ICS65.020.30 CCSB44 14 山西省地方标准 DB14/T2663—2023 实验用小型猪遗传质量控制 2023-01-18发布 2023-04-18实施 山西省市场监督管理局  发布 DB14/T2663—2023 I目次 前言..................................................................................II 1范围................................................................................1 2规范性引用文件......................................................................1 3术语和定义..........................................................................1 4遗传分类及命名......................................................................1 5繁殖方法............................................................................2 6遗传质量监测........................................................................2 7判定结论............................................................................6 8报告................................................................................6 DB14/T2663—2023 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由山西省科学技术厅提出、组织实施和监督检查。 山西省市场监督管理局对标准的组织实施情况进行监督检查。 本文件由山西省实验动物标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：山西医科大学。 本文件主要起草人：宋国华、高继萍、陈朝阳、王晓堂、宋晓娜、杨钧婷、闫晓如、郭永昌。 DB14/T2663—2023 1实验用小型猪遗传质量控制 1范围 本文件规定了实验用小型猪的遗传分类与命名、繁殖方法、遗传质量监测、判定结论和报告。 本文件适用于实验用小型猪的遗传质量控制。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB14923实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制 NY/T1673畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 实验用小型猪experimentalminipig 经人工饲育，对其携带的病原微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研 究、教学、生产、检定以及其他科学实验的小型猪。 近交系inbredstrain 经连续20代及以上的全同胞兄妹或亲代与子代交配培育而成，品系内所有个体都可追溯到起源于 第20代或以后代数的一对共同祖先。近交系数（inbreedingcoefficient）应大于99%。 封闭群closedcolony 以非近亲交配方式进行繁殖生产的实验动物种群，在不从外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖 4代以上。 4遗传分类及命名 遗传分类 根据遗传特点的不同，实验用小型猪分为近交系和封闭群。 命名 4.2.1近交系命名 近交系一般以大写英文字母或加阿拉伯数字命名，符号应尽量简短，如WSZ。 4.2.2近交代数 DB14/T2663—2023 2近交代数用大写英文字母F表示。例如当一个近交系的近交代数为30代时，写成（F30）。 4.2.3其它近交系 亚系、重组近交系、重组同类系、同源突变近交系、同源导入近交系的定义和命名按照GB14923 执行。 4.2.4封闭群命名 封闭群的命名按照GB14923执行。 5繁殖方法 近交系实验用小型猪繁殖方法 5.1.1原则 保持近交系实验用小型猪的同基因性及基因纯合性。 5.1.2引种 近交系实验用小型猪繁殖用种子应来自于近交系的基础群或血缘扩大群，遗传背景明确，有完整的 资料（包括品系名称、来源、近交代数、遗传基因特点及主要生物学特征等）。 5.1.3方法 基础群、血缘扩大群和生产群的繁殖方法按照GB14923执行。当近交系小型猪生产供应数量不是 很大时，一般不设血缘扩大群，仅设基础群和生产群。 封闭群实验用小型猪繁殖方法 5.2.1原则 保持封闭群小型猪的基因异质性和多态性，以非近亲交配方式进行繁殖,避免近交系数随繁殖代数 增加而过快上升。 5.2.2引种 5.2.2.1封闭群小型猪繁殖用种子应遗传背景明确，有完整的资料（包括种群名称、来源、近交代数、 遗传基因特点及主要生物学特性等）。 5.2.2.2根据繁殖方式，在保证每代近交系数增量不大于1%的前提下，决定最小引种规模。宜采用 循环交配方式，最小引种规模为13对无血缘关系（三代以内无共同祖先）的公母猪；若采用随机交配 的方式，最小引种规模为25对无血缘关系的公母猪。 5.2.3方法 具体繁殖方法按照GB14923执行。 6遗传质量监测 近交系实验用小型猪的遗传质量监测 DB14/T2663—2023 36.1.1监测方法 采用微卫星DNA标记检测方法。具体方法按照NY/T1673执行，各微卫星DNA标记的染色体位 置、等位基因数、等位基因分布范围、引物序列、荧光标记、退火温度、镁离子浓度等见表1。 表1各微卫星位点的名称、引物序列、PCR反应的退火温度、镁离子浓度（Mg2+）、荧光标记、染色体 位置、等位基因数、等位基因分布范围 座位名称 引物序列5'→3'退火温度 （℃）Mg2+ (mmol/L)5'荧光 标记染色体 位置等位基 因数等位基因分布 范围（bp） CGAF-ATAGACATTATGTAAGTTGCTGAT R-GAACTTTCACATCCCTAAGGTCGT55 2.5 FAM 1q 12 250-320 SW240F-AGAAATTAGTGCCTCAAATTGG R-AAACCATTAAGTCCCTAGCAAA55 1.5 TAMRA 2P 8 96-115 SW72F-ATCAGAACAGTGCGCCGT R-GTTTGAAAATGGGGTGTTTCC55 1.5 TAMRA 3P 8 100-116 S0005F-TCCTTCCCTCCTGGTAACTA R-GCACTTCCTGATTCTGGGTA55 3.0 FAM 5q 10 205-248 S0090F-CCAAGACTGCCTTGTAGGTGAATA R-GCTATCAAGTATTGTACCATTAGG55 1.5 TAMRA12q 4 244-251 SW769F-GGTATGACCAAAAGTCCTGGG R-TCTGCTATGTGGGAAGAATGC55 3.0 HEX 13 7 106-140 SW857F-F-TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACC R-GATCCTCCTCCAAATCCCAT55 1.5 TAMRA 14 6 144-160 S0355F-TCTGGCTCCTACACTCCTTCTTGATG R-GTTTGGGTGGGTGCTGAAAAATAGGA55 3.0 HEX 15 14 243-277 SW24F-CTTTGGGTGGAGTGTGTGC R-ATCCAAATGCTGCAAGCG55 1.5 FAM 17 8 96-121 S0218F-GTGTAGGCTGGCGGTTGT R-CCCTGAACCCTAAAGCAAAG55 1.5 TAMRA X 8 164-184 注：F表示正向引物，R表示反向引物。 6.1.2时间间隔 近交系实验用小型猪生产群每年至少进行1次遗传质量检测。 6.1.3抽样 对基础群，凡在子代留有种猪的双亲动物都应进行检测。 对生产群，按照表2要求从每个近交系中随机抽取非同窝成年实验用小型猪，公母各半。 表2近交系实验用小型猪生产群遗传监测抽样要求 DB14/T2663—2023 4生产群中母猪数量（N头） 抽样数量（头） N≤50 4 50<N≤100 6 N>100 >6 6.1.4结果判定 近交系实验用小型猪遗传质量监测结果判定按照表3执行。 表3近交系实验用小型猪遗传质量监测结果判定 监测结果 判定 与标准遗传概貌完全一致 未发现遗传变异，合格 有一个位点的标记基因与标准遗传概貌不一致 遗传发生变异，不合格 封闭群实验用小型猪遗传质量监测 6.2.1监测方法 采用微卫星DNA标记检测方法。具体方法按照NY/T1673执行，各微卫星DNA标记的染色体位 置、等位基因数、等位基因分布范围、引物序列、退火温度、镁离子浓度等见表4。 表4各微卫星位点的名称、引物序列、PCR反应的退火温度、镁离子浓度（Mg2+）、染色体位置、等位 基因数、等位基因分布范围 座位名称 引物序列（5'→3'）退火温 度(℃)镁离子浓度 (mmol/L)染