ICS11.220 CCSB41 中华人民共和国国家标准 GB/T27982—2026 代替GB/T27982—2011 小反刍兽疫诊断技术 Diagnostictechniquesforpestedespetitsruminants 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 生物安全措施 2 …………………………………………………………………………………………… 6 临床诊断 2 ………………………………………………………………………………………………… 7 样品采集、保存与运输 2 …………………………………………………………………………………… 8 病毒分离鉴定 3 …………………………………………………………………………………………… 9 RT-PCR方法 4 …………………………………………………………………………………………… 10 荧光RT-PCR方法 5 …………………………………………………………………………………… 11 阻断ELISA方法 7 ……………………………………………………………………………………… 12 竞争ELISA方法 8 ……………………………………………………………………………………… 13 抗体胶体金检测方法 8 …………………………………………………………………………………… 14 综合判定 9 ………………………………………………………………………………………………… 附录A(规范性) 病毒分离鉴定溶液的配制 10 …………………………………………………………… 附录B(资料性) 细胞病变效应示意图 11 ………………………………………………………………… 附录C(规范性) 反转录-聚合酶链反应溶液的配制 12 ………………………………………………… 附录D(资料性) 核酸检测用引物、探针序列信息 13 …………………………………………………… 附录E(资料性) 小反刍兽疫病毒N蛋白的制备 15 …………………………………………………… 附录F(资料性) 酶标抗体的制备 16 ……………………………………………………………………… ⅠGB/T27982—2026前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T27982—2011《小反刍兽疫诊断技术》,与GB/T27982—2011相比,除结构调整 和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———增加了流行病学(见6.1); ———增加了鉴别型荧光RT-PCR检测方法(见第10章); ———增加了阻断ELISA检测方法(见第11章); ———增加了抗体胶体金检测方法(见第13章); ———更改了综合判定(见第14章,2011年版的第7章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本文件起草单位:中国动物卫生与流行病学中心、北京亿森宝生物科技有限公司。 本文件主要起草人:包静月、王志亮、徐蛟、王淑娟、邹艳丽、王清华、李林、赵永刚、吴晓东、刘爽、 于家荣、任炜杰、王新杰、孙晓明、王琴、赵云玲、刘雨田、王英丽、王筱真、王晓华。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2011年首次发布为GB/T27982—2011; ———本次为第一次修订。 ⅢGB/T27982—2026引 言 小反刍兽疫(Pestedespetitsruminants,PPR),俗称羊瘟、伪牛瘟,是由小反刍兽疫病毒(Pestedes petitsruminantsvirus,PPRV)引起的一种急性病毒性传染病,主要感染山羊、绵羊和野生反刍动物。 PPRV为副黏病毒科(Paramyxoviridea)麻疹病毒属(Morbillivirus)的成员,只有1个血清型。我国将 其列为一类动物疫病,世界动物卫生组织(WorldOrganisationforAnimalHealth,WOAH)将其列为 需通报的疫病。 本文件参考了WOAH《陆生动物诊断试验与疫苗手册》的有关内容,技术方法与其推荐的方法基 本一致,并在此基础上结合实验室的研究成果进行了更新和补充。结合临床诊断和实验室诊断对小反 刍兽疫进行确诊。 ⅣGB/T27982—2026小反刍兽疫诊断技术 1 范围 本文件规定了小反刍兽疫的临床诊断、样品采集、保存与运输、病毒分离鉴定、RT-PCR方法、荧光 RT-PCR方法、阻断ELISA方法、竞争ELISA方法和抗体胶体金检测方法的技术要求。 本文件适用于山羊、绵羊和野生反刍动物及其他易感动物的小反刍兽疫的诊断、监测、流行病学调 查和检疫。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文件中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用 文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用 于本文件。 GB19489 实验室 生物安全通用要求 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CPE:细胞病变效应(Cytopathiceffect) Ct:循环阈值(Cyclethreshold) DEPC:焦碳酸二乙酯(Diethylpyrocarbonate) EDTA:乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraaceticacid) ELISA:酶联免疫吸附试验(Enzymelinkedimmunosorbentassay) FAM:6-羧基荧光素(6-Carboxy-fluorescein) HRP:辣根过氧化物酶(Horseradishperoxidase) MEM:最低限度必需营养液(Minimumessentialmedium) OD:光密度(Opticaldensity) PBS:磷酸盐缓冲液(Phosphatebufferedsaline) PPR:小反刍兽疫(PesteDesPetitsRuminants) RNA:核糖核酸(Ribonucleicacid) RT-PCR:反转录-聚合酶链式反应(Reversetranscription-polymerasechainreaction) SLAM:信号淋巴细胞激活分子(Signalinglymphocyticactivationmolecule) TAE:三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸缓冲液(Tris-Aceticacid-EDTAbuffer) TAMRA:四甲基罗丹明(Tetramethylrhodamine) 1GB/T27982—2026VIC:2'-氯-7'-1,4-二氯-6-羧基-荧光素(Violetinvader) 5 生物安全措施 进行疑似小反刍兽疫诊断如样品处理、病毒分离、核酸提取及扩增、血清检测等实验室活动时,应按 照GB19489执行。病毒分离培养在生物安全三级(BSL-3)实验室进行。 6 临床诊断 6.1 流行病学 6.1.1 反刍动物普遍易感,无明显季节性和日龄区别,其中山羊和绵羊为典型宿主,通常山羊比绵羊更 易感。野生动物中,牛科动物最易感。骆驼科、猪科等多种动物是其非典型宿主。 6.1.2 传染源主要为发病和病死的山羊、绵羊、野生反刍动物。 6.1.3 感染途径以呼吸道为主,通过打喷嚏和咳嗽产生的气溶胶短距离传播;也可通过直接接触感染 动物或其分泌物、排泄物,或通过接触被病毒污染的垫料、饲草等传播。 6.1.4 发病率高,死亡率突然增加,发病率和死亡率可高达90%以上;有的无明显症状而急性死亡。 6.2 临床症状 6.2.1 突然发热,第2天~第3天体温高达40℃~42℃。发热持续3d左右,特急性病例在发热开始 的4d~6d内死亡。亚临床型病例症状较轻,在发病10d~14d后可康复。 6.2.2 发热2d~3d后开始腹泻,伴随严重脱水、消瘦、虚脱。怀孕母羊可发生流产。 6.2.3 眼、鼻排出大量分泌物,最初呈水样,随着病程进展分泌物日益增多,变成脓性然后结干,发出恶 臭。通常出现打喷嚏和咳嗽、呼吸急促、呼吸困难等症状。 6.2.4 口腔黏膜充血,口腔上皮和鼻腔黏膜出现大量坏死点、溃疡等,坏死组织脱落后形成界线分明的 浅糜烂斑。口唇、齿龈、牙板、舌体以及母羊阴门的阴唇表面出现上皮破损,口腔大量流涎。 6.3 剖检病变 6.3.1 上呼吸道黏膜可见严重充血,伴有鼻腔和气管黏膜溃疡。 6.3.2 肺部出现支气管肺炎和肺尖肺炎。 6.3.3 消化道黏膜出现严重的充血和溃烂。肠道充血多见局限于十二指肠、回肠、盲肠和结肠上部,偶 见全部肠道出现弥散性充血;常见回盲肠瓣出血;大肠纵向折叠顶部偶尔