ICS65.020 B20 团体标准 T/AFFI038-2023 葡萄干中8种真菌毒素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 2023-04-11发布 2023-04-11实施 阿拉尔果业行业联合协会发布 全国团体标准信息平台 T/AFFI038—2023 目录 前言.....................................................1 1范围..................................................2 2规范性引用文件........................................2 3术语和定义............................................2 4原理..................................................2 5试剂与材料............................................2 6仪器和设备............................................3 7分析步骤..............................................3 8结果计算..............................................5 9精密度................................................6 10其他.................................................6 全国团体标准信息平台 T/AFFI038—2023 1前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第一部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由新疆兵团第一师阿拉尔市果业行业联合协会提出。 本文件由新疆兵团第一师阿拉尔市果业行业联合协会归口。 本文件起草单位：新疆维吾尔自治区产品质量监督检验研究院、新疆兵团第一师阿拉尔 市果业行业联合协会、新疆艾旗斯德检测科技有限公司 本文件主要起草人：孙蕾、韩瑨烜、丁煜玮、寇雷、宋敏、李慧、何军、祁来芳、付晓 静、陈晨 本文件实施应用中的疑问，请咨询新疆维吾尔自治区产品质量监督检验研究院（乌鲁木 齐市河北东路188号）。 新疆维吾尔自治区产品质量监督检验研究院：联系电话：0991-3191180；邮编：830011 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/AFFI038—2023 2葡萄干中8种真菌毒素残留量的测定液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准要求用于新疆地区葡萄干。 本标准规定了葡萄干中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素 G2、赭曲霉毒素A、T-2毒素、伏马毒素B2、展青霉素的检验方法。 本文件适用于本地区葡萄干中8种真菌毒素残留量的检测。 2规范性引用文件 本文件中引用的文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注 日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文无术语和定义。 4原理 试样经粉碎，用1%甲酸-乙腈溶液提取，提取液经分散固相萃取净化，液相色谱-三重 四级杆质谱仪测定，外标法定量。 5试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1乙腈（色谱纯）； 5.1.2氯化钠（分析纯）； 5.1.3无水硫酸镁（分析纯）； 5.1.4甲酸（色谱纯）； 5.1.5柠檬酸钠二水合物（分析纯）； 5.1.6柠檬酸二钠盐倍半水合物（分析纯）； 5.1.71%甲酸-乙腈溶液：量取10mL甲酸用乙腈定容至1000mL容量瓶中，混匀；5.1.80.1% 甲酸-水溶液：量取1mL甲酸用纯水定容至1000mL容量瓶中，混匀； 5.2标准品 黄曲霉毒素B1（CAS号：1162-65-8），纯度大于98%、黄曲霉毒素B2（CAS号：7220-81-7）， 全国团体标准信息平台 T/AFFI038—2023 3纯度大于98%、黄曲霉毒素G1（CAS号：1165-39-5），纯度大于98%、黄曲霉毒素G2（CAS 号：7241-98-7），纯度大于98%、赭曲霉毒素A（CAS号：303-47-9），纯度大于98%、 T-2毒素（CAS号：21259-20-1），纯度大于98%、伏马毒素B2（CAS号：116355-84-1）， 纯度大于95%、展青霉素（CAS号：149-29-1），纯度大于98%。 5.3标准溶液配制 5.3.1展青霉素标准储备液的配制（1mg/mL）：准确称取展青霉素标准品10mg用乙腈定 容至10mL，-18℃冷冻避光保存，有效期12个月。 5.3.2展青霉素标准中间液的配制（10μg/mL）：准确吸取展青霉素标准储备液1.0mL用 乙腈定容至100mL，-18℃冷冻避光保存，有效期6个月。 5.3.3其他7种真菌毒素混合标准储备液的配制（1mg/mL）：分别准确称取7种毒素标准 品各10mg用甲醇定容至10mL，-18℃冷冻避光保存，有效期12个月。 5.3.4其他7种真菌毒素混合标准中间液的配制（10μg/mL）：准确吸取混合标准储备液 1.0mL用甲醇定容至100mL，-18℃冷冻避光保存，有效期6个月。 5.4材料 5.4.1乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：粒径：40~60μm； 5.4.2十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：粒径：50μm； 5.4.3石墨化炭黑（GCB）：粒径40~120μm； 5.4.4陶瓷均质子：2cm（长）×1cm（外径），或相当者； 5.4.5微孔滤膜：13mm×0.22μm，或相当者。 6仪器和设备 6.1液相色谱-三重四级杆质谱联用仪：配有电喷雾电离源（Electrosprayionization,ESI）； 6.2电子天平：感量0.01g和0.01mg； 6.3离心机：转速不低于5000rpm； 6.4超声清洗仪； 6.5组织捣碎机。 6.6涡旋混合器。 7分析步骤 7.1试样制备 随机取干制葡萄样品500g，粉碎机粉碎后备用。 7.2试样提取 准确称取2g粉碎样品（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入10mL水，静置30min， 加入10mL1%甲酸-乙腈提取液、1粒陶瓷均质子，涡旋混匀30s，加入5g~7g氯化钠、1g 柠檬酸钠二水合物、0.5g柠檬酸二钠盐倍半水合物，涡旋混匀30s，超声提取20min，5000 rpm下离心5min，吸取2mL上清液至含有150mg无水硫酸镁、50mgPSA、50mgC18的 塑料离心管内，对于颜色较深的样品，离心管内另加入25mgGCB，涡旋混匀30s，静置沉 降1min，取上清液过滤膜（5.4.5），待测定。 全国团体标准信息平台 T/AFFI038—2023 47.3测定 7.3.1液相色谱参考条件 色谱柱：当测定展青霉素时，采用T3色谱柱（2.1mm×100mm，粒度1.8μm)，或同等 性能的色谱柱；当测定其他7种真菌毒素时，采用C18色谱柱（2.1mm×100mm，粒度1.9 μm)，或同等性能的色谱柱。 流动相：当测定展青霉素时，A：水，B：乙腈；当测定其他7种真菌毒素时，A：0.1% 甲酸-水，B：甲醇。梯度洗脱程序见表1。 流速：0.2mL/min； 柱温40℃； 进样量：2μL。 表1梯度洗脱程序 时间/min VA VB 0.0 90 10 2.0 90 10 5.0 10 90 7.0 10 90 7.5 90 10 10.0 90 10 7.3.2质谱参考条件 离子源类型：电喷雾电离源； 扫描方式：多反应监测模式（MultipleReactionMonitoring,MRM），当测定展青霉素时， 采用负离子扫描（ES-）。当测定其他7种真菌毒素时，采用正离子扫描（ES+），8种物质 母离子、子离子质谱信息见表2； 电喷雾电压：-2500V、3500V； 离子源温度：350℃； 雾化气：40Arb； 辅助气：10Arb。 表28种真菌毒素母离子、子离子质谱信息 化合物名称 电离模式 母离子 子离子 碰撞能（V）去簇电压（V） 黄曲霉毒素B1 正 313.1 241.2*/269.229.47/30.15 161 黄曲霉毒素B2 正 315.1 259.0*/287.128.55/25.05 173 黄曲霉毒素G1 正 329.1 214.5*/243.031.37/25.56 166 黄曲霉毒素G2 正 331.1 245.1*/313.128.84/22.82 183 赭曲霉毒素A 正 402.1 167.0*/358.135.03/18.27 137 T-2毒素 正 489.3 245.1*/327.126.23/22.61 189 伏马毒素B2 正 706.3 336.6*/353.137.10/31.16 169 展青霉素 负 153.0 109.1*/81.1 8.41/11.44 59 全国团体标准信息平台 T/AFFI038—2023 5注：*表示定量离子表。 7.3.3基质标准曲线的绘制 选择与待测样品性质相同或者相似的空白样品按照7.1、7.2的方法进行处理，得到空白 基质溶液。精密量取一定量的展青霉素标准中间液与混合标准中间液，用空白基质溶液逐级 稀释成展青霉素质量浓度为0.050μg/mL、0.100μg/mL