SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2246—2009 化学品 体外皮肤腐蚀 经皮电阻试验 ChemicalsInvitroskincorrosion- Transcutaneous electrical resistance test (TER) 2009-02-20发布 2009-09-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2246—2009 前言 本标准等同采用经济合作与发展组织（OECD)化学品测试方法No.430（2004年04月）《体外皮肤 腐蚀 经皮电阻试验》（英文版）。 本标准在标准文本格式上按GB/T1.1一2000做了下列编辑性修改： 增加了范围部分； 将OECD化学品测试方法No.430中有关方法的介绍、目的、范围等改为本标准的引言。 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。 本标准参与起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国安徽出入境检验检 疫局、常州进出口工业及消费品安全检测中心。 本标准主要起草人：刘君峰、张少岩、温劲松、江红星、陈小卫、陈明、王小峰。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 2246—2009 引言 皮肤腐蚀是指皮肤在接触化学物质后产生的不可逆的皮肤组织损伤（如GHS中的定义）。本标准 提供了一种无需活体动物试验而对化学物质腐蚀性进行评估的试验方法。 评估腐蚀性通常需要进行实验室动物试验。GB/T21604一2008考虑到试验中动物的痛苦和疼 痛，在其附录中允许使用体外方法进行皮肤腐蚀性的测定，以避免动物的痛苦和疼痛 完全代替GB/T21604一2008的主要困难是缺少正式的、独立的、科学的体外试验方法。前验证研 究可作为制定一种体内试验替代方法的第一步，随着这种研究的进行，已经开展了体外皮肤腐蚀性试验 方法的验证试验研究。这些研究导致了本试验和人体皮肤模型试验的产生。 本标准可以对腐蚀性化合物和混合物加以鉴定。如果结合其他已有的信息，（如PH，结构活性关 系，人类和（或）动物数据)通过证据权重分析，本标准还可以对非腐蚀性的化合物和混合物加以鉴定。 本标准通常不能提供受试物皮肤刺激的信息，也不能对腐蚀性物质按照GHS规则进一步加以分类 为了全面评估皮肤在经皮一次染毒后的局部反应，建议按照GB/T21604一2008中的序贯试验策 略或GHS中提供的相关方法进行试验。 SN/T2246—2009 化学品体外皮肤腐蚀 经皮电阻试验 1范围 本标准规定了化学品体外皮肤腐蚀经皮电阻试验的原理、试验方法和程序。 本标准适用于化学品体外皮肤腐蚀经皮电阻试验。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T21604一2008化学品急性皮肤刺激性/腐蚀性试验方法 3术语与定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 体外皮肤腐蚀 skincorrosioninvitro 皮肤接触化学物质4h后产生的不可逆的体外皮肤损伤，即表皮和真皮的可见性坏疽。腐蚀作用 的特征有溃疡、出血、结痴，14d后皮肤因为发烫而变色，局部斑秃并结疤。应用组织病理学方法评价 可疑的损伤。 3. 2 经皮电阻 1transcutaneous electrical resistance(TER) 皮肤的电抗性，用电阻值（k2)表示。运用惠斯通电桥检测皮肤的离子通过性，以评估皮肤的屏障 功能是一种简单稳定的方法。 4原理 4.1将受试物涂敷到置于两层测试系统中的皮肤表面，保持24h。在该测试系统中，层与层之间的皮 肤板可作为一个独立的功能层。皮肤板来自于安乐处死的鼠龄为28d～30d的大鼠。如果角质层或 值（TER)低于规定的值水平而加以确认。由于大量化学物质的数据显示大多数大鼠经皮电阻值或 高（一般>10k2），或低（一般<3k2），所以选择5k2作为临界值 4.2一般来讲，无腐蚀性但有刺激性的物质或既无腐蚀性又无刺激性的物质不会出现TER低于该临 界值。此外，其他皮肤或其他仪器可能会使该临界值发生改变，因此需要进一步验证。 4.3可在试验步骤中加人染色方法，以确认阳性结果（包括TER接近5kQ时）。如果角质层遭到了 破坏，则会增加离子的通透性，从而可用染色方法进行验证。大鼠皮肤的TER试验可为 GB/T21604一2008中的家兔体内腐蚀性试验提供依据。应注意在皮肤腐蚀和皮肤刺激方面，家兔体内 试验比人体皮肤斑贴试验更加保守。 5试验方法 5.1试验动物 5.1.1应选择大鼠作为试验动物，因为大鼠的皮肤对化学物质的敏感性在以前相同的试验中已经得到 SN/T2246—2009 了证实。所用大鼠的鼠龄和品系（取皮肤样品时)是非常重要的，以确保在大鼠成年毛发开始生长之前， 且毛囊处于休眠状态 5.1.2试验采用鼠龄约22d的Wistar大鼠（或其他相近品种），雌雄皆可。用剪刀仔细剪掉大鼠背部 和侧腹部毛发，然后小心擦拭动物，同时把暴露的部位涂抹抗生素溶液（如含有链霉素、青霉素、氯霉素， 配成有效浓度以抑制细菌生长），3d～4d后用抗生素溶液再清洗动物一遍。如剪毛后角质层已经恢复 正常，在第2次清洗后3d内，动物可用于试验 5.2皮肤板的制备 5.2.1在大鼠的鼠龄为28d～30d时，将其处死。分离每只动物的背侧部皮肤，小心剥去皮下多余的 脂肪，制成直径约20mm的皮肤板。皮肤板在使用之前可贮藏起来，因为阳性对照和阴性对照的数据 与从新鲜皮肤获得的试验数据相同。 5.2.2每个皮肤板放在聚四氟乙烯(PTFE)管的一端，保证外皮的表面与管相接触。在管底放一个合 适大小的O形橡胶环以固定皮肤，除去多余的皮肤。管子和O形环的尺寸见图2，用凡士林小心的将O 所示）。皮肤板必须浸没在MgSO4溶液中。一只大鼠的皮肤可以制成（10～15)块皮肤板。 1- 弹簧线夹； 2- PTFE管； 3 弹性回形针； 接收器腔； 5- 硫酸镁（154mmol)； 6- 橡胶“O"形环； 7- 硫酸镁（154mmol)； 8- 内电极(粗的)； 9- 弹簧线夹； 10- 外电极(细的)； 11- 皮肤板的上皮； 12- 皮肤板的真皮。 图1 鼠皮肤TER测试器具 2 SN/T2246—2009 16mm 10 mm O型圈位置 0. 5 m 1 mm 13 mm 弹簧线夹 81 mm 75 mm + 1 mm 图2聚四氟乙烯（PTFE）管尺寸 5.2.3试验开始前，取每只动物的两块皮肤板进行质量控制试验。试验用皮肤板的电阻值必须大于 10k2。如果电阻值小于10kQ，则由该只动物的皮肤制成的所有皮肤板都不能用于试验。 5.3受试物和对照物的染毒 5.3.1试验时需同时有阳性对照和阴性对照以确保试验模型的可行性。所有的皮肤板应来自于同一 只动物。建议用的阳性对照物和阴性对照物分别是10mol/L盐酸和蒸馏水。 5.3.2将150μL受试物均匀地涂敷到PTFE管里的外皮表面。如果受试物是固体，则应把足够多的 受试物均匀的铺到皮肤板上，以保证整个外皮的表面都被覆盖。向固体的表面加150μL去离子水并轻 摇管子。为了使受试物与皮肤充分接触，可将固体受试物加热到30℃融化或软化，或者碾成粒状/ 粉状。 5.3.3每个染毒组和对照组要用3块皮肤板。受试物在20℃～23℃情况下染毒24h后，用30℃水 冲洗染毒部位。 5.4TER检测 5.4.1TER采用低压交流惠斯通电桥来测量皮肤的阻抗性。一般交流电桥的工作电压是1V～3V， 弯型或呈直角型交流电的频率为50Hz～1000Hz，测量范围至少是0.1kQ～30kQ。确认试验中所 在TER腐蚀性评估试验中，测量结果以100Hz频率时的电阻以及一系列数值来表示。 SN/T 2246—2009 5.4.2在测量电阻之前，在表皮上涂敷足够多的70%乙醇，以减小表皮的表面张力。保持几秒后，将 管中的乙醇除出，向管中表皮加3mLMgSO溶液（154mmol)使皮肤组织水合。皮肤板的每一面放一 个电桥电极以测量皮肤板的电阻（图1）。电极的直径和低于鳄鱼皮夹的电极长度见图2。PTFE管顶 电极固定在接收器腔的底部。PTFE管上的弹性回形针和底部的距离是保持不变的，因为这个距离能 影响电阻的测量值。因此，内部电极和皮肤板之间的距离也应保持不变并且要尽量短。 5.4.3如果测量所得的电阻值大于20kQ，可能是由于有受试物残留在皮肤板上造成的。此时可以尝 试进一步除去残留的受试物，例如可以用一带有手套的拇指封住PTFE管，摇动约10s，弃去管内 MgSO4溶液并换上新的MgSO4溶液再次测量电阻。 5.4.4试验设备的性能以及试验程序可能会影响TER结果。5kQ2的腐蚀阈值是依据本标准的试验 方法，用特定的仪器得出的试验结果。如果试验条件改变或使用不同的仪器，则可以选择不同的阅值， 因此有必要从用于验证试验的化学物质中或从与受试物类似的物质中，选择一系列的参照物质进行试 验，以对试验方法和电阻阈值进行校正。一些推荐的合适化学物质参见表A.1。 5.5染色方法 一些非腐蚀性的物质可以使电阻值降低到低于5k2的临界值，因为这些物质可以让离子通过角质 层，例如一些有机物和含有表面活性成分的化学物质（包括清洁剂、乳化剂和其他表面活性剂）能去除皮 肤上的脂类物质，而使皮