昭通市地方标准 DB5306/T94-2023 马铃薯金线虫田间监测技术规范 2023-02-15发布 2023-04-06实施 昭通市市场监督管理局发布DB5306ICS65.020 CCSB05 DB5306/T94-2023 I前  言 本文件按照GB/T1.1－2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由昭通市植保植检站提出。 本文件由昭通市农业农村局归口。 本文件起草单位：昭通市植保植检站，中国农业科学院植物保护研究所。 本文件主要起草人：许翀、彭德良、杨毅娟、彭焕、宋家雄、李永青、陈敏、黄文坤、张汉学、普 松权、王琴、李平松、郭威、李兴松、梅焱、徐松、邓磊、卢绘娟、陈永燕、马列、马永琼、姚光禄、 罗道瑛。 DB5306/T94-2023 1 马铃薯金线虫田间监测技术规范 1范围 本文件规定了马铃薯金线虫田间监测技术的术语和定义、试剂和设备、监测方法、形态学鉴定、调 查记录、注意事项。 本文件适用于昭通市马铃薯种植区马铃薯金线虫田间监测调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1723.1-2022马铃薯金线虫和马铃薯白线虫检疫鉴定方法 SN/T2757植物线虫检测规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 马铃薯金线虫 主要为害马铃薯并可寄生在番茄、茄子和烟草等多种茄科植物上的一种球孢囊线虫。 3.2 孢囊 孢囊类线虫发育过程中的特殊阶段，为雌虫死亡后形成的褐色虫体，体内充满卵。 4试剂和设备 4.1主要试剂 蔗糖，高岭土，甘油，盐酸，甲醛，酸性品红等。 4.2主要设备 4.2.1标准网筛：孔径0.9mm、0.2mm和0.0308mm。 4.2.2生物显微镜：40~600倍。 4.2.3体视显微镜：10~120倍。 5监测方法 5.1系统调查 5.1.1调查点设定 选择具马铃薯金线虫为害后症状的马铃薯地块2～3块，每块666.7m2以上，作为系统调查固定观察 点。 DB5306/T94-2023 2 5.1.2孢囊及卵量调查 在马铃薯播种前或马铃薯收获后，采用“Z”形或“五点”采样法，取5cm~20cm的根际土壤，每 个样点取土量不少于0.5kg，将所取土样充分混合后，“四分法”取1kg左右装入样品袋，注明采样时间、 地点等，室内摊开自然风干。称取200g风干土样，采用简易漂浮法（参见B.2）分离土壤中孢囊，在体 视显微镜下计数。随机挑取、轻轻挤破10个孢囊，释放出卵，制备卵悬浮液，计算每克土样中的卵量， 调查结果记入表C.1。 5.1.3发育进度调查 在重点区域设立固定监测点，从马铃薯种植出苗至收获期间，每20d调查1次，其中初花期、盛花 期、谢花末期应各调查1次。每次挖取2株马铃薯，将所采马铃薯的根剪下后漂洗干净，用40%甲醛 液固定，采用酸性品红法染色，方法参见附录D。在体视显微镜下观察根内线虫的发育进度，调查结果 记入表C.2。 5.1.4雌虫调查 5.1.4.1调查方法 马铃薯盛花期、谢花末期采用“Z”形或“五点”取样法。每点5株，计数单株根系上的雌虫数。 5.1.4.2严重度分级 根据马铃薯根部雌虫的数量，将马铃薯金线虫病发生程度分为5级。 0级：无雌虫，无孢囊，无病； 1级：轻度感染（每株雌虫1~10个）； 2级：中度感染（每株雌虫11~30个）； 3级：重度感染（每株雌虫31~100个）； 4级：危重感染（每株雌虫100个以上）。 5.1.4.3病情指数 病情指数按式（1）进行计算： ……………………………………..（1） 式中： I——病情指数； di——严重度级值； li——各级病株数； P——调查总株数； D——严重度最高级别值。 5.1.4.4结果记录 雌虫调查结果记入表C.3。 5.2大田抽查100( DPldIii）＝ DB5306/T94-2023 3 5.2.1抽查时间 在马铃薯种植前、开花期和盛花期。 5.2.2抽查方法 按低、中、高风险区、不同品种选择调查田，每种区域调查数量分别不少于10块、20块、30块。 种植前取土样调查，大田雌虫抽查取样方法同5.1.4，抽查结果记入表C.4。 6鉴定方法 6.1样品采集 马铃薯等植株出现黄化、矮化，开花期后根部出现先白色、后金黄色雌虫，采集根系和根际土壤样 品进行室内鉴定。为害症状参见附录A。 6.2形态学鉴定 6.2.12龄幼虫和孢囊分离 分离样品中的2龄幼虫和孢囊。分离方法参见附录B。 6.2.2标本制作 按照SN/T2575和SN/T1723.1-2022规定的方法制作。 6.2.3显微镜观察 在显微镜下观察孢囊、2龄幼虫、雌虫和雄虫的形态特征，并拍照。 6.2.4形态学鉴别特征 按照SN/T1723.1-2022规定的鉴别特征进行识别。 6.2.5结果判定 按照SN/T1723.1-2022规定的要求判定。 7调查记录 详细记录调查方法和鉴定过程，并存档。 8注意事项 8.1田间取样 田间需防护取样，避免鞋、袜、衣服、取样工具等带土出田，防止取样时传播该病害。 8.2检测后样品处理 检测后的样品，需在水沸腾的情况下煮或蒸0.5h以上，才能作为垃圾处理。 DB5306/T94-2023 4附录A （资料性） 马铃薯金线虫为害症状和形态学特征 A.1为害症状 马铃薯金线虫为害马铃薯的根系，地上部无特殊识别症状，根系受害引起植物逆境反应，使水 分和营养物质的吸收能力降低，地上部表现为水分和无机营养缺乏症状，地上部矮化、叶边缘发黄 焦枯和其它失绿症状；在干旱条件下叶片表现凋萎症状，中午时分凋萎症状表现特别明显。金线虫 危害后常常使马铃薯早衰和侧根增生。田间病株分布不均匀，有发病中心团。随着连续种植马铃薯 和农事操作，病团年年扩大，最后全田发病，并从一块田传到另一块田。田间病害诊断最主要的是 进行金线虫的孢囊调查。在马铃薯开花前后，取植株根系，仔细观察受害植株的根部可见到金黄色 的球形雌虫，故称马铃薯金线虫(potatogoldencystnematode)，雌虫成熟后逐步变成深褐色， 马铃薯收获后，根系孢囊遗落到土壤中。见图A.1、图A.2。 图A.1马铃薯金线虫孢囊