ICS 65.020.01 CCS B04 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2687—2022 天然青干草中挥发性成分的测定 顶空固相微萃取-气相色谱质谱联用法 Determination of volatile components in native hay grass—headspace solid-phase microextraction gas chromatography mass spectrometry 2022-07-15 发布 2022-08-15 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2687—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古农业大学提出。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业科学院、中国农业科学院草原研究所、巴 林左旗林业和草原局、呼伦贝尔学院。 本文件主要起草人：贾玉山、李宇宇、格根图、王志军、孙林、特日格乐、袁宁、马千鹏、常春、 降晓伟、都帅、王伟、丁霞、包健、司强、刘明健。 I DB15/T 2687—2022 天然青干草中挥发性成分的测定 顶空固相微萃取-气相色谱质谱联用法 1 范围 本文件规定了天然青干草中挥发性成的测定顶空固相微萃取—气相色谱质谱联用法的仪器设备、 试样制备和保存、分析步骤、结果分析与计算和精密度。 本文件适用于典型草原天然青干草中醛、酮、醇类等挥发性成分的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 20195 动物饲料试样的制备 NY/T 2129 饲草产品抽样技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 天然青干草 native hay grass 天然草地生长的经适时刈割、自然晾晒或人工干燥的牧草。 4 仪器设备 固相微萃取装置，配 DVB/CAR/PDMS 纤维萃取头。 气相色谱—质谱联用仪。 磁力搅拌器（60 RPM～1150 RPM、5 ℃～550 ℃）。 温度计（0 ℃～150 ℃）。 分析天平感量 0.01 g。 5 试样制备和保存 抽样 1 DB15/T 2687—2022 按照NY/T 2129执行。 分析样品制备 按照GB/T 20195执行。 试样保存 置于-20°冰箱中，24 h内完成分析。 6 分析步骤 萃取纤维头的老化 6.1.1 DVB/CAR/PDMS 纤维萃取头进行老化。 6.1.2 老化条件：温度 250 ℃，时间 20 min，载气流速 1 mL/min。 固相微萃取（SPME）参考分析条件 6.2.1 称取 2 g 样品置于 20 mL 专用顶空瓶中，立即密封，置加热磁力搅拌器上 70 ℃预热 5 min，然 后将老化后的纤维萃取头插入顶空瓶中进行萃取，不要让萃取头接触样品。 6.2.2 萃取条件：温度 70 ℃，萃取时间 60 min，解吸时间 3 min。 气相色谱（GC）参考分析条件 6.3.1 气相色谱柱：5%苯基甲基聚硅氧烷石英毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），或等效色谱 柱； 6.3.2 色谱柱升温程序：起始温度 50 ℃，保留 4 min，以 5 ℃/min 上升到 200 ℃，保留 5 min 再以 15 ℃/min，程序升温至 250 ℃，保持 4 min。 6.3.3 色谱条件：进样口温度 250 ℃，载气为高纯氦气纯度≧99.999%，载气流速 1 mL/min，进样方 式为手动进样，不分流进样模式。 质谱（MS）参考分析条件 电离方式EI，电离电压70 eV，离子源温度230 ℃，传输线温度280 ℃，采集方式为全扫描方式， 质量扫描范围40 m/z～550 m/z。 7 结果分析与计算 使用 NIST 数据库定性。质谱图的相似度不小于 80%色谱峰，见附录 A。 用峰面积归一化法计算各挥发性成分的相对含量。 按如下公式计算： ……………………（1） 2 DB15/T 2687—2022 式中： Ci——试样中挥发性成分i的峰面积分数，以百分数表示（%）； Ai——试样中挥发性成分i的峰面积； ——试样中各挥发性成分的峰面积之和。 8 精密度 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值10%，结果保留小数点后2 位数字。 3 DB15/T 2687—2022 A A 附 录 A （资料性） 典型草原天然青干草挥发性成分总离子流图 A.1 典型草原天然青干草挥发性成分总离子流图（TIC）见图 A.1，典型草原天然牧草干草主要挥发性 成分质谱鉴定结果见表 A.1。 图A.1 典型草原天然青干草挥发性成分总离子流图（TIC） 表A.1 典型草原天然青干草主要挥发性成分质谱鉴定结果 序 保留时间 号 （min） 1 化合物 英文名称 CAS 号 15.428 十九碳三烯 Nonadeca-3,6,9-triene 89353-62-8 2 21.34 丁香酚 Eugenol 97-53-0 3 22.631 甲基丁香酚 Methyleugenol 93-15-2 4 23.016 β-石竹烯 β-Caryophyllene 87-44-5 5 23.74 香叶基丙酮 Geranyl acetone 3796-70-1 6 24.543 α-姜黄烯 α-curcumene 644-30-4 7 24.702 β-紫罗兰酮 β-ionone 79-77-6 8 25.182 2,5-乙烯[4.2.2]丙基-3,7,9-三烯 2,5-Etheno[4.2.2]propella-3,7,9-triene 92-52-4 9 25.679 芳姜黄酮 ar-tumerone 38142-58-4 10 26.096 二氢猕猴桃内酯 Dihydroactinidiolide 15356-74-8 11 27.102 桉油烯醇 Spathalenol 77171-55-2 12 28.896 氧化石竹烯 Caryophyllene oxide 1139-30-6 13 32.643 6,10,14-三甲基-2-十五烷酮 6,10,14-Trimethyl-2-pentadecanone 205-69-2 4