ICS 07.140 CCS C06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0115—2021 代替 SF/Z JD0107015 —2015 血液中45种有毒生物碱的液相色谱 -串联 质谱检验方法 Determination of 45 toxic alkaloids in blood by liquid chromatography - tandem mass spectrometry 2021 - 11 - 17发布 2021 - 11 - 17实施 中华人民共和国司法部 发布 SF/T 0115 —2021 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 原理 ................................ ................................ ............... 1 5 试剂、仪器和材料 ................................ ................................ ... 1 6 定性分析 ................................ ................................ ........... 2 7 定量分析 ................................ ................................ ........... 5 8 分析结果评价 ................................ ................................ ....... 7 附录A（资料性） 血液中45种有毒生物碱的检出限和定量限 ................................ 8 SF/T 0115 —2021 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替 SF/Z JD0107015 —2015《血液中 45种有毒生物碱成分的液相色谱 -串联质谱检验方法》 ， 与SF/Z JD0107015 —2015相比，除结构调整和编辑性改 动外，主要技术变化如下： a) 更改了定性分析和定量分析的表述方式（见第 6章和第7章，2015年版的6.2.2和6.2.3）； b) 增加了定性分析和定量分析中进样、记录和判断依据等内容（ 见6.2.2、6.3、6.4、7.3.2和 7.4.1）； c) 更改了部分离子对参数（见 6.2.1中表1，2015年版的附录 A中表A.1）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 司法鉴定科学研究 院提出。 本文件由 司法部信息中心归口。 本文件起草单位： 司法鉴定科学研究 院。 本文件主要起草人： 刘伟、沈敏、卓先义、沈保华、向平 、严慧。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： —— 2015年首次发布为 SF/Z JD0107015 —2015； —— 本次为第一次修订 。 SF/T 0115 —2021 1 血液中45种有毒生物碱的液相色谱 -串联质谱检验方法 1 范围 本文件描述 了血液中 45种有毒生物碱 的液相色谱 -串联质谱（ LC-MS/MS）的检验 方法，包括原理、 试剂、仪器和材料、 定性分析、定量分析以及分析结果 评价。 本文件适用于血液中 45种有毒生物碱 的定性定量分析。 其它检材中 45种有毒生物碱 的定性定量分 析参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 血液中的 45种有毒生物碱在碱性条件下用有机溶剂提取和净化后，用液相色谱 -串联质谱法 (LC- MS/MS)进行检测，经与平行操作的空白样品和添加 样品比较，以保留时间 、特征离子 对和离子对丰度比 进行定性分析；以定量离子 对峰面积为依据， 采用内标法或 外标法进行定量分析。 5 试剂、仪器和材料 试剂 试验用水 应为符合 GB/T 6682 中规定的一级水，所用试剂 和要求如下 ： a) 乙腈：HPLC级； b) 50%甲酸溶液 ：HPLC级； c) 甲醇：HPLC级； d) 乙醚：分析纯； e) 乙酸铵：色谱纯 ； f) pH9.2 硼砂缓冲液：分析纯； g) 20mmol/L 乙酸铵溶 液（含0.1%甲酸）： 分别称取乙酸铵 1.54g和50%甲酸溶液2mL置于1000mL 容量瓶中，加水定容至刻度， pH值约为4； h) 混合溶液 [乙腈:20mmol/L 乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（7:3，v/v）]； i) 45种有毒生物碱 对照品储备 液：分别精密称取 45种有毒生物碱对照品各适量，用甲醇配成 质 量浓度为 1.0mg/mL 对照品储备液，置冰箱中冷冻保存，有效期为 12个月； j) 45种有毒生物碱 对照品工作液：试验中所用其它质量浓度的对照品工作液均由符合 5.1 i)的 对照品储备液用甲醇稀释而得。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期为 3个月； k) 内标物SKF525A对照品储备 液：精密称取 SKF525A适量，用甲醇配制成 1.0mg/mL SKF 525A对照品储 备液，置冰箱中冷冻保存，有效期为 12个月； SF/T 0115 —2021 2 l) 内标物SKF525A对照品工作 液：将符合5.1 k) 的内标物 SKF525A对照品储备 液用甲醇稀释得 1µg/mL SKF 525A内标工作液，置冰箱中冷藏保存，有效期为 3个月。 仪器和材料 仪器和材料包括： a) 液相色谱 -串联质谱仪：配电喷雾离子源（ ESI）； b) 电子天平：分度值≤ 0.1mg； c) 涡旋混合器； d) 离心机：转速4000r/min ； e) 移液器； f) 恒温水浴锅； g) 微孔滤膜： 0.22m。 6 定性分析 样品前处理 6.1.1 案件样品 取血液1mL，加1µg/mL SKF 525A内标工作液 10L，加pH9.2 硼砂缓冲液 1mL后，用乙醚 3mL提取， 涡旋混合， 3000r/min离心3min， 将乙醚层转移至另一试管中， 按照同样 的方法提取两次， 合并乙醚液， 置60C水浴中挥干， 残留物用混合溶液 [乙腈:20mmol/L 乙酸铵溶液 （含 0.1%甲酸） （7:3，v/v）]100L 复溶，过0.22m微孔滤膜 ，供仪器分析。 6.1.2 空白样品 取空白血液 1mL，加1µg/mL SKF 525A内标工作液 10L，然后按照6.1.1的方法操作。 6.1.3 添加样品 若案件样品中出现可疑生物碱（参见附录 A），则取空白血液 1mL，添加案件样品中出现的可疑生 物碱对照品工作液，然后 按照6.1.1的方法操作。 仪器分析 6.2.1 液相色谱 -串联质谱参考条件 液相色谱-串联质谱 参考条件如下，应用时可根据不同品牌仪器的实际情况进行调整。 a) 色谱柱：Capcell PakC18 MG Ⅱ 液相色谱柱（ 250mm2.0mm5m）或其它等效柱，前接保护柱 ； 注： Capcell PakC18 MGⅡ液相色谱柱为 Shiseido 公司产品的商品名称， 给出这一信息是为了方便本文件的使用者， 并不是表示对该产品的认可。如果其它等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品； b) 柱温：室温； c) 流动相：乙腈:20mmol/L 乙酸铵溶液（含 0.1%甲酸）（ 7:3，v/v）； d) 流速：200L/min ； e) 进样量：5L； f) 离子源：电喷雾电离 -正离子模式 (ESI+)； g) 检测方式：多反 应监测（ MRM）； h) 离子源电压（ IS）：5500V； i) 碰撞气(CAD)、气帘气 (CUR)、雾化气 (GS1)和辅助气2 (GS2)均为高纯氮气，使用前调节各 气流