ICS 07.140 CCS C06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0092—2021 血液中扑草净等 20种除草剂的液相色谱 - 串联质谱检验方法 Determination of 20 herbicides including prometryne in blood by liquid chromatography -tandem mass spectrometry 2021 - 11 - 17发布 2021 - 11 - 17实施 中华人民共和国司法部 发布 SF/T 0092 —2021 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 原理 ................................ ................................ ............... 1 5 试剂、仪器和材料 ................................ ................................ ... 1 6 定性分析 ................................ ................................ ........... 2 7 定量分析 ................................ ................................ ........... 4 8 分析结果评价 ................................ ................................ ....... 5 附录A（资料性） 血液中扑草净等 20种除草剂的 线性范围、线性方程、相关系数、检出限及定量限 ................................ ................................ ...................... 7 SF/T 0092 —2021 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 司法鉴定科学研究 院提出。 本文件由 司法部信息中心归口。 本文件起草单位： 司法鉴定科学研究 院。 本文件主要起草人： 严慧、骆如欣、向平、刘伟、沈保华、 施妍、卓先义、沈敏、吴何坚 。 SF/T 0092 —2021 1 血液中扑草净等 20种除草剂的液相色谱 -串联质谱检验方法 1 范围 本文件描述 了血液中扑草净等 20种除草剂 （苯草醚、乳氟禾草灵、特丁净、丁草敌、双酰草胺、精 吡氟禾草灵、敌稗、扑草净、异丙隆、特丁通、丙草胺、二甲戊灵、噻草酮、野麦畏、异丙甲草胺、敌 草隆、禾草灭、氟磺隆、氟胺磺隆 和乙草胺）的液相色谱 -串联质谱检验方法 ，包括原理、试剂、仪器 和材料、 定性分析、定量分析 以及分析结果评价。 本文件适用于血液中扑草净等 20种除草剂的定性定量分析，其它检材中扑草净等 20种除草剂的定 性定量分析参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 血液中的 扑草净等 20种除草剂 用有机溶剂提取后，用液相色谱 -串联质谱法 (LC-MS/MS)进行检测， 经与平行操作的空白样品和添加 样品比较，以保留时间 、特征离子 对和离子对丰度比进行 定性分析；以 定量离子 对峰面积为依据， 采用内标法进行 定量分析。 5 试剂、仪器和材料 试剂 试验用水 应符合GB/T 6682 规定的一级水，所用试剂 和要求如下 ： a) 乙腈：HPLC级； b) 乙醚：分析纯 ； c) 甲酸：优级纯 ； d) 甲醇：HPLC级； e) 标准物质溶液： 1) 标准物质储备溶 液：苯草醚、乳氟禾草灵、特丁净、丁草敌、双酰草胺、精吡氟禾草灵、 敌稗、扑草净、异丙隆、特丁通、丙草胺、二甲戊灵、噻草酮、野麦畏、异丙甲草胺、敌 草隆、禾草灭、氟磺隆、氟胺磺隆 和乙草胺标准物质 溶液，质量浓度均为 100μg/mL；置 于冰箱中冷冻保存，有效期为 12个月； 2) 标准物质工作溶液：试验中所用其他浓度的标准物质工作溶液均由 符合5.1 e) 1)的标准 物质储备溶液 用甲醇稀释而得。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期为 3个月。 f) 内标SKF525A标准溶液： SF/T 0092 —2021 2 1) 1.0mg/mL SKF 525A标准储备溶液：精密称取 SKF525A10mg于10mL容量瓶中，加入适量甲醇溶 解并定容至刻度，配制成 1.0mg/mL SKF 525A标准储备溶液。密封，置于冰箱中冷冻保存， 有效期为 12个月； 2) 5μg/mL SKF 525A标准工作溶液：移取 1.0mg/mLSKF 525A标准储备溶液适量至容量瓶中，加入 甲醇稀释，混匀，配制成 5μg/mL的SKF525A标准工作溶液。密封，置于冰箱中冷藏保存， 有效期为 3个月。 仪器和材料 仪器和材料 包括： a) 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源 ； b) 旋涡混合器； c) 离心机； d) 电子天平： 分度值≤ 0.1mg； e) 恒温水浴锅； f) 10mL具塞离心管； g) 移液器。 6 定性分析 样品前处理 6.1.1 案件样品 取血液0.5mL置于10mL具塞离心管中 ，加入5μg/mL SKF 525A标准工作溶液 10μL，用乙醚3mL涡旋混合 提 取，在2500r/min 下离心3min， 将有机层转移至另一离心管中， 于 60°C水浴中挥发至近干， 残留物用 200μL 甲醇复溶，供仪器分析 。 6.1.2 空白样品 取空白血液 0.5mL置于10mL具塞离心管中 ，加入5μg/mL SKF 525A标准工作溶液 10μL，然后按照 6.1.1的 方法操作 。 6.1.3 添加样品 若案件样品中出现附录 A中可疑除草剂，取空白血液 0.5mL，添加案件样品中出现的可疑除草剂对照 品，然后 按照6.1.1的方法操作 。 仪器检测 6.2.1 液相色谱 -串联质谱参考 条件 液相色谱 -串联质谱 参考条件如下，应用时可根据不同品牌仪器的实际情况进行调整。 a) 色谱柱： Waters Acquity UPLC BEH C18 液相色谱柱 （2.1mm100mm1.7m）或其它等效柱； 注： Waters Acquity UPLC BEH C18 液相色谱柱为 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本文件的 使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其它等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相： A相为0.1%甲酸溶液， B相为乙腈；流动相梯度洗脱程序见表 1； c) 流速为0.3mL/min ； d) 进样量为 5L； e) 离子源：电喷雾电离 -正离子模式 （ESI+）； f) 检测方式：多反应监测（ MRM）； g) 离子源电压（ IS）：5500V； h) 碰撞气(CAD)、气帘气 (CUR)、雾化气 (GS1)和辅助气(GS2)均为高纯氮气，使用前调节各气流流 量以使质谱灵敏度达到检测要求； SF/T 0092 —2021 3 i) 去簇电压 (DP)和碰撞能量 (CE)等电压值应优化至最佳灵敏度 ； j) 20种除草剂和内标的定性离子对、定量离子对和保留时间见 表2。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间 min 流动相A % 流动相B % 0 80 20 4 50 50 6 30 70 10 5 95 11 5 95 11.1 80 20 15 80 20 表2 20种除草剂 和内标的LC-MS/MS参数 中文名 英文名 保留时间 min 母离子 m/z 子离子 m/z 碰撞能量 eV 去簇电压