ICS11.220 CCSB41 中华人民共和国国家标准 GB/T47207—2026 小鹅瘟诊断技术 Diagnostictechniquesforgoslingplague 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 生物安全措施 2 …………………………………………………………………………………………… 6 临床诊断 2 ………………………………………………………………………………………………… 7 样品采集与处理 2 ………………………………………………………………………………………… 8 病毒分离与鉴定 3 ………………………………………………………………………………………… 9 PCR方法 4 ………………………………………………………………………………………………… 10 琼脂扩散试验 6 …………………………………………………………………………………………… 11 夹心生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附试验(夹心ELISA) 7 ………………………………………… 12 冰冻切片免疫荧光方法 8 ………………………………………………………………………………… 13 鹅胚中和试验(抗体检测) 9 ……………………………………………………………………………… 14 免疫荧光试验(抗体检测) 10 …………………………………………………………………………… 15 综合判定 11 ……………………………………………………………………………………………… 附录A(规范性) 样本采集与处理、核酸检测相关溶液的配制 12 ……………………………………… 附录B(资料性) 小鹅瘟阳性抗原、小鹅瘟阳性血清和阴性血清的制备 13 …………………………… 附录C(资料性) 核酸检测用引物、PCR扩增结果参照图 14 …………………………………………… 附录D(规范性) 琼脂扩散检测溶液的配制、琼脂板制备和打孔 15 …………………………………… 附录E(资料性) 小鹅瘟单克隆抗体的制备、纯化和生物素标记抗体的制备 16 ……………………… 附录F(规范性) ELISA检测相关溶液的配制 17 ………………………………………………………… 附录G(资料性) 抗鹅IgG单克隆抗体的制备、纯化和小鹅瘟病毒抗体检测板的制备 18 …………… ⅠGB/T47207—2026前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本文件起草单位:扬州大学、南通市通州区畜牧兽医站。 本文件主要起草人:钱琨、邵红霞、张蓉花、秦爱建、叶建强、徐琪、万志敏、许默儒。 ⅢGB/T47207—2026引 言 小鹅瘟又称鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)病,或称德兹西氏病(Derzsy’sdisease),是雏鹅 的一种急性败血性传染病,我国将其列为二类动物疫病。病原为GPV,根据病毒分类地位,属于细小病 毒亚科(Parvovirinae)、禽细小病毒属(Aveparvovirus)的成员。病毒主要侵害1月龄以内雏鹅和雏番 鸭,多表现最急性和急性感染,会迅速致死。1月龄以上的小鹅发病减少,并呈慢性过程。本病一旦发 生和流行,常引起大批雏鹅死亡,造成重大经济损失。 应用中和试验、琼脂扩散试验等方法已证明各国分离的毒株具有相同的抗原关系,即目前仅有一种 血清型。GPV与番鸭细小病毒存在抗原相关性,而与哺乳动物和其他禽类的细小病毒没有抗原相关 性。本病病毒分离常用鹅胚或番鸭胚。鹅胚或番鸭胚原代细胞感染病毒后,用特异的GPV多抗血清 或单克隆抗体进行免疫荧光染色,能确定感染细胞内病毒的存在。聚合酶链式反应(PCR)、酶联免疫吸 附试验(夹心ELISA)、冰冻切片和抗体检测免疫荧光试验等能快速检测病鹅组织样本中的GPV。 ⅣGB/T47207—2026小鹅瘟诊断技术 1 范围 本文件描述了小鹅瘟的临床诊断、样品的采集与处理,以及病毒分离与鉴定、PCR、琼脂扩散试验、 夹心生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附试验、中和试验、免疫荧光试验等方法。 本文件适用于小鹅瘟的诊断、检疫、监测和流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA:脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleicacid) dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(Deoxy-ribonucleosidetriphosphate) ELD50:半数胚体致死量(Medianembryonlethaldose) ELISA:酶联免疫吸附试验(Enzymelinkedimmunosorbentassay) FITC:异硫氰酸荧光素(FluoresceinIsothiocyanate) IgG:免疫球蛋白G(ImmunoglobulinG) GEF:鹅胚成纤维细胞(Gooseembryofibroblast) GPV:鹅细小病毒(Gooseparvovirus) MOI:感染复数(Multiplicityofinfection) OD:光密度(Opticaldensity) PB:磷酸缓冲溶液(Phosphatebuffer) PBS:磷酸缓冲盐溶液(Phosphatebuffersaline) PBST:磷酸盐吐温缓冲液(PhosphatebufferedsalinewithTween) PCR:聚合酶链式反应(Polymerasechainreaction) SDS:十二烷基磺酸钠(Sodiumdodecylsulfate) TAE:三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸缓冲液(Tris-aceticacid-EDTAbuffer) TMB:3,3'5,5'-四甲基联苯胺(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine) 1GB/T47207—20265 生物安全措施 进行小鹅瘟诊断、检测时,如动物剖检、样品采集与处理、核酸提取等,按照NY/T541的规定执行。 6 临床诊断 6.1 流行病学 6.1.1 小鹅瘟病毒主要感染1月龄以内的雏鹅和雏番鸭,1周龄以内的雏鹅发病率和病死率可达90%~ 100%。随着日龄增大,发病率逐渐降低。 6.1.2 小鹅瘟主要通过接触病鹅的排泄物传播,传染源为患病鹅和番鸭,或健康带毒鹅和番鸭。1月龄 以内的雏鹅和雏番鸭易感,成年鹅或番鸭感染病毒通常不会出现典型临床症状,呈隐性感染,发病(流 行)无明显的地区性和季节性。 6.2 临床症状 6.2.1 发病雏鹅精神沉郁、昏睡,缩头垂翅,食欲减退。 6.2.2 病鹅排稀粪,粪便中含有气泡或纤维碎片,甚至有血黏液,肛门附近有稀粪黏附。 6.2.3 常伴随着呼吸困难症状,脚发绀。 6.2.4 少数病鹅有神经症状,并出现抽搐倒地死亡现象。 6.2.5 急性期耐过的雏鹅,表现生长停滞,羽毛脱落,尤其背部、颈部和两翅处羽毛。 6.3 剖检病变 6.3.1 剖检肉眼可见小肠的中后段肠管肿胀变粗,肠壁紧张,肠道黏膜脱落与内容物形成同心圆栓塞 (肠栓),易剥离,肠壁光滑且变薄,部分肠道卡他性出血。 6.3.2 肝脏肿大淤血呈古铜色,胆囊稍有肿大,充满蓝绿色胆汁。 6.3.3 肾脏肿胀,输尿管可见尿酸盐沉积。 6.3.4 个别病死鹅胰腺有出血点。 6.3.5 有神经症状的病死鹅脑膜充血或有出血点。 6.4 临床判定 符合6.1的流行特点,出现6.2临床症状和6.3剖检病变特征部分或全部的病例,判定为疑似小鹅 瘟,确诊需进行实验室诊断。 7 样品采集与处理 7.1 试剂材料 7.1.1 PBS,按照附录A中A.1配制。 7.1.2 生理盐水,按照A.2配制。 7.2 样品采集 7.2.1 组织样品 无菌采集患病鹅或死亡鹅的肝脏、脾脏、肾脏、肠道等组织器官各约5g,置于无菌采样袋或其他灭 2GB/T47207—2026