ICS 65.020.20 CCS B 05 山 37 东 省 地 方 标 准 DB37/T 3690.4—2020 液体菌种制备技术规程 第 4 部分：灵芝 Technical specifications for the preparation of liquid spawn— Part 4：Ganoderma lingzhi 2020-12-04 发布 2021-01-01 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 3690.4—2020 目 次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 基本要求 ........................................................................... 2 4.1 工作人员卫生要求 ............................................................... 2 4.2 场所要求 ....................................................................... 2 4.3 生产车间要求 ................................................................... 2 5 设施设备 ........................................................................... 2 5.1 基本设施 ....................................................................... 2 5.2 基本设备与用具 ................................................................. 2 6 生产技术 ........................................................................... 3 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 工艺流程 ....................................................................... 培养基 ......................................................................... 母种制作 ....................................................................... 摇瓶菌种制作 ................................................................... 发酵罐液体菌种制作 ............................................................. 3 3 3 3 4 7 贮存 ............................................................................... 6 8 生产档案 ........................................................................... 6 附录 A（规范性） 灵芝液体菌种生产记录事项 ............................................. 7 I DB37/T 3690.4—2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是DB37/T 3690《液体菌种制备技术规程》的第4部分。DB37/T 3690已经发布了以下部分： ——第 1 部分：香菇； ——第 2 部分：黑木耳； ——第 3 部分：平菇； ——第 4 部分：灵芝。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东省农业农村厅提出并组织实施。 本文件由山东省农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：山东省农业技术推广总站、泰安市农业科学研究院、菏泽市定陶区特色农产品服 务中心、菏泽市定陶区茗嘉兴农作物种植专业合作社。 本文件主要起草人：高霞、王庆武、赵淑芳、崔晓、高中强、高瑞杰、孙振福、丛倩倩、马化彬、 李秀梅、司元明、唐丽娜、张燕、兰玉菲、安秀荣。 II DB37/T 3690.4—2020 液体菌种制备技术规程 第 4 部分：灵芝 1 范围 本文件规定了灵芝液体菌种制备的术语和定义、基本要求、设施设备、生产技术、贮存和生产档案 等技术要求。 本文件适用于灵芝液体菌种的制备。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 150.1 压力容器 第1部分：通用要求 GB 4789.28 食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 12728 食用菌术语 GB 50073 洁净厂房设计规范 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 3 术语和定义 GB/T 12728界定的术语和定义适用于本文件。 3.1 食用菌液体菌种发酵罐 edible mushroom liquid spawn fermenter 进行食用菌液体菌种培养的专用发酵设备，是利用生物发酵原理，给菌丝生长提供最佳的营养、酸 碱度、温度、供氧量等生长条件，使菌丝快速生长，迅速扩繁，在短时间达到一定菌球数量的专用容器。 3.2 罐压 jar pressure 在液体菌种发酵制备过程中发酵罐内保持的空气压力（表压）。 注： 单位为MPa。 3.3 通气量 ventilation volume 在液体菌种培养过程中发酵罐体积与每分钟通入发酵罐中无菌空气体积的比例。 注： 用 V/V（发酵罐体积/通入空气体积）表示。 3.4 接种量 inoculation amount 液体菌种体积与培养基体积的比例。 注： 用百分数表示。 1 DB37/T 3690.4—2020 3.5 液体菌种菌龄 period of liquid spawn running 液体菌种接入培养基开始计算的液体菌种培养时间。 3.6 发酵罐空消 empty fermenter sterilization 对尚未加水投料的空发酵罐进行高压灭菌。 3.7 发酵罐实消 fermenter sterilization 对投料后的发酵罐进行高压蒸汽灭菌。 3.8 空气过滤器 air filter 能对食用菌液体菌种发酵罐所用空气进行滤除杂菌和其他杂质，达到无菌洁净要求的设备。 3.9 摇瓶液体菌种 liquid spawn in shake flask 装至玻璃菌种瓶内在磁力搅拌器或恒温摇床上培养的液体菌种。 3.10 终止 pH initial pH value of medium 液体菌种达到放灌指标时的培养基pH。 4 基本要求 4.1 工作人员卫生要求 工作人员应保持个人卫生，进生产车间前须洗手、消毒，应穿戴经消毒处理的工作服、口罩、鞋、 帽等。 4.2 场所要求 应符合NY/T 528的环境卫生要求，场地开阔、路面硬化。 4.3 生产车间要求 4.3.1 厂房设置和布局应符合 NY/T 528 的要求，增设摇瓶菌种培养室、发酵罐菌种培养室。 4.3.2 车间设计应符合 GB 50073 的要求。车间地面应能防水、防渗漏、防滑、防腐蚀、易清洗，排水 通畅；墙壁和天花板应能防潮、防霉、防水、易清洗。 4.3.3 车间内设有更衣室、洗手、消毒和干手设施，安装换气设备。过道应设置风淋室。 4.3.4 车间设封闭式废物桶。 5 设施设备 5.1 基本设施 培养基配制室、摇瓶菌种培养室、发酵罐菌种培养室规模要配套，布局合理，摇瓶菌种培养室、发 酵罐菌种培养室要有调温设施，其中培养基配制室空间洁净度应达到万级以上。菌种检验室和母种制作 室要有相应的实验检测设备和制种用的灭菌设施。 5.2 基本设备与用具 2 DB37/T 3690.4—2020 液体菌种发酵罐、空气压缩机、高压蒸汽灭菌锅、恒温摇床或磁力搅拌器、超净工作台、摇瓶（或 三角烧瓶）、显微镜、电子秤等设备及常规用具。其中液体菌种发酵罐、高压蒸汽灭菌锅应符合GB 150.1 的要求，并经有关部门检验合格。应具有备用电源。 6 生产技术 6.1 工艺流程 工艺流程见图1。 图1 灵芝液体菌种生产工艺流程 6.2 培养基 6.2.1 母种培养基 马铃薯200 g/L（去皮煮汁）、麦麸40 g/L（煮汁）、葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、磷酸二氢钾1 g/L、 硫酸镁0.5 g/L、琼脂20 g/L，pH自然。 6.2.2 液体菌种培养基 6.2.2.1 摇瓶菌种培养基 葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、牛肉膏3 g/L、磷酸二氢钾1 g/L、硫酸镁0.5 g/L、维生素B1 5 mg/L， pH自然。 6.2.2.2 发酵菌种培养基 宜选用以下配方，且生产用水应符合GB 5749的要求： a) 配方 1：葡萄糖 20 g/L、蛋白胨 3 g/L、磷酸二氢钾 1 g/L、硫酸镁 0.5 g/L、维生素 B1 5 mg/L、 消泡剂 0.3 g/L，pH 自然； b) 配方 2：玉米粉 15 g/L、葡萄糖 20 g/L、酵母粉 2 g/L、磷酸二氢钾 2 g/L、硫酸镁 1 g