DB21/T3848—2023ICS67.120.30 CCSB50DB21 辽宁省地方标准 DB21/T3848—2023 中华小长臂虾种质鉴定规范 SpeciesidentificationofPalaemonetessinensis 2023-10-30发布 2023-11-30实施 辽宁省市场监督管理局发布 DB21/T3848—2023 I前  言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：沈阳农业大学。 本文件主要起草人：李应东、赵莹莹、李晓东、魏华、胡清彪、姜宏波、邢跃楠、包杰、丰程程、 于业辉。 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太北原街2号），联系电话：024-23447862。 文件起草单位通讯地址：沈阳农业大学（沈阳市沈河区东陵路120号），联系电话：024-88487146 DB21/T3848—2023 1中华小长臂虾种质鉴定规范 1范围 本文件规定了中华小长臂虾（Palaemonetessinensis）的学名与分类、生物学特征、生长与繁殖、 遗传学特性、检测方法与检验判定规则。 本文件适用于中华小长臂虾的种质鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T18654.1养殖鱼类种质检验第1部分：检验规则 GB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分：抽样方法 GB/T18654.4养殖鱼类种质检验第4部分：年龄与生长的测定 GB/T18654.6养殖鱼类种质检验第6部分：繁殖性能的测定 GB/T18654.12养殖鱼类种质检验第12部分染色体组型分析 GB/T18654.14养殖鱼类种质检验第14部分DNA含量的测定 SC/T1102-2008虾类性状测定 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4学名与分类 4.1学名 中华小长臂虾（Palaemonetessinensis） 4.2分类地位 属甲壳纲（Crustacea）十足目（Deoapoda）长臂虾科（Palaemonidae）小长臂虾属（Palaemonetes） 5主要生物学性状 5.1外部形态 体透明，呈青色略带微黄色。额剑短于头胸甲，平直前伸，上具 5 齿 ～ 6 齿。头胸甲具触角刺、 鳃甲刺、无肝刺、鳃甲沟伸至头胸甲中部之前。尾节末端呈尖刺状，两侧各具 1 大 1 小两刺。大颚不具 触须。体长 25 mm ～ 50 mm。卵大，卵径为 1.18 mm ～ 1.50 mm × 1.00 mm ～ 1.04 mm，卵呈棕绿色。 自头胸甲两侧至第6腹节均有棕色或棕黑色的条纹，以第3腹节色最浓。雌雄异体，雌性生殖系统包括卵 巢、输卵管；雄性生殖系统包括1对精囊、输精管和精荚囊。中华小长臂虾外形见图1。 DB21/T3848—2023 2 图1中华小长臂虾外形 （1.全形，侧面；2.尾节末端，背面；3.第一触角；4.第二触角鳞片；5.大颚） 5.2可数性状 额剑齿式：上额角齿数/下额角齿数为5～ 6/ 1 ～ 2 。 5.3可量性状 全长比体长的范围：1.759～2.538。腹部长比体长的范围：0.666～0.772。全额剑长比头胸甲 长的范围：0.612～0.972。 6繁殖 6.1性成熟 中华小长臂虾雌雄异体，可当年性成熟。 6.2怀卵量 怀卵量与个体大小相关，一般怀卵量在 40 粒 ～ 230 粒不等，雌虾抱于腹肢上，体外授精。 6.3产卵类型 产卵期为 4 月中旬至 7 月中旬，沉性兼粘性卵。 7遗传学特性 7.1细胞遗传学特性检测 7.1.1染色体数 DB21/T3848—2023 3体细胞染色体二倍数，2 n = 88。 7.1.2核型 染色体核型公式为 2 n = 88 = 66 m + 10 sm + 4 st + 8 t。中部着丝粒染色体( m 组) 33 对；亚中部着 丝粒染色体( sm 组) 5 对；亚端部着丝粒染色体( st 组) 2 对；端部着丝粒染色体（t组） 4 对；染色体 臂数( NF ) 164，见图2。 图2中华小长臂虾染色体分裂相及核型 7.2分子遗传学特性 7.2.1中华小长臂虾线粒体16srRNA基因标记 对线粒体16srRNA基因片段进行扩增和测序，PCR引物序列为L16S：CGCCTGTTTATCAAAAACAT，H16S： CCGGTCTGAACTCAGATCACGT，获得长度为523bp，群体内个体间遗传距离小于2%，序列如下： 5’-tatgagctattaatataaagtctagcctgcccactgagtaattaaagggctgcagtaatttgactgtgcaaaggtagca taatcagtagtcttttaattgaaggcttgaatgaatggctggatgagggagaaactgtctttttggtaaattaaaatttgacttttaa gtgaaaaggcttaaatttattaaggggacgataagaccctataaaacttaatatttatttatattttgtttttaaattttaaataaact ttacaaagtttagtatatattttgttggggagacattgacataattaataactgtctaatttaaatgtttatagctattgttattatatg atccttctttgaaggataaaaagagcaagttactttagggataacagcgtaattttttctgagagttcttatcgaagaaaatagttg cgacctcgatgttgaattaaaatttctgttaggtgtagccgtttaacaagtaggtctgttcgaccttttaaattttacatgatttgagt tcaaaccggt-3’ 7.2.2中华小长臂虾线粒体COI基因标记 对线粒体COI基因片段进行扩增和测序，PCR引物序列为LCO：GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG，HCO： TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA，获得长度为674bp，群体内个体间遗传距离小于2%，序列如下： 5’-atattggcccactatactttgtatttggagcttgagcaggaatagtaggaacttctttaagactactaattcgagctgaac ttggacaaccaggcaccttaatcggaaatgatcaaatttacaatgtggttgtaacggcacacgctttcgttataatcttctttgtag taataccaattataattggtggatttggaaattgacttgtacccctaatgctaggagctcctgatatagcattcccacgtataaata acataagattttgactcctccccccttctttaacactcattctttctagaggtatagtagaaagaggagtcggaactggttgaacg gtttaccctcccctagcgagagggttaggccacgctggagcttcggtagacctgggtattttctctttacatttagcaggagtgtct tctattttgggtgctgtaaatttcattacaactgtaattaatatacgagctccgggaataactatggaccgaactccactttttgtat gagcagtttttttaactgctattttattactactttctctacctattttagcaggggctattactatgcttttaacagaccgaaatctaa atacttctttctttgaccctgctggagggggggatcctattctttatcaacatttattttgatttttt-3’ 8检测方法 DB21/T3848—2023 48.1抽样方法 按 GB/T 18654.2 执行。 8.2性状检测 按 SC/T1102-2008执行。 8.3年龄与生长测定 按 GB/T 18654.4 执行。 8.4繁殖性能测定 按 GB/T 18654.6 执行。 8.5染色体检测 按 GB/T 18654.12 的规定执行。 8.6DNA含量测定 按 GB/T 18654.14 执行。 8.7分子遗传学标记方法 8.7.1DNA的提取 取尾部肌肉，剪碎组织，加 200 µL裂解液（EDTA(pH 8.0)：200 mmol/L；SDS：1 ％；ProteinaseK： 200 µg/mL）50 ℃温育 3 h ～ 4 h；加入等体积饱和苯酚、氯仿、异戊醇混合液（体积比25 ：24 ：1）400  µL抽提， 8000 r/min，离心 20 min后，取上清液，再重复抽提 2 次；在上清液中加入 2 倍体积的无水 乙醇沉淀，－20 ℃静置；12500 r/min，离心 20 min，用 70 ％乙醇洗沉淀 2 次，晾干，加入 50 µL的  1 × TE （pH 8.0）溶解。使用 DNA 定量仪测定样品 DNA 的纯度和浓度。-20 ℃保存备用