ICS65.020.20 CCSB16 中华人民共和国国家标准 GB/T33128—2026 代替GB/T33128—2016 螺旋粉虱检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofAleurodicusdispersusRussell 2026-01-28发布 2026-08-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T33128—2016《螺旋粉虱检疫鉴定方法》,与GB/T33128—2016相比,除结构调 整和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———增加了DNA条形码序列比对的方法(见第5章); ———增加了仪器、用具和试剂(见第6章); ———增加了饲养及玻片标本制作方法(见8.1、8.2)、粉虱科形态特征(见8.3.1),增加了螺旋粉虱不 同虫态体色、蜡粉等形态特征描述(见8.3.3); ———增加了DNA条形码检测鉴定内容(见8.4、9.2)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本文件起草单位:海口海关动植物检疫中心、中国热带农业科学院环境与植物保护研究所、拱北海 关技术中心。 本文件主要起草人:蔡波、孟瑞、敖苏、许光龄、刘福秀、贾静、王琳、王之欣、韩玉春、韩冬银、林伟。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2016年首次发布为GB/T33128—2016; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T33128—2026螺旋粉虱检疫鉴定方法 1 范围 本文件描述了螺旋粉虱(AleurodicusdispersusRussell)的检疫鉴定方法。 本文件适用于螺旋粉虱的检疫鉴定。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 复合孔 compoundpores 蛹壳背盘表面大小不一致的一对小孔。 3.2 管状孔 vasiformorifice 蛹壳尾部背面的生殖排泄器官。 注:该孔形状、大小及与蛹壳底端的距离变化很大,形状有近圆形、椭圆形、心形或亚心形等。 3.3 盖瓣 operculum 位于管状孔顶端覆盖管状孔且形态与管状孔相似的结构。 注:又称盖片。 3.4 舌状突 lingula 位于盖瓣与管状孔内壁之间舌形或者圆形的结构。 4 基本信息 中文名:螺旋粉虱。 学名:AleurodicusdispersusRussell,1965。 异名:无。 英文名:spirallingwhitefly。 分类地位:半翅目Hemiptera,胸喙亚目Sternorrhyncha,粉虱科Aleyrodidae,复孔粉虱亚科Aleu- rodicinae,盘粉虱属Aleurodicus。 盘粉虱属全世界已知37种,与螺旋粉虱近似的重要物种有海葡萄盘粉虱Aleurodicus coccolobae,双孔盘粉虱Aleurodicusmaritimus,椰粉虱Aleurodicuspulvinatus,皱纹螺旋粉虱Aleu- rodicusrugioperculatus。螺旋粉虱其他信息见附录A。 1GB/T33128—20265 方法原理 根据螺旋粉虱的为害状,肉眼观察寄主叶片背面、果实、茎部、花等位置,取得卵、若虫、伪蛹、成虫。 伪蛹制作成玻片标本,置于显微镜下观察。根据伪蛹形态特征对种类进行判定,其分布、寄主、生物学特 性、为害状、若虫和成虫的形态特征等作为参考。也可根据DNA条形码检测结果所得序列与螺旋粉虱 已知序列比对后,进行判定。 6 仪器、用具和试剂 6.1 仪器 显微镜、人工气候箱、PCR仪、冰箱、离心机、凝胶成像分析仪、电泳仪等。 6.2 用具 镊子、细毛刷、样品袋、昆虫针、指形管、标签纸、硫酸纸、烧杯、培养皿、凹皿、载玻片、盖玻片、离心 管等。 6.3 试剂 除另有规定外,所用试剂均为分析纯。5%氢氧化钠(NaOH)溶液、冰乙酸、5%酸性品红溶液、石 蜡、中性阿拉伯树脂、乙醇溶液(70%、80%、90%、95%、100%)、基因组DNA提取试剂盒、PCR预混液、 引物对LCO1490/HCO2198、双蒸水、琼脂糖、核酸染料、1×TAE缓冲液等。 7 现场查验 仔细观察有关寄主植物叶片背面是否有雌成虫产卵时所形成的螺旋状蜡泌物(见图A.1),是否有 若虫或成虫。将发现的各种虫态个体用镊子或细毛刷收集装入指形管保存,或将虫体连同寄主叶片装 入样品袋中,加贴标签或编号,记录时间、地点、寄主、采集人等,带回实验室进行培养观察。 8 实验室鉴定 8.1 饲养 将采集到的卵、若虫、伪蛹或成虫等连同被为害的寄主叶片等样品一并放入人工气候箱或其他合适 仪器中,在温度26℃~31℃、相对湿度65%~85%条件下饲养。 8.2 玻片标本制作 蛹壳玻片标本制作主要包括挑取蛹壳、碱液处理、透明液处理、染色、酒精梯度脱水、封片等,具体方 法见附录B。 8.3 形态鉴定 8.3.1 粉虱科形态特征 体型小,最大不超过3mm,成虫身体及翅上常有白色蜡粉。喙3节,单眼2个。翅2对,翅脉简 单,前翅径脉(Radius,R)、中脉(Media,M)和第1肘脉(Cu1)基部愈合,常先分离出肘脉,而后径脉,中 2GB/T33128—2026脉分离。腹部第1节常柄状,第8节背板狭,膜质。腹部第9节背面有管状孔,中间是第10节的背 板,为盖瓣及一管状的肛下板,称为舌状突。 8.3.2 盘粉虱属形态特征 蛹壳中等大小,椭圆形,体背有5对~7对能产蜡丝的复合孔,其中胸部有1对或不存在,4对~ 6对在腹部,管状孔心形或亚心形,盖瓣三角形,舌状突露出,较长,延伸出管状孔后缘,端部具2对刚 毛,其中1对退化。 8.3.3 螺旋粉虱形态特征 8.3.3.1 卵 长椭圆形,大小约为0.30mm×0.11mm,表面光滑,一端有一柄状物[见附录C中的图C.1a)]。 8.3.3.2 若虫 1龄若虫虫体大小约为0.33mm×0.15mm,触角2节,足3节;初孵若虫虫体透明,扁平状,随虫体 发育逐渐变为半透明至淡黄色或黄色,背面隆起、体背分泌少量絮状蜡粉。复眼红色,足发达[(见 图C.1b)]。 2龄若虫虫体大小约为0.48mm×0.2mm,足、触角退化,分节不明显;初脱皮时虫体透明,扁平 状,无蜡粉;随虫体发育逐渐变为半透明至淡黄色或黄色,背面隆起,体背、体侧分泌有少量絮状或丝状 蜡粉;2龄后期虫体钝厚,椭圆形,体上蜡粉减少[见图C.1c)]。 3龄若虫虫体大小约为0.67mm×0.42mm,足、触角进一步退化,分节不明显;发育中期,体背有少 量絮状蜡粉,体周缘长有放射状细蜡丝,长约为虫体的一半[见图C.1d)]。 8.3.3.3 伪蛹 大小约为1.02mm×0.69mm,足、触角和复眼完全退化,随着虫子发育体上蜡粉逐渐增多、蜡丝加 长,体背有很多形态各异的蜡孔,分泌絮状蜡粉;虫体胸部和腹部复合孔,分泌丝状蜡粉,丝状蜡丝最长 可达虫体10倍以上。舌状突两侧的蜡孔分泌粗厚的毛刷状蜡丝。蛹壳黄绿色,椭圆形,表面光滑中央 区稍隆起。体缘不规则。亚缘区与背盘区不分离,沿亚缘区有一圈排列整齐的小孔。在头部和腹部第 Ⅲ~Ⅵ节两侧共5对复合孔,复合孔直径在28.5μm~32.4μm,复合孔中央有一个锥状突起。腹部各 节分节明显,第Ⅲ腹节最长,第Ⅶ腹节最短,只有第Ⅵ腹节的一半。管状孔亚心形,宽大于长,长约 100μm,宽约108μm。盖瓣方形,覆盖孔的一半区域。舌状突大,呈舌状,显著外露,长约71.4μm,顶 端钝圆,有4根刚毛。尾沟不明显[见图C.1e)、f),图C.2a)~c)]。 8.3.3.4 成虫 翅展约为3.50mm~4.65mm。雌雄个体均具有两种形态,即前翅有翅斑型和前翅无翅斑型。前 翅有翅斑的个体明显较前翅无翅斑的大,雌性体长约为1.55mm~1.75mm;雄性体长约为1.65mm~ 2.46mm。初羽化的成虫浅黄色、近透明,随成虫的发育不断分泌蜡粉。在前翅末端有一具金属光泽的 斑,但亦有部分个体前翅无斑。成虫腹部两侧具有蜡粉分泌器,初羽化时不分泌蜡粉,随成虫日龄的增 加蜡粉分泌量增多。雄性形态与雌性相似,但腹部末端有一对铗状交尾握器[见图C.1g)、h), 图C.2d)~i)]。 8.3.3.5 与近似种的区别 螺旋粉虱及其近似种伪蛹鉴定检索表见附录D。 3GB/T33128—20268.4 DNA条形码检测鉴定 DNA条形码鉴定方法见附录E。 9 结果判定 9.1 形态学方法 以伪蛹的形态特征为主要依据,卵、若虫、成虫的形态特征为辅,符合8.3.3描述的可判定为螺旋 粉虱。 9.2 DNA条形码方法 DNA条形码检测结果所得序列与螺旋粉虱已知序列(见E.5)比对并构建邻接法系统发育树,相似 度≥98%或系统发育树聚类为一支的,可判定为螺旋粉虱。 10 标本保存 用于分子检测的螺旋粉虱各虫态虫体均浸泡在无水乙醇中保存,将浸泡标本置于-20℃冰箱中保 存,保存期至少6个月。伪蛹可制作成玻片标本置于阴暗干燥处长期保存。标本加注明时间、地点、寄 主、采集人、属种名等信息的标签。 4GB/T33128—2026