ICS 65.160 YC X 87, 备案号：23594-2008 中华人民共和国烟草行业标准 YC/T255—2008 卷烟 主流烟气中主要酚类化合物的 测定 高效液相色谱法 Cigarettes--Determination of major phenolic compounds in mainstream cigarette smoke-High performance liquid chromatographic method 2008-04-14实施 2008-04-14发布 国家烟草专卖局 发布 YC/T255—2008 前 言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会（TC144)归口。 本标准起草单位：中国烟草总公司郑州烟草研究院、中国烟草标准化研究中心、南京卷烟厂。 本标准主要起草人：谢复炜、王昇、甘学文、李栋、赵明月。 YC/T255—2008 卷烟 主流烟气中主要酚类化合物的 测定高效液相色谱法 1范围 本标准规定了卷烟主流烟气中主要酚类化合物的测定方法。 本标准适用于卷烟主流烟气中主要酚类化合物的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T5606.1卷烟第1部分：抽样 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，neqISO3696：1987) GB/T19609卷烟用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油（GB/T19609-2004，ISO4387： 2000,MOD) 3原理 用玻璃纤维滤片捕集卷烟主流烟气中主要酚类化合物，通过高效液相色谱测定萃取样品中酚类化 合物的浓度来对卷烟主流烟气中主要酚类化合物进行定量分析。 4试剂 4.1除特别要求以外，均应使用分析纯级试剂，水应为蒸馏水或同等纯度的水。 4.2去离子水，应符合GB/T6682的规定，R>5Ma(使用前经0.45μm滤膜过滤）。 4.3乙睛，色谱纯或分析纯经重蒸后使用)。 4.4乙酸。 4.5邻-苯二酚、间-苯二酚、对-苯二酚，苯酚，邻-甲酚、间-甲酚、对-甲酚，纯度应大于97%。 4.6萃取溶液：1%(体积分数)的乙酸水溶液。 4.7酚类化合物标准溶液 4.7.1标准储备液：在50mL烧杯中分别称量约100mg的邻-苯二酚、对-苯二酚，苯酚，邻-甲酚、间- 甲酚，约20mg左右的间-苯二酚至50mL烧杯中（精确至0.0001g）。加人约30mL萃取溶液（4.6)完 全溶解后，转移至100mL的棕色容量瓶中，用萃取溶液（4.6)定容至刻度。该标准储备液在4℃冰箱内 存放，有效期为3个月。 4.7.2一级标准溶液：准确移取10mL标准储备液（4.7.1）至100mL棕色容量瓶中，用萃取溶液 （4.6)定容至刻度。该一级标准溶液在4℃冰箱内存放，有效期为3个月。 (4.6)定容至刻度。该二级标准溶液应在使用前配制。 4.8酚类化合物校准溶液：分别准确移取1mL、2mL、5mL二级标准溶液（4.7.3)，1mL、2mL一级 标准溶液（4.7.2)至50mL棕色容量瓶中，用萃取溶液（4.6)定容至刻度。此五个标准溶液以及二级标 准溶液（4.7.3)为系列标准校准溶液。该酚类化合物校准溶液应在使用前配制。 1 YC/T255—2008 5仪器 5.1分析天平，精确至0.0001g。 5.2高效液相色谱仪，应具有柱温箱、梯度洗脱功能、荧光检测器。 推荐色谱柱：150mmX4.6mm；固定相：Cis（LUNA）；填料粒度：5μm。 5.3水相滤膜，0.45μm。 5.4超声波振荡器。 6抽样 按照GB/T5606.1规定抽取实验室样品。 7分析步骤 7.1卷烟的抽吸 按照GB/T19609的规定收集4支卷烟的总粒相物。 7.2测定次数 每个样品应平行测定两次。 7.3样品分析 7.3.1样品萃取 将捕集有主流烟气总粒相物的玻璃纤维滤片折叠放入200mL锥形瓶中，准确加人50mL萃取溶 液（4.6），室温下超声萃取20min，静置5min。取约2mL萃取液，用0.45μm水相滤膜（5.3)过滤。处 理好的样品萃取液应在3天内进行分析。 7.3.2高效液相色谱仪 按照仪器说明书操作高效液相色谱仪。以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性： 流动相A：1%乙酸水溶液； 流动相B：乙酸-乙腈-水（1十30+69）； 柱温：30℃； 柱流量：1mL/min； 进样体积：10μL； 梯度：0min：流动相A80%，流动相B20%；40min：流动相A0%，流动相B100%； 检测器：荧光检测器条件如表1所示。 表1荧光检测器条件 时间/min 激发波长/nm 发射波长/nm 0 284 332 275 315 5 8 277 319 12 272 20 273 323 40 284 332 分析时间约为40min。 校准溶液和典型卷烟样品色谱图参见附录A中图A.1和图A.2。 7.3.3测定 用高效液相色谱测定一系列酚类化合物校准溶液（4.8），得到7种酚类化合物的积分峰面积，用峰 2 YC/T255—2008 面积作为纵坐标，微克每毫升（μug/mL)计的酚类化合物浓度作为横坐标分别建立7种酚类化合物的校 正曲线。对校正数据进行线性回归，R²应不小于0.99。测定烟气苯取样品，由样品中酚类的峰面积计 算每一个卷烟烟气萃取样品中7种酚类化合物的浓度。 注：间-甲酚和对-甲酚采用目前的技术手段不能得到完全分离，在色谱图上是以一个色谱峰的形式出现，因此以上 两种化合物仅测定其总和，不单独进行测定。 8结果计算 主流卷烟烟气中7种酚类化合物的传输量按式（1)计算： ...(1) n 式中： y—一每支卷烟主流烟气中酚类化合物的传输量，单位为微克每支（μg/支）； c一萃取样品中酚类化合物的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V一萃取溶液体积，单位为毫升(mL)； n—每次测试抽吸卷烟的支数，单位为支。 以两次测定的平均值作为测定结果，结果精确至0.1μg/支。平行测定的相对偏差应小于10%。 精密度、回收率和检出限 6 本方法的精密度、回收率和检出限实验研究结果参见附录B。 10 检验报告 检验报告应包括以下内容。 依据本标准； 检验环境大气条件； 卷烟的名称、规格、类型、盒标焦油量、盒标烟气烟碱量； 一检验结果； 一卷烟总粒相物产生量； 一总粒相物中烟碱含量（或烟气烟碱量）； 一总粒相物中水分含量； 焦油量； 一抽吸口数。 3 YC/T255—2008 附录A （资料性附录） 色谱图示例 按照本标准所规定方法，对标准溶液和典型卷烟样品进行分析，所得到的液相色谱-质谱联用图如 图A.1和图A.2所示。 FLD1 A, Ex=284, Em=332, TT(F:IFLAVORI061102\61. D) E n 160 140 120 100 80 60 } 40 20 0 10 15 20 25 30 min 1- 对-苯二酚； 2- 间-苯二酚； 3- 一邻-苯二酚； 苯酚； 4- 5- 一间、对-甲酚； 6- 邻-甲酚。 图A.1标准溶液色谱图 FLD1 A,Ex=284, Em=332, TT(F:FLAVORI061106\BQPLDZ-1.D) LU 1 140 120 100 80 60 40 - 20 01 20 25 10 15 30 min 0 对-苯二酚； 间-苯二酚； 2 邻-苯二酚； 苯酚： 间、对-甲酚； 邻-甲酚。 6 图A.2 典型卷烟样品色谱图 YC/T255—2008 附录B （资料性附录） 精密度、回收率和检出限实验研究结果 本方法的精密度、回收率和检出限实验研究结果见表B.1。 表B. 1 本方法的精密度、回收率和检出限实验研究结果 酚类化合物 对-苯二酚 间-苯二酚 邻-苯二酚 (间、对)-甲酚 测定变异系数/% 3. 5 7. 0 3. 3 4. 7 4. 2 4. 4 回收率/% 100.1 99. 8 103.7 101.9 99. 8 99.7 检测限/(ng/支） 6. 8 6. 4 15, 3 22.8 18, 0 20. 6 5