SN-T 0533-2016 出口水果中乙氧喹啉残留量检测方法

书书书　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜０５３３—２０１６代替ＳＮ０２８７ —１９９３、ＳＮ０５３３ —１９９６出口水果中乙氧喹啉残留量检测方法犕犲狋犺狅犱犳狅狉狋犺犲犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犲狋犺狅狓狔狇狌犻狀狉犲狊犻犱狌犲犻狀犳狉狌犻狋狊犳狅狉犲狓狆狅狉狋２０１６１２１２发布２０１７０７０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ０２８７ —１９９３《出口水果中乙氧喹残留量检验方法　液相色谱法》和ＳＮ０５３３ —１９９６《出口水果中乙氧三甲喹啉残留量检验方法》，与ＳＮ０２８７ —１９９３、ＳＮ０５３３ —１９９６相比，除编辑性修改外主要技术变化如下： — — —变更标准名称； — — —采用液相色谱 荧光检测法和液相色谱 质谱／质谱法，代替原有荧光分光光度法和液相色谱 紫外检测法； — — —将检测范围的适用基质扩大到苹果、梨、桃、李、柑橘； — — —修改了样品前处理方法； — — —降低了方法测定低限。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：浙江省检验检疫科学技术研究院。本标准主要起草人：黄超群、谢文、楼成杰、陈玲玲、张文华、童 /G21恺、吴娟。本标准所代替标准的历次版本发布情况为： — — —ＳＮ０２８７ —１９９３； — — —ＳＮ０５３３ —１９９６。 Ⅰ犛犖／犜０５３３—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.出口水果中乙氧喹啉残留量检测方法１　范围本标准规定了出口水果中乙氧喹啉测定的高效液相色谱和液相色谱 质谱／质谱检测方法。本标准适用于出口苹果、梨、桃、李、柑橘中乙氧喹啉的测定。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法第一法　高效液相色谱法３　方法提要不同水果采用相应方法制备试样，以正己烷为溶剂，振荡提取、浓缩并定容后，高效液相色谱 荧光法测定，外标法定量。４　试剂和材料除特殊注明外，所用试剂均为色谱纯，所用水为符合ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。４．１　乙腈。４．２　甲醇。４．３　正己烷。４．４　维生素Ｃ：分析纯。４．５　标准物质：乙氧喹啉，Ｃ１４Ｈ１９ＮＯ，ＣＡＳ登录号９１  ５３  ２，纯度大于９７．５％。４．６　标准储备溶液：准确称取适量标准物质（４．５），用甲醇溶解并定容，配制成溶液浓度为２００μｇ／ｍＬ的标准储备液，０℃～４℃保存，有效期６个月。４．７　标准工作溶液：根据需要，将标准储备液（４．６）用甲醇稀释成适当浓度的标准工作溶液，０℃～４℃保存。４．８　微孔滤膜：≤０．４５μｍ，有机相。５　仪器和设备５．１　高效液相色谱仪：配有荧光检测器。５．２　组织捣碎机。５．３　分析天平：感量０．０００１ｇ和０．０１ｇ。５．４　涡旋混合器。１犛犖／犜０５３３—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.５．５　振荡器。５．６　台式离心机：转速不低于４０００ｒ／ｍｉｎ。５．７　氮吹仪。６　试样制备与保存６．１　试样制备６．１．１　苹果、梨、桃、李取代表性样品约５００ｇ，将其可食用部分切碎（不可用水洗涤）后，按１ｇ维生素Ｃ／１００ｇ样品比例，加入一定量维生素Ｃ，用捣碎机将样品加工成浆状。混匀，装入洁净的盛样容器中，密封并标明标记。６．１．２　柑橘取代表性样品约５００ｇ，将其可食用部分切碎（不可用水洗涤）后，用捣碎机将样品加工成浆状。混匀，装入洁净的盛样容器中，密封并标明标记。６．２　试样保存试样于－１８℃以下冷冻保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。７　测定步骤７．１　样品处理准确称取１０ｇ试样（精确至０．０１ｇ），置于５０ｍＬ塑料离心管中，加入２０ｍＬ正己烷，涡旋混匀，振荡提取１５ｍｉｎ后，４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ。准确移取４．０ｍＬ上清液至１０ｍＬ离心管中，缓慢氮吹至干，加入１．０ｍＬ甲醇，涡旋，经滤膜过滤，供液相色谱仪测定。７．２　测定７．２．１　液相色谱条件液相色谱条件如下：ａ）　色谱柱：Ｃ１８，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径），５μｍ，或相当者；ｂ）　流动相：乙腈水，梯度洗脱程序见表１；表１　液相色谱法梯度洗脱程序时间ｍｉｎ乙腈％水％０．００２０８０２．００２０８０６．００９５５８．００９５５１２．００２０８０１６．００２０８０２犛犖／犜０５３３—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.　　ｃ）　检测波长：激发波长３６０ｎｍ，发射波长４３５ｎｍ；ｄ）　柱温：２５℃；ｅ）　流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｆ）　进样量：２０μＬ。７．２．２　液相色谱测定按７．２．１液相色谱条件测定标准工作溶液和样液，以外标曲线法计算样液中的乙氧喹啉含量。如果样液中乙氧喹啉的含量超出标准曲线范围，应用甲醇稀释后再进行分析。在上述色谱条件下，乙氧喹啉的参考保留时间约为１０．８ｍｉｎ。标准溶液色谱图参见附录Ａ中图Ａ．１。７．３　空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。８　结果计算和表述用色谱数据处理机或按式（１）计算试样中乙氧喹啉的含量：犡ｉ＝犮ｉ×犞×１０００犿×１０００…………………………（１）式中：犡ｉ— — —试样中乙氧喹啉的含量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犮ｉ— — —从标准曲线上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；犞— — —样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿— — —最终样液所代表的试样质量，单位为克（ｇ）。计算结果应扣除空白值。９　测定低限和回收率９．１　测定低限本方法对于苹果、梨、桃、李和柑橘中乙氧喹啉的测定低限均为０．０５ｍｇ／ｋｇ。９．２　回收率本方法回收率试验数据见表２。表２　回收率试验数据（狀＝６）添加浓度ｍｇ／ｋｇ回收率范围％苹果梨桃李柑橘０．０５９０．０～１０８．０８４．０～９８．０８４．０～１０２．０７６．０～９２．０８４．０～９４．００．１０ — — ８４．０～１００．０８０．０～９３．０８４．０～９２．０１．０７９．４～９７．５８９．０～１０７．０８２．１～１０１．０７９．１～８５．３８９．５～９５．９３．０９０．３～１０４．０９６．７～１０７．０ — — — ６．０９２．７～１０１．５９３．７～１０５．８ — — — ３犛犖／犜０５３３—２０１６ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.第二法　液相色谱 质谱／质谱法１０　方法提要不同水果采用相应方法制备试样，以正己烷为溶剂，振荡提取、浓缩并定容后，液相色谱 质谱／质谱法测定，外标法定量。１１　试剂和材料所用试剂和材料均同４．１～４．８。１２　仪器和设备除特殊注明外，所用仪器和设备均同５．２～５．７。１２．１　液相色谱 质谱／质谱仪，配电喷雾离子源。１３　试样制备与保存试样制备与保存同６．１和６．２。１４　测定步骤１４．１　样品处理准确称取１０ｇ试样（精确至０．０１ｇ），置于５０ｍＬ塑料离心管中，加入２０ｍＬ正己烷，涡旋混匀，振荡提取１５ｍｉｎ后，４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ。准确移取１．０ｍＬ上清液至１０ｍＬ离心管中，缓慢氮吹至干，加入５．０ｍＬ甲醇，涡旋，经滤膜过滤，供液相色谱 质谱／质谱仪测定。１４．２　测定１４．２．１　液相色谱 质谱／质谱条件液相色谱 质谱／质谱条件如下：ａ）　色谱柱：Ｃ１８，１５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径），５μｍ，或相当者；