以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 0337 —2019 代替 SN/T 0037— 1995 中华人民共和国海关总署 发 布ICS 67.050 C 53 2019 -12-27发布 2020 -07-01 实施出口植物源性食品中克百威及其代谢物 残留量的测定 液相色谱-质谱 / 质谱法 Determination of carbofuran and its metabolite residues in plant-derived food for export —— HPLC-MS/MS method以正式出版文本为准以正式出版文本为准I SN/T 0037—2019前 言 本标准按照 GB/T 1.1— 2009 给出的规则起草。 本标准代替 SN 0337— 95《出口水果和蔬菜中克百威残留量检验方法》 。本标准与 SN 0337— 95 相比，主要技术性变化如下：——标准名称由《出口水果和蔬菜中克百威残留量检验方法》修改为《出口植物源性食品中克百 威及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱 / 质谱法》 ； ——增加了克百威代谢物 3-羟基克百威的检测；——扩大了标准检测的适用范围； ——删减了抽样部分； ——改进了样品前处理技术；——仪器方法由气相色谱法变更为液相色谱-质谱 / 质谱法。——降低了定量限，针对不同样品基质给出了克百威及其代谢物的添加回收率范围。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：李晓娟、吴玉平、张洋、施鹏斐、王超、李淑娟。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：—— SN 0337— 1995。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 0037—2019出口植物源性食品中克百威及其代谢物残留量的测定 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 1　范围 本标准规定了出口植物源性食品中克百威及其代谢物 3- 羟基克百威残留量的测定方法。 本标准适用于大米、小麦、大豆、花生、洋葱、油菜、菠菜、番茄、黄瓜、马铃薯、橙子、苹 果、香蕉和茶叶中克百威及其代谢物 3- 羟基克百威残留量的检测和确证。 2　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 2763-2016　食品安全国家标准　食品中农药最大残留量 GB/T 6682　分析实验室用水规格和实验方法 3　原理 试样加酸化乙腈振荡提取，经 QuEChERS 方法对提取液进行净化，采用液相色谱-质谱/质谱法测 定，外标法定量。 4　试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1　乙腈 : 色谱纯。 4.2　甲酸：色谱纯。4.3　乙酸。 4.4　氯化钠。4.5　无水硫酸镁。4.6　乙二胺 -N- 丙基硅烷化硅胶（PSA） ：40 μm ～ 60 μm 。 4.7　十八烷基硅烷键合硅胶（C18） ：40 μm ～ 60 μm。 4.8　石墨化炭黑（GCB） ：40 μm ～ 120 μm。 4.9　0.5% 乙酸 - 乙腈溶液：准确量取 2.5 mL 乙酸于 500 mL 容量瓶中，加入乙腈（4.1）定容，混匀。4.10　0.5% 甲酸溶液：准确量取 2.5 mL 甲酸于 500 mL 容量瓶中，加入一级水定容，混匀。4.11　0.1% 甲酸溶液：准确量取 0.5 mL 甲酸于 500 mL 容量瓶中，加入一级水定容，混匀。4.12　乙腈 - 水溶液（30+70, 体积比） ：取 30 mL 乙腈（4.1）和 70 mL 一级水混合均匀。4.13　0.1% 甲酸 - 乙腈溶液：准确量取 0.5 mL 甲酸于 500 mL 容量瓶中，加入乙腈（4.2）定容，混匀。4.14　克百威标准物质： C 12H15NO3，CAS 号：1563-66-2，纯度大于等于 90%。 4.15　3- 羟基克百威标准品：C12H15NO4 ，CAS 号：16655-82-6，纯度大于等于 90%。 4.16　 克百威标准储备液：准确称取 10 mg （精确至 0.1mg) 克百威标准品于 10 mL 容量瓶中，用乙腈以正式出版文本为准2 SN/T 0037—2019（4.2）溶解并定容，配制成浓度约为 1 mg/ mL 的标准储备液，于 0 ℃～ 4 ℃冰箱内避光保存。 4.17　3- 羟基克百威标准储备液：准确称取 10 mg （精确至 0.1mg) 克百威标准品于 10 mL 容量瓶中，用 乙腈（4.1）溶解并定容，配制成浓度约为 1 mg/ mL 的标准储备液，于 0 ℃～ 4 ℃冰箱内避光保存。4.18　 克百威标准中间液：准确吸取适当体积的克百威标准储备液，用乙腈（4.1）配制成浓度为 10.0 mg/L 的标准中间液，于 0℃～ 4 ℃冰箱内避光保存。4.19　3- 羟基克百威标准中间液：准确吸取适当体积的 3- 羟基克百威标准储备液，用乙腈（4.1）配制成浓度为 10.0 mg/L 的标准中间液，于 0℃～ 4 ℃冰箱内避光保存。 4.20　 克百威和 3- 羟基克百威混合标准工作液：取适量的克百威标准中间液（4.18）和 3- 羟基克百威 （4.19）标准中间液，用乙腈 - 水溶液（4.12）配制成标准工作液，该工作液需现用现配。 5　仪器设备 5.1　液相色谱-质谱 / 质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI） 。 5.2　电子天平：感量 0.01 mg 和 0.01 g。 5.3　振荡器。5.4　旋涡混合器。5.5　离心机：最高转速不低于 10 000 r/min。 5.6　氮吹浓缩仪。5.7　高速离心管：规格为 50 mL 和 5 mL。 6　试样制备与保存 6.1　试样制备 粮谷、油料及茶叶类样品：取代表性样品约 500 g , 用粉碎机全部粉碎并通过 20 目筛；水果及蔬 菜类样品：取代表性样品约 500 g，用匀浆机或组织捣碎机均质。样品制备后分别装入洁净的盛样瓶 内，密封并标明标记。 6.2　试样保存 粮谷、油料及茶叶类试样于 0 ℃ ～ 4 ℃保存；水果及蔬菜类试样于 -18 ℃以下冷冻保存。在抽 样及制样的过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 7　测定步骤7.1　提取 7.1.1　蔬菜和水果类：称取 5 g 试样 （精确至 0.01 g） 于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 0.5% 乙酸 - 乙腈溶 液（4.9） ，涡旋混匀后振荡提取 30 min，加入约 2 g 氯化钠和约 2 g 无水硫酸镁，涡旋混匀，20 000 r/min 条件下离心 3 min，取上清液待净化。7.1.2　粮谷、油料类和茶叶类：称取 2 g 试样（精确至 0.01 g）于 50 mL 离心管中，加入 5 mL0.5% 乙酸溶液（4.10） ，涡旋混匀静置 30min，加入 10 mL 0.5% 乙酸 - 乙腈溶液（4.9） ，涡旋混匀后振荡提取 30 min， 加入约 2 g 氯化钠和约 2 g 无水硫酸镁，涡旋混匀，于 10 000 r/min 条件下离心 3 min，取上清液待净化。 7.2　净化 准确称取 250 mg 无水硫酸镁、100 mg PSA、100 mg C18 和 50 mg GCB 净化材料加入 5 mL 高速以正式出版文本为准3 SN/T 0037—2019离心管中。准确移取 2mL 上清液（7.1）加入 5 mL 高速离心管中，涡旋混匀，于 10 000 r/min 离心 3 min，取 1 mL 上清液置于玻璃管中，于 40 ℃下氮气吹至近干，再加入 1.0 mL 乙腈 - 水溶液（4.12） 充分溶解定容，过 0.2 μm 尼龙滤膜，待 LC-MS/MS 测定。 7.3　液相色谱 - 质谱 / 质谱测定 7.3.1　液相色谱条件7.3.1.1　色谱柱：C 18，100 mm×2.1 mm×1.7 μm ，或性能相当者。 7.3.1.2　柱温： 45 ℃。 7.3.1.3　进样量：5 μL。 7.3.1.4　流动相及梯度洗脱条件见表 1。 表 1　流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /mL/min 流动相 A/%（0.1% 甲酸 - 乙腈） 流动相 B/%（0.1% 甲酸溶液） 0.00 0.4 5.0 95.0 0.50 0.4 5.0 95.0 2.00 0.4 95.0 5.0 3.00 0.4 95.0 5.0 3.50 0.4 5.0 95.0 7.3.2　质谱条件 仪器质谱条件参见附录 A。 7.3.3　定性测定 按照 7.3.1 的条件测定标准溶液及样液，如果样液与标准溶液质量色谱峰保留时间相差不超过 ±2.5%，在扣除背景后的质谱图中，所选择的监测离子全部出现，且定性离子的相对丰度（用相对 于最强离子丰度的强度百分比表示）与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。 表 2　定性确证时相对离子丰度最大容许误差 相对离子离子 （基峰） >50 20 ～ 50 10 ～ 20 ≤ 10 允许的相对偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.3