ICS 11.220 B 41 团体标准 T/CVDA 1—2022 动物西尼罗病毒中和抗体检测技术 Detecting technique of neutralization antibody against West Nile virus in animals 2022 - 07 - 19发布 2022 - 07 - 25实施 中国兽药协会 发布 T / C V D A 全国团体标准信息平台 T/CVDA 1—2022 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 缩略语 ................................ ................................ ............. 1 4 试剂和材料 ................................ ................................ ......... 1 5 器材和设备 ................................ ................................ ......... 2 6 动物血清的采集 ................................ ................................ ..... 2 7 PRNT实验操作 ................................ ................................ ....... 2 7.1 安全防护 ................................ ................................ ....... 2 7.2 材料准备 ................................ ................................ ....... 2 7.2.1 细胞 ................................ ................................ ...... 2 7.2.2 待测血清 ................................ ................................ .. 2 7.2.3 检测用细胞板 ................................ .............................. 2 7.3 检测操作 ................................ ................................ ....... 3 7.3.1 血清的稀释 ................................ ................................ 3 7.3.2 病毒与血清的中和 ................................ .......................... 3 7.3.3 接种细胞 ................................ ................................ .. 3 7.3.4 蚀斑计数 ................................ ................................ .. 3 8 结果观察与判定 ................................ ................................ ..... 4 8.1 观察顺序 ................................ ................................ ....... 4 8.2 蚀斑观察结果判定 ................................ ............................... 4 8.2.1试验成立条件 ................................ ............................... 4 8.2.2 结果判定与效价计算 ................................ ........................ 4 A.1 材料和试剂 ................................ ................................ ....... 1 A.2 方法 ................................ ................................ ............. 1 A.2.1 表达质粒构建 ................................ ................................ . 1 A.2.2 细胞转染与克隆筛选 ................................ ........................... 1 A.2.3 克隆细胞株的鉴定 ................................ ............................. 1 B.1 材料和试剂 ................................ ................................ ....... 1 B.2 方法 ................................ ................................ ............. 1 B.2.1 WNV复制子质粒构建 ................................ ............................ 1 B.2.2 △WNV病毒的初次包装 ................................ .......................... 1 全国团体标准信息平台 T/CVDA 1—2022 II 前 言 本标准参照GB/T 1.1-2020给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由 中国兽药协会提出并归口管理，由 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 起草。 本标准主要起草单位： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 ，中华人民共和国宁波海关 ，黑龙江省动 物疫病预防与控制中心 。 本标准主要起草人： 步志高、华荣虹、 黄素文、 张永国、 刘任强。 本标准为首次发布 。 全国团体标准信息平台 T/CVDA 1—2022 1 动物西尼罗病毒中和抗体检测技术 1 范围 本标准规定了用于动物西尼罗病毒血清中和抗体测定的 蚀斑减少中和 试验的实验操作方法及结果 判定标准。 本标准适用于动物 血清中西尼罗病毒 中和抗体的定性检测和定量测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 1.1 -2020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则。 GB/T 6682 -2008 分析实验 室用水规格和试验方法 。 GB 19489 -2008 实验室 生物安全通用要求 。 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 WNV：西尼罗病毒（ West Nile Virus）； BHK-21：幼仓鼠肾细胞（ Baby Hamster Kidney -21）； BSL-2：生物安全 2级实验室（ Biosafety Laboratory Level -2）； PRNT：蚀斑减少中和试验（ Plaque-Reduction Neutralization Test）； DMEM：Dulbecco 改良的Eagle培养基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium ）； PBS：磷酸盐缓冲液（ Phosphate -Buffered Saline ）； PFU：蚀斑形成单位 （Plaque Forming Unit）； FFU：荧光灶单位（ Fluorescence Focus Units ）； FBS：胎牛血清（