ICS 65.020.20 CCS B 05 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5348—2021 大丽花脱毒种苗生产技术规程 201 - 01 - 21 发布 河北省市场监督管理局 2021 - 02 - 21 实施 发 布 DB13/T 5348—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构与起草规则》的规定 起草。 本文件由河北省林业和草原局提出。 本文件由河北农业大学起草。 本文件主要起草人：陈段芬、向地英、牛善策、郝丽红、王丽霞、谷桂恕、邸葆、邓运川、梁娟。 I DB13/T 5348—2021 大丽花脱毒种苗生产技术规程 1 范围 本文件规定了大丽花无菌苗培育、脱毒苗培养、脱毒苗快繁、原种苗培育、生产用苗繁育以及病 虫害防治等内容。 本文件适用于大丽花脱毒苗生产繁育环节。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 SN/T 2964 植物病毒检测规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 大丽花 大丽花（Dahlia pinnata Cav.）是菊科大丽花属植物。 3.2 脱毒原种苗 脱毒组培瓶苗移栽于无病原、虫源的种苗圃内存活的植株。 4 无菌苗培育 4.1 外植体选择和处理 以大丽花顶芽或带腋芽茎段为外植体材料。将外植体用市售洗洁精稀释 100 倍后浸泡 5 min，用 自来水冲洗 2 h，之后用 75% 酒精浸泡 30 s，再用 0.1% 升汞处理 4 min～7 min，并用无菌水冲洗 5～8 次，消毒滤纸吸干水分。 4.2 培养基配制 培养基配制按NYT/T 2306执行。 1 DB13/T 5348—2021 4.3 接种 接种操作按NY/T 2306执行。 4.4 初代培养 切取经消毒处理的茎尖接种到初代培养基中培养7天后，将无污染茎尖转接到新的初代培养基。 培养基配方：MS + 6-BA 4 mg/L + NAA 0.2 mg/L+蔗糖40 g/L+琼脂6 g/L，在培养基中加入2 g/L的 活性炭。 4.5 继代培养 初代培养产生的无菌小苗高5 cm～10 cm时，切取其带一对芽的茎段，接种到继代培养基上。 继代培养基配方：MS + 6-BA 1.5 mg/L + NAA 0.2 mg/L+蔗糖40 g/L+琼脂6 g/L。 5 脱毒苗培养 5.1 培养基配制 培养基配方为 MS + 6-BA 4 mg/L +NAA 0.2 mg/L+蔗糖 40 g/L+琼脂 6 g/L。待培养基温度降至 50 ℃～ 60 ℃后，将 25 mg/L 病毒唑（三氮唑核苷）用经高温灭菌后的注射器以 0.22 μ m 孔径的水相滤膜过滤 后加入培养基中。 5.2 茎尖处理 切取无菌苗嫩尖，在超净工作台上，解剖镜下剥取0.2 mm～0.4 mm的茎尖分生组织圆锥体，置于培 养基上进行暗培养，待生长点开始萌动后，转移到光照条件下进行培养。 待苗高5 cm～10 cm时切取无菌苗嫩尖1 cm，接种在添加有病毒唑的培养基上，40天后切取茎尖转 移到不含病毒唑的MS+ 6-BA 4 mg/L +NAA 0.2 mg/L+蔗糖40 g/L+琼脂6 g/L茎尖诱导培养基上进行培养。 30天后转移到MS+ 6-BA 1.5 mg/L +NAA 0.3 mg/L+蔗糖40 g/L+琼脂6 g/L继代培养基上。 5.3 病毒检测 待试管苗长到5 cm～10 cm时，切取叶片或幼嫩组织，按SN/T 2964 进行病毒检测，不得检出大丽 花花叶病毒(DMV)、黄瓜花叶病毒（CMV）和烟草花叶病毒（TMV）。 6 脱毒苗快繁 6.1 初代培养和继代培养 经鉴定的脱毒苗按4.4和4.5给出的方法进行快繁。 6.2 生根培养 待脱毒苗长到 5 cm～10 cm 时，截取 2 cm 茎尖或茎段接种于生根培养基上。 生根培养基配方：1/2 MS + NAA 0.1 mg/L + 蔗糖 30 g/L + 琼脂 6 g/L。 6.3 培养条件 2 DB13/T 5348—2021 -2 -1 -2 -1 光照强度30 μmol·m ·s ～60 μmol·m ·s ，白天温度25 ℃ ± 2 ℃，夜间温度18 ℃ ± 2 ℃。每天照 光12 h～14 h。 7 原种苗培育 7.1 炼苗 待脱毒苗基部有 3～5 条根，长度 1 cm～2 cm 时，即可进行炼苗。炼苗方法按 NY/T 2306 执行。 7.2 移栽 7.2.1 基质准备 在满足脱毒苗正常生长条件下，可因地制宜选择基质。可用草炭﹕珍珠岩﹕蛭石=2﹕1﹕1的混合 材料。基质用0.5 g/L多菌灵50% 可湿性粉剂喷透备用。 7.2.2 栽植 取出脱毒小苗，用清水洗掉根系表面的培养基，之后用0.1%高锰酸钾溶液快速漂洗根部，栽于苗 床、营养钵或穴盘中，浇透水后用遮光率为50%的遮阳网遮荫，再用防虫网隔离。 7.3 移栽后管理 7.3.1 光照 -2 -1 -2 -1 遮荫7 d～10 d后，光强逐渐增加到120 μmol·m ·s ～180 μmol·m ·s 。 7.3.2 温度和湿度 移栽7 d～10 d后，保持环境温度20 ℃～25 ℃，相对湿度50%～60%。 7.3.3 水肥管理 移栽7 d～10 d后，视基质状况适时浇水，基质湿度保持在60%～70%。每7 d～10 d施一次与MS培养 基浓度一致的大量元素营养液。 8 生产用苗繁育 8.1 扦插繁殖 原种苗株高30 cm以上时，用消毒刀具截取带有2～4节的茎段，基部扦插于苗床、营养钵或穴盘。 插后浇透水，用遮光率为50%的遮阳网遮荫，相对湿度保持75%～90%。等茎段基部生根后，逐步掀开遮 阳网。 8.2 繁殖年限 脱毒原种苗繁育生产用苗，繁殖年限限制在2～3年。 8.3 壮苗标准 壮苗标准为：茎粗壮，节间短，无徒长；叶色深绿；须根发达，生长健壮；无病斑，无虫害。 3 DB13/T 5348—2021 9 病虫害防治 苗期主要病害有白粉病、灰霉病、褐斑病等；主要虫害有蚜虫、红蜘蛛等。施用药剂防治病虫害 应符合农药合理使用准则 GB/T 8321（所有部分）的规定。主要病虫害防治方法见附录。 4 DB13/T 5348—2021 附 录 A （资料性） 大丽花苗期病虫害及防治方法 表A.1 大丽花苗期病虫害及防治方法 病虫害名称 危害症状 防治方法 ①控制浇水，适量增施磷钾肥，加强通风，使 白粉病 主要危害大丽花叶片和叶柄。发病叶片 植株生长健壮，提高抗病能力。②发病初期， 出现白色霉层，严重时会使叶片皱缩反 摘除病叶，用 50%粉锈宁可湿性粉剂 800～1000 卷，导致叶片脱落，整株死亡。 倍液或 70%甲基托布津 1000 倍液进行喷雾防 治。每周 1 次，连续换药喷洒 3～5 次。 受害植株叶缘处和茎部发生近圆形至不 灰霉病 规则形病斑，淡褐色至褐色，有时呈轮 纹、水渍状，湿度大时长出灰霉。发病 严重时茎部倒伏，整株死亡。 ①使用洁净基质育苗；避免育苗密度过大；加 强通风透光；浇水时避免喷淋和苗床积水。② 发病初期及时摘除病叶，并喷洒 75%百菌清可湿 性粉剂 500 倍液或 40%多硫悬浮剂 500～600 倍 液，7～10 天喷洒 1 次，连续 2～3 次。 ①加强通风；适量增施磷钾肥，提高植株抗病 褐斑病 受害叶片产生褐色斑点，之后变成暗褐 色，最终干枯脱落。 性；控制浇水量，需要浇水应在天气晴朗的早 上进行；②发病初期及时摘除烧毁病叶，喷洒 75%百菌清可湿性粉剂 700 ～ 800 倍液或其他 杀菌剂，每周 1 次，连续喷洒 3～5 次。 蚜 虫 红蜘蛛 主要危害嫩芽和叶片，受害叶片变黄卷 ①悬挂黄板诱杀；②危害较重时，可用 2.5%溴 曲，嫩芽受到危害时生长缓慢，嫩茎扭 氰 菊 酯 乳 油 1500 ～ 2000 倍 液 或 5% 啶 虫 脒 曲，严重时生长点坏死。 500～600 倍液喷洒植株。 受害叶片出现黄白色小斑点，呈星点状， 用 40%的三氯杀螨醇乳油 1500～2000 倍液或 之后逐渐变红，造成植株生长缓慢，叶 片失绿、卷曲，枯黄脱落。 50％三氯杀螨砜可湿性粉剂 1500～2000 倍液 或 40％氧化乐果 1000～1500 倍液喷雾防治， 每隔 7 天喷 1 次，连续喷洒 2～3 次。 _________________________________ 5