ICS 11.220 B 41 T/CVDA 团 体 标 准 T/CVDA 2 -2022 动物新型冠状病毒中和抗体检测技术 Detecting technique of neutralization antibody against SARS -CoV -2 in animals 2022 - 07 - 19发布 2022 - 07 - 25实施 中国兽药协会 发布 全国团体标准信息平台 T/CVDA 2 —2022 1 目 录 目 录 ................................ ................................ ................. 1 前 言 ................................ ................................ ............... 2 1 范围 ................................ ................................ ................. 3 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .......3 3 符号和缩略语 ................................ ................................ ......... 3 4 试剂和材料 ................................ ................................ ........... 3 5 器材和设备 ................................ ................................ ........... 4 6 动物血清 ................................ ................................ ............. 4 6.1 安全防护 ................................ ................................ ........... 4 6.2 血清采集 ................................ ................................ ........... 4 7 PRNT实验操作 ................................ ................................ ......... 4 7.1 安全防护 ................................ ................................ ........... 4 7.2 材料准备 ................................ ................................ ........... 4 7.2.1 病毒繁殖 ................................ ................................ ......... 5 7.2.2 毒价测定 ................................ ................................ ......... 5 7.2.3 细胞 ................................ ................................ ............. 5 7.2.4血清灭活 ................................ ................................ .......... 5 7.3 检测操作 ................................ ................................ ........... 5 7.3.1 对照设置 ................................ ................................ ......... 5 7.3.2 血清稀释 ................................ ................................ ......... 5 7.3.3 病毒与血清中和 ................................ ................................ ...6 7.3.4 接种细胞 ................................ ................................ ......... 6 7.3.5 结果判定 ................................ ................................ ......... 6 附录 A ................................ ................................ ................. 7 A.1 培养液 ................................ ................................ ............. 7 A.2 稀释液 ................................ ................................ ............. 7 A.3 细胞分散液 ................................ ................................ ......... 7 A.4 磷酸盐缓冲液 (PBS) ................................ ................................ ..7 附录B ................................ ................................ .................. 8 B.1 材料和试剂 ................................ ................................ ......... 8 B.2 方法 ................................ ................................ ............... 8 B.2.1 嵌合SARS-CoV-2 S蛋白重组水泡性口炎病毒的构建与拯救 .............................. 8 B.2.2 重组病毒的传代与毒价测定 ................................ ......................... 9 B.2.3 重组病毒的鉴定 ................................ ................................ ...9 B.2.4 rVSVΔG-nCoVS-EGFP为抗原的中和实验的回归分析 ................................ .....9 全国团体标准信息平台 T/CVDA 2 —2022 2 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2020给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中国兽药协会提出并归口管理，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所起草。 本标准主 要起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨医科大学，东北林业大学。 本标准主要起草人：步志高、葛金英、王永、王晓龙、山丹、王喜军。 本标准为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/CVDA 2 —2022 3 动物新型冠状病毒中和抗体检测技术 1 范围 本标准规定了用于动物新型冠状病毒血清中和抗体测定 的实验操作方法及结果判定标准。 本标准适用于动物血清中新型冠状病毒中和抗体的定性检测和定量测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB /T 1.1 -2020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则。 GB/T 6682 2008 分析实验室用水规格和试验方法 。 GB 19489 2008 实验室 生物安全通用要求