶放入灭菌锅内，锅内留有一定的空隙。检查锅内水位，立即灭菌。灭菌蒸汽压力升 至0.11 MPa～0.13 MPa，恒压维