ICS67.050 CCSX04 GDFS 广东省林学会团体标准 T/GDFS14—2022 木姜叶柯甜茶质量检测技术规程 CodeofpracticeonqualitydeterminationofLithocarpuslitseifolius （发布稿） 2022-06-06发布 2022-06-06实施 广东省林学会  发布 全国团体标准信息平台 T/GDFS14—2022 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由广东省林学会团体标准化技术委员会提出并归口。 本文件起草单位：广东省林业科学研究院。 本文件主要起草人：曾雷、王颂、徐巧林、王志宏、黄俊彬、陈颖乐、黄文妍、余玉娟。 全国团体标准信息平台 T/GDFS14—2022 1木姜叶柯甜茶质量检测技术规程 1范围 本文件规定了木姜叶柯（Lithocarpuslitseifolius(Hance)Chun）甜茶检测指标、检测方法等 技术要求。 本文件适用于木姜叶柯甜茶的质量测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 《中华人民共和国药典（2020年版）》附录薄层色谱法 《中华人民共和国药典（2020年版）》附录高效液相色谱法 《中华人民共和国药典（2020年版）》附录水分测定法 《中华人民共和国药典（2020年版）》附录灰分测定法 《中华人民共和国药典（2020年版）》附录浸出物测定法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 木姜叶柯甜茶 壳斗科（Fagaceae）柯属（Lithocarpus）植物木姜叶柯(Lithocarpuslitseifolius(Hance)Chun) 干燥的叶。原材料主要产地为湖南、江西、重庆、四川、广西、广东等省（区）。 3.2 三叶苷trilobatin 木姜叶柯的一种药性成分，分子式C21H24O10，分子量436.41。 3.3 根皮苷phlorizin 木姜叶柯的一种药性成分，分子式C21H24O10，分子量436.41。 4检测指标 4.1外观指标 木姜叶柯甜茶外观指标见表1。 表1木姜叶柯甜茶外观指标 项目 指标 颜色 叶片两面同色或叶背带苍灰色，叶片主要颜色可分为绿色与紫色。无霉变现象。 气味 气味甘，嫩叶有甜味。 形状大多数呈椭圆形、倒卵状椭圆形或卵形，很少为狭长椭圆形，长8cm～18cm，宽3cm～8cm，顶 部渐尖或短突尖，基部楔形至宽楔形，全缘，中脉在叶面凸起，支脉纤细。 质地 叶无毛，纸质至近革质。 全国团体标准信息平台 T/GDFS14—2022 24.2理化指标 木姜叶柯甜茶理化指标见表2。 表2木姜叶柯甜茶理化指标 项目 指标 水分 含水率（%） 总灰分 总灰分的含量（%） 醇溶性浸出物 醇溶性浸出物的含量（%） 主要特征成分TLC法：荧光斑点 HPLC法:保留时间、峰面积 5检测方法 5.1外观检测 取木姜叶柯甜茶样品，目测外观和形状，用毫米刻度尺分别测量叶长、宽尺寸，观察并触摸叶片表 面质地，鼻闻气味，口尝味道。 5.2理化检测 5.2.1水分 执行《中国药典》（2020年版）附录水分测定法规定的第一法测定。 5.2.2总灰分 执行《中国药典》（2020年版）附录灰分测定法规定的总灰分测定法测定。 5.2.3醇溶性浸出物 执行《中国药典》（2020年版）附录浸出物测定法规定的醇溶性浸出物测定法的热浸法测定，以95% 乙醇作为溶剂。 5.2.4主要特征成分 5.2.4.1TLC法 取本品粉末1.0g，加入60%乙醇溶液30mL超声处理30min，过滤，滤液蒸干，加入10mL二级水使 其溶解，过滤，加入20mL饱和正丁醇溶液振摇提取，用20mL二级水洗涤转移全部正丁醇提取液到旋转 蒸发仪，将所得溶液蒸干。残渣加甲醇1.0mL使其复溶，作为供试品溶液。另取木姜叶柯对照药材粉末 1.0g，同法制成对照药材溶液。参照《中华人民共和国药典》（2020年版）附录—薄层色谱法，吸取 上述两种溶液各10μL，分别落点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（12∶1∶1）为展开剂进 行展开，取出并晾干，喷以2%三氯化铝试液，置于紫外灯(365nm)下检视。供试品TLC色谱中，在与对 照药材色谱相应位置上，显示相同颜色的荧光斑点。结果图片见附录图A.1。 5.2.4.2HPLC法 5.2.4.2.1色谱参考条件 色谱柱：InertSustainC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈（A）-0.04%甲酸（B）梯度 洗脱（表2）；流速：0.8mL·min-1；柱温：40℃；进样量：5.0μL。检测波长：根皮苷（285nm）、 三叶苷（285nm）。混合标准品色谱图见图B.1。 全国团体标准信息平台 T/GDFS14—2022 3表3梯度洗脱流动相比例 时间（min） A(%) B(%) 0.01 28 72 14.00 28 72 30.00 40 60 35.00 28 72 35.01 5 95 40.00 5 95 40.01 28 72 45.00 28 72 5.2.4.2.2标准品溶液制备 精确称取真空干燥至恒定质量的根皮苷对照品20.0mg、三叶苷19.0mg，分别置于10mL容量瓶中， 加入70%乙醇溶解并定容，摇匀，即得根皮苷和三叶苷单一标准品母液。精密吸取两种单一标准品母液 0.15mL，置于10mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，得混合标准品溶液。 5.2.4.2.3供试品溶液制备 将样品干燥、粉碎、研磨，样品过65目筛，备用。称取木姜叶柯样品粉末0.25g，置于25.0mL具 塞锥形瓶中，加入70%乙醇10mL，100W、40kHz条件下超声提取30min，取出、放冷、定容、摇匀、 离心，取上清液1mL置于10mL容量瓶，用70%乙醇定容，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液供测 试。木姜叶柯样品HPLC图见图C.1。 5.2.4.2.4标准曲线绘制 依次精密量取采取5.2.4.2.2方法配制的混合标准溶液0.005mL、0.01mL、0.025mL、0.05mL、 0.1mL、0.25mL、0.5mL和1.0mL置于1.0mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，得系列质量浓度溶液。 取各个浓度的标准品溶液各5μL注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以样品浓度X （μg/mL）为横坐标，峰面积值Y为纵坐标，绘制标准曲线，分别得各标准品回归方程及线性范围。根皮 苷Y＝1.3937X-0.6714，r为0.9999，线性范围0.15μg/mL–29.40μg/mL；三叶苷Y＝1.5891X-0.8743， r为0.9998，线性范围0.14μg/mL–27.93μg/mL。同法逐级稀释，分别以信噪比S/N＝3和S/N＝10的 进样浓度确定检测限和定量限。 5.2.4.2.5样品测定 分别取木姜叶柯粗粉，按5.2.4.2.3的方法每份样品平行制备3份供试品溶液，按5.2.4.2.1的色谱 条件进行测定，利用5.2.4.2.4的方法建立的标准曲线，计算各供试品中根皮苷、三叶苷成分的含量。 6建档 建立木姜叶柯甜茶质量检测技术与管理档案，包括材料外观照片、检测仪器设备、实验试剂和标准 品信息、人员、色谱条件、原始记录数据等，以纸质和电子文档形式保存。 全国团体标准信息平台 T/GDFS14—2022 4AA 附录A （资料性） 木姜叶柯TLC图 A-紫外灯（365nm）；DY为大叶甜茶；DZ为甜茶对照品；SYG为三叶苷标准品；GPG为根皮苷标准品； ZY为紫叶甜茶；JY为尖叶甜茶 图A.1木姜叶柯薄层层析色谱图 全国团体标准信息平台 T/GDFS14—2022 5BB 附录B （资料性） 根皮苷、三叶苷标准品HPLC分析图 1─根皮苷；2─三叶苷；3─根皮素 图B.1根皮苷、三叶苷标准品HPLC图 全国团体标准信息平台 T/GDFS14—2022 6CC 附录C （资料性） 木姜叶柯HPLC分析图 1─根皮苷；2─三叶苷；3─根皮素 图C.1木姜叶柯HPLC图 _________________________________ 全国团体标准信息平台