ICS 65.020.20 B 662 45 5 广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准 CCS DBB45/T 245 56—20222 金花 花茶组组织培 培养技术规程程 Technnical code of pr ractice ffor tissue cultu ure of Caamellia peteloti p ii (MMerrill) Sealy 2022 - 01 - 26 发布 发 广西壮 壮族自治区 区市场监督 督管理局 2022 - 02 0 - 28 实施 实 发 布 — DB45/T 2456 2022 目 次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 组织培养方法 ....................................................................... 1 5 组培苗移栽 ......................................................................... 2 6 苗期管理 ........................................................................... 2 附录 A（资料性） 培养基配方 ........................................................... 4 附录 B（资料性） 金花茶病虫害化学防治方法 ............................................. 5 I — DB45/T 2456 2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广西壮族自治区林业局提出、归口并宣贯。 本文件起草单位：广西壮族自治区林业科学研究院。 本文件主要起草人：林茂、王华新、唐庆、杨舒婷、李进华、陈尔、孙利娜、孙开道、廖美兰、 杜铃、黄欣、汪小玉。 II — DB45/T 2456 2022 金花茶组织培养技术规程 1 范围 本文件规定了金花茶（Camellia petelotii (Merrill) Sealy）组织培养的术语与定义、组织培养 方法、组培苗移栽以及苗期管理。 本文件适用于广西区内金花茶的组织培养。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 8321 (所有部分) 农药合理使用准则 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 组织培养方法 4.1 无菌播种 4.1.1 种子采收 10月～12月采收优良单株的成熟果实，选取粒大、饱满、未开裂、无霉变和虫害的种子。种子宜随 采随播，未及时播种的宜在5 ℃～8 ℃下冰箱保湿冷藏。 4.1.2 表面灭菌 种子先用0.1％中性洗涤剂水溶液浸泡20 min～30 min，然后在自来水下流水冲洗40 min～60 min。 在超净工作台上，将种子先用75％酒精浸泡40 s～60 s，无菌水冲洗3～5遍，再用0.1％氯化汞溶液浸泡 16 min～20 min，无菌水冲洗3～5遍。 4.1.3 种子处理及播种 种子 进 有 湿 宜。 的组培瓶中，埋入无菌河沙中，倒少量无菌水，以无菌河 放 盛 经高温高压灭菌锅灭菌河沙 沙 润为 4.1.4 外植体的获得 种子萌发后，选择具有2片子叶、真叶尚未展开的无菌苗，切取子叶和胚轴作为外植体。 待 1 — DB45/T 2456 2022 4.2 培养条件 各培养阶段的培养温度为25 ℃，光照强度为2 000 lx，光周期14 h～16 h。 4.3 愈伤组织诱导培养 将子叶和胚轴接入愈伤组织诱导培养基(参见附录A中的A.1)上进行诱导培养，培养30 d～35 d。 4.4 愈伤组织分化培养 将胚性愈伤组织接入分化培养基(参见附录A中的A.2)上进行培养，培养30 d～35 d。 4.5 生根培养 从分化培养获得的不定芽中切取生长健壮、高度为3 cm～4 cm的组培芽，接入生根培养基(参见附录 A中的A.3)上进行培养，培养20 d～30 d。 4.6 炼苗 选择根、茎、叶俱全，株高4.0 cm～5.0 cm，叶片4～6片，根数3条以上，根长3 cm～4 cm的组培苗， 先带瓶放置于室温为15 ℃～28 ℃、光照强度为3 000 lx～5 000 lx、空气相对湿度≥85％的环境中5 d～ 7 d，然后除去瓶盖继续放置1 d～2 d以进行炼苗。 5 组培苗移栽 5.1 环境条件 环境温度为15 ℃～28 ℃，空气相对湿度≥85％。 5.2 基质 基质采用1 000倍高锰酸钾溶液消毒的黄心土，pH值为5.5～6.5。移栽容器采用50或72孔育苗穴盘， 穴盘规格为54 cm×28 cm。将基质填充到育苗穴盘。 5.3 清洗 从培养瓶中取出组培苗，洗净根部培养基，用50％多菌灵可湿性粉剂800～1 000倍药液浸泡10 min， 在阴凉处晾10 min～15 min。 5.4 移栽 每穴种植1株，将小苗种植在基质中，浇透定根水。 5.5 移栽后管理 移栽后的组培苗置于苗床，覆膜，并采用遮光率为70％～80％的遮阳网进行遮光。白天喷雾6次， 每次喷雾60 s，每间隔2 h喷雾1次。移栽40 d后，去除薄膜。 6 苗期管理 2 — DB45/T 2456 2022 6.1 水分管理 宜在早晚进行，保持土壤湿润，空气湿度保持在85％以上。 6.2 施肥管理 每隔10 d～15 d用0.1％磷酸二氢钾水溶液叶面喷施1次，或每隔10 d～15 d用0.1％～0.3％尿素、 复合肥N-P O -K O（15-15-15）水溶液交替淋施1次。 2 5 2 6.3 病虫害防治 预防为主，综合防治。主要病害为炭疽病，病虫害化学防治方法参见附录B，农药使用应符合 GB/T 8321（所有部分）的规定。 3 — DB45/T 2456 2022 A A 附 录 A （资料性） 培养基配方 A.1 愈伤组织诱导培养基配方 M 2.00 mg/L 6-BA+0.50 mg/L 2,4-D＋30 g/L 白砂糖＋7.0 g/L琼脂，pH值为5.4～5.8。 WP + A.2 愈伤组织分化培养基配方 M 2.00 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA＋30 g/L 白砂糖＋7.0 g/L 琼脂，pH值为5.4～5.8。 WP + A.3 生根培养基配方 1/2 WPM+0.50～1.00 mg/L IBA＋30 g/L 白砂糖＋7.0 g/L 琼脂，pH值为5.4～5.8。 4 DB45/T 2456—20222 附 录 B （资料性） ） 金花茶茶病虫害化学 学防治方法 表B.1给出了金花 花茶病虫害化 化学防治的方方法。 表B.1 金金花茶病虫害 害化学防治方 方法 B 病虫害害名称 炭疽疽病 白绢绢病 藻斑斑病 赤叶叶枯病 根腐腐病 茶茶蚜 吹绵绵蚧 茶小绿绿叶蝉 农药名称 50％ ％多菌灵可湿性性粉剂 50％ ％甲基硫菌灵悬悬浮剂 45％代森铵水剂 4 剂 石灰 硫酸铜 75％肟菌 菌·戊唑醇水分分散粒剂 70％甲 甲基硫菌灵可湿湿性粉剂 60％福 福·福锌可湿性性粉剂 硫酸铜 15％噁霉灵水剂 1 剂 20％ ％啶虫脒可溶粉粉剂 10％吡虫啉乳油 1 油 25％ ％噻嗪酮可湿性性粉剂 500％杀螟硫磷乳乳油 20％异丙威乳油 2 油 25％ ％速灭威可湿性性粉剂 B 稀释倍数 1 000～1 0 200 倍 800～1 000 倍 800～1 000 倍 200～500 2 倍 2 000～3 0 000 倍 1 000～1 0 200 倍 1 000～1 0 200 倍 1 000 倍 4 000～5 0 000 倍 1 000～1 0 200 倍 2 000～3 0 000 倍 1 000～1 0 200 倍 1 000～1 0 200 倍 800～1 000 倍 600～800 6 倍 施药方法 施 叶面喷雾 叶 灌施 撒施 叶面喷雾 叶 喷洒 根部灌注 根 喷洒 喷洒 喷洒 5 中华人民共和国广西地方标准 金花茶组织培养技术规程 DB 45/T 2456―2022 广西壮族自治区市场监督管理局统一印刷 版权专有 侵权必究