ICS 65.020.01 CCS B20 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2692—2022 饲草中 58 种农药及相关化学品残留量的测 定 液相色谱-串联质谱法 Determination of 58 pesticides and related chemical residues in grass products —HPLC-MS/MS method 2022-07-15 发布 2022-08-15 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2692—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧业科学院提出。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。 本文件主要起草人：张欣昕、张福金、孙林、羿静、史培、刘广华、杨永青、郭志刚、莎娜、康博 洋、吴海波、郭艳琼、刘浩、于婷婷、张尧。 I DB15/T 2692—2022 饲草中 58 种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本文件规定了饲草中58种农药及相关化学品（见附录A）残留量的高效液相色谱-串联质谱测定方 法。 本文件适用于禾本科与豆科的青草、青贮饲料和干草中58种农药及相关化学品残留的定性分析和 定量测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 NY/T 2129 饲草产品抽样技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 青草 grass 由审定品种生产出的用于放牧家畜、刈割青饲或进一步加工成青干草、草块、草颗粒、青贮的饲料。 青贮饲料 silage 以新鲜或半干的牧草、饲料作物及农作物副产品等为原料，在厌氧条件下利用发酵原料表面附着的 乳酸发酵，或者外源添加剂的作用下促进或抑制微生物发酵，调制出的具有特殊芳香气味的饲料。 干草 hay 利用（在适宜时期）在天然草地或人工草地上种植的牧草及禾谷类饲料作物，经过自然或人工干燥 调制的能长期保存的草料。 4 原理 1 DB15/T 2692—2022 样品中的农药及相关化学品用乙腈匀浆或震荡提取后，经分散固相萃取法净化，高效液相色谱-串 联质谱进行测定，采用保留时间和质谱碎片及其离子丰度比定性，外标法定量。 5 试剂和材料 水（H2O，CAS 号：7732-18-5）：GB/T 6682 规定的一级水。 乙腈（CH3CN，CAS 号：75-05-8）：色谱纯。 甲醇（CH3OH，CAS 号：67-56-1）：色谱纯。 甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6）：色谱纯。 氯化钠（NaCl，CAS 号：7647-14-5）。 无水硫酸镁（MgSO4，CAS 号：7487-88-9）：研磨后在 650 ℃马弗炉内烘至恒重，置于干燥器中保 存。 水-乙腈溶液（9+1，体积比）：量取 100 mL 乙腈（5.2）加入 900 mL 水（5.1）中，混匀。 甲酸水溶液（0.1%）：量取 1.0 mL 甲酸（5.4）加水（5.1）稀释，定容至 1000 mL。 标准品：农药及相关化学品标准品，见附录 A 中的表 A.1，纯度≥95%，。 标准储备溶液（1000 mg/L）：准确称取约 10 mg（精确至 0.1 mg）各农药标准品，用甲醇（5.3） 溶解并分别定容至 10 mL 容量瓶中，避光—18 ℃及以下条件保存，有效期 1 年。 混合标准溶液（10.0 mg/L）：分别准确吸取 0.10 mL 不同农药的标准储备溶液（5.10）于同一 个 10 mL 容量瓶中， 用甲醇稀释并定容至刻度，避光—18 ℃及以下条件保存，有效期 3 个月。 基质混合标准工作溶液：准确吸取一定量的混合标准溶液（5.11），用空白样品的基质溶液稀释 成一定浓度的基质混合标准工作溶液，使用前临时配制。 乙二胺- N -丙基硅烷化硅胶（PSA）：粒径 40 µm～60 µm。 微孔过滤膜（尼龙）：13 mm×0.2 µm。 6 仪器和设备 高效液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。 高速组织捣碎机：转速 10000 r/min 以上。 离心机：转速 6000 r/min 以上。 恒温振荡提取器。 涡旋混合器。 氮气吹干仪。 7 样品采集、制备和保存 按照NY/T 2129规定采集样品，去杂质后充分混匀，按照GB/T 20195规定制备样品，用四分法缩分 至约200 g，青草和青贮样品切短至小于0.5 cm，干草样品粉碎过1.00 mm筛。青草和青贮饲料样品-18 ℃ 冷冻保存，干草样品4 ℃低温密封保存。 8 测定步骤 提取 2 DB15/T 2692—2022 8.1.1 青草和青贮饲料样品 准确称取10 g样品(精确到0.01 g)于50 mL离心管中，加入20.0 mL乙腈（5.2），用高速组织捣碎 机（6.3）在10000 r/min下，匀浆提取1 min，6000 r/min离心5 min，转移上清液至另一50 ml离心管， 加入1g氯化钠（5.5），涡旋混合1 min，6000 r/min离心5 min，取乙腈相备用。 8.1.2 干草样品 准确称取2 g样品(精确到0.01 g)于50 mL离心管中，加入10 mL水充分浸泡40 min，然后再加入20.0 mL乙腈（5.2），混匀，用恒温振荡提取器（6.5）提取30 min，6000 r/min离心5 min，转移上清液至 另一50 ml离心管，加入1 g氯化钠（5.5），涡旋混合1 min，6000 r/min离心5 min，取乙腈相备用， 取乙腈相备用。 净化 移取乙腈相2.00 mL于10 mL离心管中，加入150 mg无水硫酸镁（5.6）和50 mg PSA（5.13），涡旋 混合1 min后，6000 r/min离心5 min，氮吹仪控制温度40 ℃，在水浴中浓缩至0.5 mL左右，用水-乙腈 溶液（5.7）定容至2.0 mL，过0.2 µm微孔滤膜（5.14），待测。 空白样品提取液的制备 取不含待测物空白样品，按8.1和8.2步骤制备空白样品提取液，配制基质混合标准工作溶液。 测定 8.4.1 高效液相色谱-质谱法测定条件 高效液相色谱和质谱参数可参考下列条件： ——色谱柱：C18，100 mm×2.1 mm（内径），粒径：1.7 µm，或相当者； ——流动相：A：0.1 %甲酸溶液（5.8），B：乙腈（5.2），梯度洗脱见表 1； 表1 梯度洗脱表 时间 流速 min mL/min 0.00 A / % B / % 0.35 90.0 10.0 2.00 0.35 70.0 30.0 3.00 0.35 10.0 90.0 6.50 0.35 10.0 90.0 7.00 0.35 90.0 10.0 ——柱温：40 ℃； ——进样量：1 µL； ——离子源：电喷雾（ESI）； ——扫描方式：正离子扫描模式； ——检测方式：多反应监测（MRM）； ——电离电压：2500 V； ——离子源温度：120 ℃； ——雾化温度：450 ℃； 3 DB15/T 2692—2022 ——锥孔气流速：50 L/h； ——雾化气流速：650 L/h； ——待测物定性定量离子对的锥孔电压、碰撞电压见附录 B 中的表 B.1。 8.4.2 定性测定 在相同条件下进行样品测定时，如果样品中检出的色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且在扣除 背景的样品质谱图中，目标化合物选择的子离子均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目 标化合物的离子丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过表2规定的范围，则可 判断样品中存在目标化合物。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差 相对离子丰度/% ≥50 20 ～50 10 ～20 ≤10 允许最大偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 8.4.3 定量测定 本文件中采用外标-校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，采用基质混合标准工作 溶液（5.12）绘制标准曲线。并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内。 在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液和制备的样品进行分析。在上述色谱和质谱条件下， 标准工作液中的各特征离子多反应监测（MRM）色谱图见附录C中的图C.1。 平行实验 按上述步骤，对同一样品进行平行实验测定。 空白实验 除不加试料外，其余过程按上述步骤进行。 9 结果计算 样品中待测物的测定结果可由仪器工作软件计算或按式（1）计算，计算结果用平行测定的算术平 均值表示，保留2位有效数字： X = 式中： X —— C —— V —— V1 —— m —— V2 —— 样品中待测物的含量，mg/kg； 样品中待测物的浓度，mg/L； 样品溶液定容体积，mL； 样品溶液提取体积，mL； 样品的称样量，g； 样品溶液分取体积，mL。 10 检出限、回收率和精密度 4 c  V V1  ﹒﹒﹒﹒﹒﹒﹒﹒﹒﹒﹒﹒﹒﹒（1） m V2 DB15/T 2692—2022 检出限和定量限 本文件中58种农药及相关化学品的检出限和定量限应符合附录D中的表D.1的规定。 回收率 本文件中58种农药及相关化学品的回收率，见附录E中的表E.1和表E.2。 精密度 在实验室内重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值的15%，在实验室 间再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值的20%。 5 DB15/T 2692—2022 A A 附 录 A （资料性） 58 种农药及相关化学品的中英文名称和 CAS 号对照索引 58 种农药及相关化学品的中英文名称和CAS号见表A.1。 表A.1 58 种农药及相关化学品的中英文名称和 CAS 号对照索引表 序号 中文名称 01 甲胺磷 methamidophos 10265-92-6 02 氧乐果 omethoate 1113-02-6 03 多菌灵 carbendazim 10605-21-7 涕灭威 aldicarb 116-06-3 涕灭威砜 aldic