ICS07.080 CCSA40 中华人民共和国国家标准 GB/T47142—2026 多糖分子量的测定 分子排阻色谱-多角度激光光散射法 Determinationofmolecularweightofpolysaccharides—Sizeexclusion chromatographywithmulti-anglerlaserlightscatteringmethod 2026-01-28发布 2026-05-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口。 本文件起草单位:河北省食品检验研究院、清华大学、河南大学、中国测试技术研究院、南京师范大学、 华中农业大学、河北医科大学、中国中医科学院中药研究所、南京财经大学、北京联合大学、中国测试技术 研究院生物研究所、中国计量测试学会。 本文件主要起草人:张岩、曹梅荣、李强、王怡、康文艺、周李华、吕广萍、陈国勋、史国华、马俊美、 吕品、文迪、汤晓智、马俊展、尹青岗、向丽、王锋、闫文杰、杨崇瑞、刘和春、杨扬仲夫。 ⅠGB/T47142—2026多糖分子量的测定 分子排阻色谱-多角度激光光散射法 1 范围 本文件描述了采用分子排阻色谱-多角度激光光散射法测定果胶、葡聚糖和菊粉的分子量的方法和 试验条件。 本文件适用于纯度≥95%,分子量测定范围为1kDa~1000kDa的果胶、葡聚糖和菊粉的分子量 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 多糖 polysaccharide 由10个以上单糖分子通过糖苷键线性或支链聚合形成的天然高分子聚合物。 4 原理 样品配制成溶液后,采用分子排阻色谱分离不同分子量的多糖分子,依次进入多角度激光光散射检 测器与示差折光检测器。多角度激光光散射检测器通过检测光散射信号直接测定各组分的绝对分子 量,示差折光检测器提供相应组分的浓度,仪器配套软件结合两者结果计算得到重均分子量。 5 试剂、材料与仪器设备 5.1 试剂、材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 5.1.1 右旋糖酐对照品:分子量为30kDa~40kDa。 5.1.2 0.2mol/L的氯化钠溶液:称取11.69g氯化钠,用超纯水溶解并定容至1L。 5.1.3 抑菌剂:ProClin300。 5.1.4 微孔滤膜:孔径为0.45μm。 5.1.5 微孔滤膜:孔径为0.22μm。 1GB/T47142—20265.1.6 抽滤过滤器滤膜:孔径为0.22μm。 5.1.7 容量瓶:25mL。 5.1.8 平头进样针:50mm。 5.2 仪器设备 5.2.1 电子天平:分度值为0.1mg。 5.2.2 高效液相色谱仪:配备多角度激光光散射检测器和示差检测器,以及相关数据采集和处理软件。 5.2.3 凝胶色谱柱:耐水相流动相,适用于分子排阻分离。 6 实验步骤 6.1 样品溶液制备 准确称取样品12.5mg~250mg(精确至0.1mg),置于25mL离心管中,加入流动相15mL,振摇 至溶解,将离心管静置过夜,确保样品充分溶解。将样品溶液转移至25mL容量瓶中,用流动相多次润 洗离心管内壁,合并洗液,流动相定容至刻度,混匀。溶液经微孔滤膜过滤后,待测。可视样品溶解情况 调整溶液浓度。 注:不同分子量的多糖样品配制浓度不同。建议:当多糖分子量≤5kDa时,多糖的样液浓度在5mg/mL~ 10mg/mL;当5kDa<多糖分子量≤100kDa时,多糖的样液浓度在1mg/mL~5mg/mL;当100kDa<多糖 分子量≤1000kDa时,多糖的样液浓度在0.5mg/mL~1mg/mL。 6.2 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下: a) 色谱柱:亲水性的羟基化聚合物凝胶色谱柱(300mm×7.8mm,10μm),或者适用于多糖分子 量范围的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物凝胶色谱柱; b) 流动相:0.2mol/L的氯化钠,流动相中可加入一定比例的抑菌剂,如0.05%的ProClin300,以 防止流动相中微生物生长; c) 流速:0.5mL/min; d) 柱温和示差检测器的温度:40℃; e) 进样量:100μL。 注1:对于分子量分布未知的多糖可选择多根不同孔径的色谱柱联用,通过多孔径阶梯分子的筛分提升分离效 果,流速和进样量可根据仪器状态优化调整。 注2:用适当溶剂将系统过渡至流动相系统,并彻底冲洗,使示差检测器不出现明显漂移,激光检测器噪音均不大于 0.1mV,彻底平衡色谱柱后再运行序列。 注3:示差检测器的折光指数增量(dn/dc)的测定见附录A。 6.3 归一化处理 取右旋糖酐对照品20.0mg置于10mL容量瓶中,以流动相溶解并定容,配制得到2mg/mL的右 旋糖酐溶液,注入液相色谱仪进行归一化处理,将此归一化数据保存为分析模板,用于后续样品的分子 量与分子量分布测定。 6.4 样品测试 按照5.2设定液相色谱条件对5.1样品制备液进行测定,仪器数据处理软件采集并处理实验数据。 2GB/T47142—20267 结果计算 通过仪器配套的数据处理软件进行数据分析,并依据公式(1)计算相关参数。可直接从软件中读取 样品的重均分子量(Mw)。 Mw=∑n i=1wiMi ∑n i=1wi……………………(1) 式中: Mw———样品的重均分子量,单位为克每摩尔(g/mol); Mi———样品中第i个组分的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol); wi———样品中第i个组分的分子质量,单位为克(g)。 8 精密度 在重复性条件下获得两次独立测定结果Mw的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 3GB/T47142—2026附 录 A (资料性) 折光指数增量(dn/dc)的测定 折光指数增量(dn/dc)的测定步骤如下: a) 精密称取50.0mg烘干至恒重的待测样品置于25mL容量瓶中,加入15mL流动相,使样品 充分溶胀,静置过夜后,以流动相溶解并定容,配制得到2mg/mL的多糖储备溶液; b) 分别精确量取储备溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL,并依次加入5mL、4mL、 3mL、2mL、1mL、0mL流动相进行混合,配制成6个不同质量浓度的样品溶液; c) 将上述6个质量浓度的溶液由低至高的顺序依次用平头进样针注入示差检测器的样品池进行 测定,并采集相应数据; d) 通过仪器软件处理数据可直接计算出样品的dn/dc值。 4GB/T47142—2026