ICS 11.120.01 CCS C27 团 体 标 准 T/TPPA 0003 -2022 中药注射剂对豚鼠离体回肠的收缩作用 操作规程 Operating procedure for contraction of traditional Chinese medicine injection on isolated ileum of guinea pig 2022-12-22发布 2022-12-22实施 全国团体标准信息平台 T/TPPA 0003-2022 目 次 前 言 ................................ ................................ .......... I 1 范围 ................................ ................................ ............ 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .. 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ...... 1 4 检测原理 ................................ ................................ ........ 2 5 材料与设备 ................................ ................................ ...... 2 5.1 材料 ................................ ................................ ........ 2 5.2 设备 ................................ ................................ ........ 2 6 实验方法 ................................ ................................ ........ 2 6.1 溶液配制 ................................ ................................ .... 3 6.2 实验步骤 ................................ ................................ .... 3 7 数据处理及判定 ................................ ................................ .. 5 天津市医药行业协会 发布 全国团体标准信息平台 T/TPPA 0003-2022 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第 1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由 天津天士力之骄药业有限公司 提出。 本文件由天津市医药行业协会归口。 本文件起草单位： 天津天士力之骄药业有限公司、天津大学、天津市药品检验研究院、天津市中药 注射剂安全性评价企业重点实验室、创新中药关键技术国家重点实验室、现代中医药海河实验室、河南 天地药业股份有限公司、天津红日药业股份有限公司 。 本文件主要起草人： 鞠爱春、高文远、华晓东、李霞、李德坤、岳洪水、张俊华、周水平、王娟、 周立华、万梅绪、郑文科、王冲、徐琳、张燕欣、李智、何毅、白晓丽、马晓慧、王蕴华 、黄芝娟、 江 昕、张松梅。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/TPPA 0003-2022 1 中药注射剂对豚鼠离体回肠的收缩作用操作规程 1 范围 本文件规定了 静息豚鼠离体 回肠，乙酰胆碱 、组胺、氯化钾和氯化钙诱导的 豚鼠离体回肠 的实验方 法。 本文件适用于中药注射剂对豚鼠离体回肠收缩作用的评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 14925 实验动物 环境及设施 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 24001 环境管理体系 要求及使用指南 GB/T 45001 职业健康安全管理体系 要求及使用指南 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 乙酰胆碱 acetylcholine 乙酰胆碱 是一种神经递质 。在组织内迅速被 胆碱酯酶 破坏。能特异性地作用于各类胆碱 受体。 3.2 组胺 histamine 组胺是一种有机含氮化合物，是由组氨酸在脱羧酶的作用下产生的。许多组织，特别是皮肤、肺和 肠黏膜的肥大细胞中含有大量的组胺。当组织受到损伤或发生炎症和过敏 或类过敏反应时，都可释放组 胺。组胺有强烈的刺激血管作用，并能使毛细血管和微静脉的管壁通透性增加，血浆漏入组织，导致局 部组织水肿。 全国团体标准信息平台 T/TPPA 0003-2022 2 3.3 毒蕈碱受体 muscarinic receptor 毒蕈碱受体简称 M受体，广泛存在于 副交感神经 节后纤维 支配的效应器细胞上。当 乙酰胆碱 与这类 受体结合后，可产生一系列副交感 神经末梢 兴奋地效应，包括心脏活动的抑制，支气管 平滑肌、胃肠道 平滑肌、 膀胱逼尿肌 和瞳孔括约肌的收缩，以及 消化腺分泌增加等。 3.4 组胺1型受体 histamine receptor 1 组胺1型受体简称H1受体，是组胺受体的一种亚型，组胺通过激活 H1受体产生支气管平滑肌兴奋、 毛细血管通透性增加和部分血管扩张效应。 临床常用H1受体阻断药物治疗皮肤黏膜过敏反应。 4 检测原理 乙酰胆碱和组胺是引起回肠平滑肌收缩及诱发变态反应的主要递质。乙酰胆碱和组胺为 M1、H1受体 完全激动剂，分别与 M1受体和H1受体结合，通过 G蛋白介导激活磷脂酶 C，使4,5二磷酸肌醇磷脂水解为 二酰甘油及 1,4,5-三磷酸肌醇。二酰甘油在细胞膜上激活蛋白激酶 C，使靶蛋白磷酸化，激活钙通道， 使细胞外 Ca2+内流增加， 从而导致回肠平滑肌收缩 。 5 材料与设备 5.1 材料 5.1.1 实验动物 豚鼠，雌雄均可，体重 200g±50g，实验用豚鼠在 18-29℃条件下适应性饲养 3d后进行实验，动物饲 养符合GB 14925和GB/T 24001的要求，动物实验符合 GB 19489和GB/T 28001的要求。 5.1.2 试剂试药 a） 乙酰胆碱：含量不低于 99.0%。 b） 组胺：含量 不低于97.0%。 c） 氯化钾、氯化钙、氯化钠、氯化镁、碳酸氢钠、磷酸二氢钾、葡萄糖 ，上述试剂均 为分析纯 。 d）水为GB/T 6682规定的三级水 。 5.2 设备 组织器官灌流装置、生物信号采集系统。 6 实验方法 全国团体标准信息平台 T/TPPA 0003-2022 3 6.1 溶液配制 6.1.1 台氏液的配制 称取氯化钠 8.01g、氯化钾 0.20g、氯化钙 0.20g、氯化镁 0.10g、碳酸氢钠 1.00g、磷酸二氢钾 0.05g、葡萄糖 1.01g，溶解并定容至 1000mL，调节至 pH至7.4，24h内使用。 6.1.2 乙酰胆碱溶液的配制 称取乙酰胆碱适量 ，加水配制成 适宜浓度 的乙酰胆碱 溶液。 6.1.3 组胺溶液的配制 称取组胺适量，加水配制成 适宜浓度 的组胺溶液。 6.1.4 氯化钾溶液的配制 称取氯化钾适量 ，加水配制成 适宜浓度 的氯化钾溶液。 6.1.5 氯化钙溶液的配制 称取氯化钙适量 ，加水配制成 适宜浓度 的氯化钙溶液。 6.2 实验步骤 6.2.1 离体标本制备 豚鼠适应性饲养 3d，实验前禁食 12h，自由饮水。每组选择体重在 200g±50 g的豚鼠6～10只，处 死后，5min内取出回肠，在距回盲部 10cm处取出约 10cm的一段回肠，将内容物用 0℃台氏液冲洗干 净，剪取 3段约2cm的肠段。用细线将肠段一端悬挂于通气挂钩，另一端与张力换能器相连，置于盛放 有37℃台氏液的麦氏水浴槽中，并缓慢通入 95%氧气和5%二氧化碳的混合气体，控制气体流速在 2～3 个气泡/秒。调整前负荷在 1.5g，用生物信号采集系统平衡 1h±15min，期间每 20mi