ICS 65.020.40 B 61 黑 龙 江 省 地 方 标 准DB23 DB23/T 2323 —2019 软枣猕猴桃组培快繁育苗技术规程 2019-03-19发布 2019-04-18实施 黑龙江省市场监督管理局 发 布 DB23/T 2323 —2019 I前 言 本标准依据 GB/T 1.1—2009的编写规则起草。 本标准由 黑龙江省林业和草原局提 出并归口。 本标准起草单位：黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省林业监测规划院。 本标准主要起草人：田新华、李京、周伟政、张玲、卢慧颖、李艳霞、张妍妍、张建瑛、姜天瑞 、 温爱亭、李念森、黄俊杰、毛洪波、于腊梅、于晓杰、韩贤波、白吉福、徐英华。 DB23/T 2323 —2019 1软枣猕猴桃组培快繁育苗技术规程 1 范围 本标准规定了软枣猕猴桃 （Actinidia arguta Planeh.）组培快繁育苗技术的仪器设备、 环境和设备消毒、培养基制备、外植体培养、炼苗与移栽、生产档案。 本标准适用于软枣猕猴桃组培快繁育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适 用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 。 GB/T 6001 育苗技术规程 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 DB23/T 1589 蓝靛果种苗组培快繁技术规程 3 仪器设备 应符合 DB23/T 1589的规定。 4 环境和设备消毒 4.1 接种室消毒 接种前用紫外灯照射 30min。 4.2 培养室消毒 每周用臭氧消毒 40min。 4.3 超净工作台的消毒 接种前用紫外灯照射 30min并用 70％ 酒精擦拭台面，定期清洗超净工作台过滤膜。 4.4 接种器具的消毒 使用前将枪式镊子、解剖剪、培养皿、 解剖刀进行高温蒸汽消毒 ；接种过程中采用酒精 灯灼烧消毒。 5 培养基制备 5.1 母液配制 按照 LY/T 1882的规定执行。 5.2 培养基配制 DB23/T 2323 —2019 2按照 LY/T 1882的规定执行。 诱导培养基 ：MS培养基+ 6-BA 0.5 mg/L+ZT 1.0 mg/L；继代增殖培养基 ：MS培养基 +6-BA 1.0 mg/L+ZT 0.5 mg/L；生根培养基： MS培养基+IBA 0.2 mg/L。 5.3 培养基灭菌 采用高压蒸汽灭菌 ，在压力 0.105 MPa、温度 121 ℃ 条件下灭菌 20 min。锅内的灭菌物 以不超过锅容量 的3/4为宜。 5.4 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室 ，常温条件下宜在 7d 内使用，2℃～ 4℃ 条件下 14d 内使用。 培养基应保存于洁净环境中，避免阳光直射。 6 外植体培养 6.1 外植体的选择 选择生长健壮、无病的植株作为采样母株，剪取当年生的半木质化的茎段作为外植体 ， 采样时间宜选择晴天或露水干后。 6.2 外植体灭菌 先将外植体用洗涤剂作表面清洗 ，再将外植体用流水冲洗 30min 后，将外植体放入消毒 瓶中。把装有外植体的消毒瓶放入超净工作台 ，打开消毒瓶倒入 0.1% 升汞并摇晃 ，浸泡消 毒3min 取出，用无菌水冲洗 5次；再用无菌水浸泡 40min，用无菌滤纸吸干外植体表面的水 分。 6.3 外植体接种 与诱导培养 将培养瓶的封口膜取下 ，瓶口在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒 。枪式镊子在酒精灯上灼烧 消毒并冷却后，将表面消毒后的外植体用手术剪刀剪去两端，剪取长 约1.0 cm左右的带有 单个腋芽的茎段接种于诱导培养基 。每个培养瓶放 3个外植体 ，接种后盖上封口膜 ，并标注 日期。培养 35 d后进行继代增殖培养。 6.4 继代增殖培养 外植体经诱导培养生成丛生芽，转接至继代增殖培养基中培养。培养 35d 后再进行继 代增殖培养。 6.5 生根培养 选取培养瓶中长度 1.5 cm ～2.0 cm生长健壮的芽接种至生根培养基中 ，组培苗生长过 程中在基部会出现 浅绿色嫩根，培养 35 d后平均生根数 3条以上， 根长在 1.0 cm 以上即 可炼苗。 6.6 组培苗培养 条件 培养室的温度控制在 24±2 ℃ ，相对空气湿度控制在 70% ～80% ，光照强度为 2000 Lux ～3000 Lux，光照时间为 12 h/d。 7 炼苗与移栽