ICS65.020 CCSB04 GDVIA 广东省蔬菜产业协会团体标准 T/GDVIA039—2023 黄瓜疫病抗性离体子叶鉴定技术规程 Technicalrulesforevaluationofcucumberresistancetophytophthorablightinvitro 2023-11-8发布 2023-11-9实施 广东省蔬菜产业协会  发布 全国团体标准信息平台 T/GDVIA039—2023 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由广东省农业科学院设施农业研究所提出。 本文件由广东省蔬菜产业协会归口。 本文件起草单位：广东省农业科学院设施农业研究所、广东省农业科学院蔬菜研究所、广东省蔬菜 产业协会。 本文件主要起草人：吴廷全、王瑞、林毓娥、金庆敏、徐晓美、钟玉娟、姚春鹏、谢大森、罗少波、 李明珠、梁肇钧、杨丽琴。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/GDVIA039—2023 II引言 本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及到3，4[章]与“一种快速鉴定黄瓜对 疫病抗性的方法”相关的专利的使用。 本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。 该专利持有人已向本文件的发布机构承诺，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下， 就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下联 系方式获得： 专利持有人姓名：吴廷全，王瑞，林毓娥，金庆敏，徐晓美，钟玉娟，姚春鹏，谢大森，罗少波， 李明珠，梁肇钧。 地址:广东省广州市天河区五山白石岗街2号。 请注意除上述专利外,本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责 任。 全国团体标准信息平台 T/GDVIA039—2023 3黄瓜疫病抗性离体子叶鉴定技术规程 1范围 本文件规定了黄瓜疫病抗性离体子叶鉴定的术语和定义、病原菌制备、繁殖与保存、抗性鉴定、接 种和抗性评价等。 本文件适用于各种类型黄瓜资源对黄瓜疫病抗性的室内鉴定及评价。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T1857.4黄瓜主要病害抗病性鉴定技术规程第4部分：黄瓜抗疫病鉴定技术规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗病性diseaseresistance 植物体具有减轻或克服病原菌致病作用的可遗传性状。 [来源：NY/T1443.2-2007，2.1] 3.2 抗病性鉴定identificationofdiseaseresistance 通过适宜的技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平。 [来源：NY/T1443.2-2007，2.1] 3.3 抗病性评价evaluationofdiseaseresistancelevels 依据采用的技术标准判别植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。 [来源：NY/T1443.2-2007，2.1] 3.4 子叶cotyledon 种子发芽时，最初由胚生出的幼叶。 3.5 离体子叶cotyledoninvitro 把生物体的子叶部分摘出和游离于生物体外的状态。 3.6 致病性pathogenicity 病原物所具有的破坏寄主从而引起寄主病变的能力。 3.7 人工接种artificialinoculation 在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物适当部位并使之发病的过程。 3.8 培养基culturemedium 供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。 3.9 菌块mycelia-culturemediumblock 全国团体标准信息平台 T/GDVIA039—2023 4生长于培养基上的菌丝体及培养基的混合块状物。 3.10 微菌块tinymycelia-culturemediumblock 直径为2mm的菌块。 3.11 病斑lesion 感病寄主死亡组织的区域。 3.12 黄瓜疫病Cucumberphytophthorablight 由瓜类疫霉（PhytophthoramelonisKatsura）引起的黄瓜病害。 [来源：[1]广东地区黄瓜疫病病原菌的分离与鉴定.中国农学通报(01),76-80.[2]NY/T1857.4黄瓜 主要病害抗病性鉴定技术规程第4部分：黄瓜抗疫病鉴定技术规程] 4病原菌的制备、繁殖与保存 4.1制备 4.1.1从发病植株组织上用常规的植物病理方法分离、纯化出分离物。 4.1.2分离物经形态学鉴定和柯赫氏法则确认为瓜类疫霉（PhytophthoramelonisKatsura），保存备用。 4.2繁殖与保存 4.2.1利用固体培养基在28℃条件下黑暗培养瓜类疫霉菌3d～4d，利用直径为2mm的圆形打 孔器取培养基外围新鲜微菌块，用于接种。 4.2.2将瓜类疫霉菌接种于V8斜面培养基上，在28℃条件下黑暗培养瓜类疫霉菌3d～4d后， 置于16℃条件下保存。 5抗性鉴定 5.1鉴定环境条件 人工培养箱（室）应具备温度、湿度和光照控制功能，人工接种后具备良好的发病环境。 5.2鉴定对照品种 宜以“长春密刺”黄瓜为抗病对照材料，以“津研四号”黄瓜为感病对照材料。 5.3鉴定设计 每个处理为5株苗，每株苗取2片子叶；重复3次。 5.4鉴定材料及对照材料种植 5.4.1鉴定材料和对照材料种子宜浸泡4h～6h，经5%次氯酸钠溶液消毒10min，用清水冲洗3 次，用湿润的纱布适度包裹后置于植物培养箱28℃黑暗条件下催芽约24h。 5.4.2选择胚根长度约1.0mm，整齐一致的芽苗播种于装有基质的塑料育苗钵中，育苗钵置于光照 28℃/12h和黑暗26℃/12h，湿度均为85%的植物培养箱中培养6d～7d，至两片子叶完全展开。 5.4.3选择整齐一致的健康黄瓜苗进行鉴定。 6接种 6.1接种期 黄瓜疫病接种期为两片子叶平展期。 6.2接种方法 全国团体标准信息平台 T/GDVIA039—2023 5应采用离体黄瓜子叶微菌块接种法。应将黄瓜子叶背面向上置于培养皿中的湿润滤纸之上，将微菌 块菌丝向下放置于黄瓜子叶之上。 6.3接种后管理 应将盛有接种疫霉菌的黄瓜子叶的培养皿放置于湿度85%的植物培养箱，28℃下黑暗培养24 h～36h。 7抗性评价 7.1鉴定有效性判别 当感病对照材料的感病程度达到病斑面积大于其叶片面积的1/2以上时，该批次抗疫病鉴定视为 有效。 7.2抗性评价标准 待鉴定材料抗性评判指标应按待鉴定材料子叶病斑面积占感病对照病斑面积的百分比确定。具体应 符合以下规定： a)待鉴定材料子叶的病斑面积占感病对照病斑面积的百分比为5%及以下，为高抗（HR）材料； b)待鉴定材料子叶的病斑面积占感病对照病斑面积的百分比为5%～20%（含20%），为抗病 （R）材料； c)待鉴定材料子叶的病斑面积占感病对照病斑面积的百分比为20%～40%（含40%），为感 病（S）材料； d)待鉴定材料子叶的病斑面积占感病对照病斑面积的百分比为40%以上，为高感（HS）材料。 全国团体标准信息平台 T/GDVIA039—2023 6AA 附录A （资料性） 黄瓜疫病病原菌和生理小种 A.1学名 瓜类疫霉（PhytophthoramelonisKatsura）。 A.2形态描述 形态描述如下： a)菌丝丝状、无色，无隔膜，多分枝，易产生瘤状或节状突起，常集结成束状或葡萄球状； b)孢囊梗从菌丝、球状体上长出，平滑，个别形成隔膜； c)孢子囊顶生，长椭圆形，大小为（36.4μm～71.0μm）×（23.1μm～46.1μm）； d)游动孢子近球形； e)藏卵器球形，淡黄色；雄器球形，无色； f)卵孢子黄褐色； g)病菌生长发育适温28℃～32℃，最高37℃，最低9℃。 全国团体标准信息平台