代替S N 0 4 9 4—1 9 9 5 出口粮谷中克瘟散检验方法 D e t e r m i n a t i o n o f E d i f e nph o s i n gr a i n s f o r e xpo r t 2 0 2 1-1 1-2 2发布 2 0 2 2-0 6-0 1实施 中华人民共和国海关总署 发 布 以正式出版文本为准I C S6 7.0 5 0 C C SC5 3 S N/T0 4 9 4—2 0 2 1中华人民共和国出入境检验检疫行业标准以正式出版文本为准前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替SN 0494—1995 《出口粮谷中克瘟散残留量检验方法》。 本文件与SN 0494—1995相比,主要技术变化如下: ———增加液相色谱-质谱/质谱法,作为第一法,仲裁法。 ———将原来的气相色谱法作为第二法,改变了前处理方法,选择了新的测试条件。 ———略去了抽样步骤,增加试样的制备与保存。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国长春海关。 本文件主要起草人:胡婷婷、李爱军、冯博、杨璐、康明芹、赵韫慧、李玲、宋清莲。 ⅠSN/T0494—2021 以正式出版文本为准以正式出版文本为准出口粮谷中克瘟散检验方法 1 范围 本文件规定了出口粮谷中克瘟散残留量的测定方法。 本文件适用于大米、糙米、小米、玉米及面粉中克瘟散残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适 用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 第一法 液相色谱-质谱/质谱法 4 方法提要 试样用90%乙腈溶液提取,经固相萃取柱净化后,供液相色谱-质谱/质谱仪测定及确证,外标法 定量。 5 试剂和材料 除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682 规定的一级水。 5.1 乙腈:色谱纯。 5.2 甲醇:色谱纯。 5.3 甲酸:色谱纯。 5.4 0.1%甲酸溶液(体积分数):量取1 mL甲酸(5.3)和999 mL水,混匀。 5.5 乙腈-0.1%甲酸溶液(6+4,体积比):量取600 mL乙腈和400 mL0.1%甲酸溶液(5.4),混匀。 5.6 90%乙腈溶液(体积分数):量取900 mL乙腈和100 mL水,混匀。 5.7 克瘟散标准品(CAS号:17109-49-8,分子式:C14H15O2PS2,纯度大于等于98.0%)。 5.8 克瘟散标准储备溶液:准确称取适量克瘟散标准品,用甲醇配制成浓度为100 μg/mL的标准储备 溶液。该溶液在0 ℃~4 ℃冰箱中保存。 5.9 克瘟散标准工作溶液:根据需要将克瘟散标准储备溶液用空白基质液稀释成适用浓度的标准工作 溶液。该溶液在0℃~4 ℃冰箱中保存。 1SN/T0494—2021 以正式出版文本为准5.10 空白基质液:称取阴性试样,参照标准方法处理,即可得到空白基质液。 5.11 ProElut AFT-3固相萃取柱:12 mL,含有氨基及C18成分(1∶1),或相当者。 5.12 有机微孔滤膜:0.22 μm。 6 仪器、设备与器具 6.1 仪器设备 6.1.1 液相色谱-质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI)。 6.1.2 电子天平:感量为0.01 g和0.000 1 g。 6.1.3 均质仪。 6.1.4 旋转蒸发器。 6.1.5 离心机:转速10 000 r/min 或以上。 6.1.6 涡漩混匀器。 6.1.7 粉碎机。 6.2 器具 6.2.1 浓缩瓶:250 mL。 6.2.2 具塞离心管:聚四氟乙烯,50 mL。 6.2.3 标准网筛:425 μm。 7 试样的制备与保存 取有代表性样品约500 g,用粉碎机粉碎(除面粉外),样品全部过425 μm标准网筛,混匀,装入洁 净容器,密封,标明标记。并于0 ℃~4 ℃条件下保存。 8 测定步骤 8.1 提取 称取试样2 g(精确到0.01 g)于50 mL离心管中,加入8 mL 90%乙腈溶液(5.6),均质提取 1 min。10 000 r/min离心4 min,上层清液待净化。 8.2 净化 将全部上清液加载在固相萃取柱上,接收流出液,待上清液全部流出后,再用2 mL 90%乙腈溶液 (5.6)淋洗固相萃取柱1),接收全部流出液,将全部流出液混匀转移至250 mL浓缩瓶中,于35 ℃下旋转 蒸发至近干,用乙腈-0.1%甲酸溶液(5.5)定容至1 mL,过0.22 μm滤膜,待上机。 1) 非商业性声明:本实验应用迪马公司ProElut AFT-3固相萃取柱完成,此处列出固相萃取柱型号仅是为了提供 参考,并不涉及商业目的,鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的商品。8.3 测定 8.3.1 色谱参考条件 本文件所用的色谱参考条件如下: 2SN/T0494—2021 以正式出版文本为准a) 色谱柱:C18,2.1 mm×150 mm,3.5 μm,或相当者; b)柱温:25 ℃ c)流动相:乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱程序见表1; d)流速:0.25 mL/min; e)进样量:10.0 μL。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间/min 乙腈/% 0.1%甲酸水溶液/% 0 60.0 40.0 3.00 60.0 40.0 6.00 90.0 10.0 8.00 90.0 10.0 8.01 60.0 40.0 12.00 60.0 40.0 8.3.2 质谱参考条件 本文件所用的质谱参考条件1)如下: a) 电离方式:电喷雾电离(ESI); b)扫描方式:正离子扫描; c)检测方式:多反应监测(MRM); d)电喷雾电压:5 500 V; e)气帘气(CUR):25 Psi; f)雾化气(GS1):40 Psi; g)辅助气(GS2):40 Psi; h)碰撞气(CAD):7.0 Psi; i)离子源温度:550 ℃; j)定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量见表2。 1) 非商业性声明:所提供参数是在安捷伦1200液相色谱仪和API4000质谱仪上完成的,此处列出试验用仪器型 号仅是为了提供参考,并不涉及商业目的,鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。表2 克瘟散的监测离子对、去簇电压和碰撞能量 化合物名称母离子 m/z子离子 m/z去簇电压 V碰撞能量 V 克瘟散 311.2283.4a90 18 173.3 90 26 注: a为定量离子。 8.3.3 液相色谱-质谱/质谱检测及确证 根据样液中被测组分含量情况,选定浓度相近的标准工作溶液,标准工作溶液和待测样液中克瘟散 3SN/T0494—2021 以正式出版文本为准的响应值均应在仪器检测的线性范围内,标准工作溶液与样液等体积参插进样测定。对于高浓度样品 须适当进行系列稀释。 8.3.4 定性分析 标准溶液及样液均按8.3.1和8.3.2规定的条件进行测定,如果检测的色谱峰保留时间与标准工 作液一致,允许偏差小于±2.5%。定性离子对的相对丰度应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一 致,相对丰度允许偏差不超过表3规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测物。 表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 ≤10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 8.3.5 定量测定 根据试样中被测样液中被测组分的含量情况,选取响应值相近的标准工作液进行分析,对于高浓度 样品须适当进行系列稀释。标准工作液和样液中被测组分的响应值均应在仪器线性响应范围内。在 8.3.1及8.3.2条件下,参考保留时间为3.45 min,外标法定量。标准溶液的多反应监测色谱图参见图 A.1。 9 结果计算和表述 用色谱数据处理软件或按(1)式计算试样中克瘟散含量,计算结果需扣除空白值。 X=c×V m…………………………( 1 ) 式中: X———试样中克瘟散含量,单位为毫克每千克 (mg/kg); c———由标准工作曲线计算得到的试样中克瘟散的浓度,单位为毫克每升(mg/L); V———样液最终定容体积,单位为毫升 (mL); m———最终样液所代表的试样质量,单位为克 (g)。 注: 计算结果应扣除空白值,表示到小数点后两位。 10 测定低限和回收率 10.1 测定低限 本方法对大米、糙米、小米、玉米及面粉中克瘟散残留量的测定低限均为0.01 mg/kg; 10.2 回收率 样品中克瘟散的添加浓度及其回收率参见表B.1。 4SN/T0494—2021 以正式出版文本为准