ICS _11. 100 YY C 44 中华人民共和国医药行业标准 YY/T0578—2005 沙门、志贺菌属琼脂培养基 Salmonella-Shigella agar medium 2005-12-07发布 2006-12-01实施 发布 国家食品药品监督管理局 数码防伪 YY/T0578—2005 前 言 本标准全部技术条款为强制性 本标准是在参考《中华人民共和国药典》（2005年版）基础上，结合中国国情及实际情况和要求而 制定。 本标准附录A为规范性附录。 本标准由国家食品药品监督管理局提出。 本标准由中国药品生物制品检定所归口。 本标准由中国药品生物制品检定所负责起草。 本标准主要起草人：曲守方、孙彬裕、刘艳、高尚先。 YY/T0578—2005 沙门、志贺菌属琼脂培养基 1范围 本标准规定了沙门、志贺菌属琼脂培养基的质量要求、检验方法、使用说明、标志、标签以及包装、运 输、贮存。 本标准适用于沙门和志贺菌属分离培养的沙门、志贺菌属琼脂培养基。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T191包装储运图示标志 中华人民共和国药典（2005年版） JJF1070一2000定量包装商品净含量计量检验规则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 培养基 culturemedium 由人工方法配合而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存使用的混合营养物制品。 3.2 质控菌株 qualitycontrol strain 质控菌株通常指用于培养基质量控制和性能测定的微生物。 3.3 菌落形成单位colonyformingunit，cfu 菌落形成单位是指在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁 殖所形成的集落，以其表达活菌的数量。 4培养基配方 单位为：g/L。 5.0 g 蛋白陈 硫代硫酸钠 8.5 g 5.0 g 牛肉浸出粉 中性红 0.025 g 乳糖 10.0 g 亮绿 0.000 33g 牛胆盐 8.5 g 琼脂 12.0 g~14.0g 8.5 g 枸橡酸钠 1. 0 g 枸橡酸铁铵 I YY/T0578—2005 5质量要求 5.1理化要求 5.1.1外观 应为均一的淡紫红色至淡紫色粉末。 5.1.2装量 应不低于标示量。 5.1.3pH值 灭菌后，20℃～25℃时，该培养基pH值应为7.2士0.1。 5.1.4干燥失重 应不超过6.0%。 5.2生长试验 该培养基接种质控菌株，生长情况应符合表1要求。 表1生长试验观察结果 质控菌种 观察结果 鼠伤寒沙门菌 生长良好，无色菌落，有黑心 福氏志贺菌 生长良好，无色菌落 粪肠球菌 抑制(完全） 大肠埃希菌 抑制（部分至完全），粉红至玫瑰红菌落 6检验方法 6.1理化检验 6.1.1外观 采用目测法，在自然光线明亮处目视，应符合5.1.1的规定。 6.1.2装量 按JJF1070—2000，测定装量，应符合5.1.2的规定。 6.1.3pH值 按使用说明配制培养基，取6mL新鲜配制的液体培养基，加新鲜蒸馏水至40mL，灭菌后，在 20℃～25℃时，按《中华人民共和国药典》（2005年版）pH值测定法测定，应符合5.1.3的规定。 6.1.4干燥失重 按《中华人民共和国药典》（2005年版）干燥失重测定法，在60℃时压力2.67kPa(20mmHg）以下 干燥至恒重，应符合5.1.4的规定。 6.2生长试验 按附录A试验方法进行，结果应符合5.2的规定。 7 使用说明 使用说明至少应当具有下列内容： a）产品名称、规格； b) 配方； c) 用途； 使用方法； e) 注意事项； f) 贮存条件与失效期； 2 YY/T0578—2005 生产单位名称、联系方式。 g) 8标志与标签 标志与标签至少应当具有下列内容： a) 执行标准号； b) 产品注册证号； c) 产品名称、规格、数量、批号； (P 制造厂名称、商标和厂址； e) 贮存条件和失效期。 9包装、运输、贮存 9.1 包装 包装储运图示标志应符合GB/T191的规定。包装容器应保证密封性良好，不易破碎。 9.2运输 培养基在运输过程中，应防潮，应防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪浸淋，防止与酸碱物质接触， 防止内外包装破损。 9.3贮存 产品应置阴凉干燥处贮存。 3 YY/T0578—2005 附录A （规范性附录） 沙门、志贺菌属琼脂培养基生长试验方法 A.1质控菌株 鼠伤寒沙门菌（Salmonellatyphimurium）[CMCC（B）50220] 福氏志贺菌（Shigellaflerneri）［CMCC（B）51573] 粪肠球菌（粪链球菌）（Enterococcusfaecalis）[CMCC（B)32225] 大肠埃希菌（Escherichiacoli)[CMCC(B）44113] 培养基生长试验可采用上述菌株或其他等同的标准菌株，所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌 种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学 特性。 不应同时操作2个以上菌株。 A.2方法 A.2.1无菌操作要求 培养基生长试验应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 稀释液、培养基、实验器具等灭菌时，应照《中华人民共和国药典》（2005年版）灭菌法的要求，采用 验证合格的灭菌程序灭菌。 A.2.2菌种复苏 启开鼠伤寒沙门菌、福氏志贺菌、粪链球菌、大肠埃希菌菌种，用0.9%无菌氯化钠溶液0.3mL制 成菌悬液，加至7mL营养肉汤培养基中，30℃～35℃培养24h。 A.2.3菌种传代 取1mL上述复苏后的鼠伤寒沙门菌、福氏志贺菌、粪链球菌、大肠埃希菌新鲜培养物，加至7mL 营养肉汤培养基中，30℃～35℃培养24h。 A.2.4菌种增菌培养 接种上述传代后的鼠伤寒沙门菌、福氏志贺菌、粪链球菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至营养肉汤或 营养琼脂培养基中，30℃～35℃培养18h~24h。 A.2.5菌悬液制备 将上述增菌培养后的鼠伤寒沙门菌、福氏志贺菌、粪链球菌、大肠埃希菌的新鲜培养物分别用0.9% 无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数约相当于100cfu1000cfu的菌悬液。 A.2.6培养基接种 用蒸馏水或去离子水按说明上的浓度配制待检沙门、志贺菌属琼脂培养基，煮沸至完全溶解，稍冷 后在每个平皿（直径为90mm)中加人约15mL～20mL，待冷却至室温凝固后进行检测。 检测时，每只平血加入0.1mL上述菌悬液。每种质控菌株接种2只平皿，并用1个未接种的培养 基平皿做空白对照，置30℃～35℃培养24h～36h，观察菌落生长情况，并记录结果。结果应符合5.2 的要求。 4 YY/T0578—2005 参考文 献 [1]GB9969.1—1998工业产品使用说明书 总则 [2丁陈天寿主编.微生物培养基的制造与应用.北京.中国农业出版社.1995年6月 ［3」USP/NF（ASIANEDITION)2004［美国药典（2004年版）促生长试验 [4]WS/T232—2002 商业性微生物培养基质量检验规程 质控菌种 [5］美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS).商品微生物培养基的质量保证（M22一A) 5