SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2241—2008 结合重复染毒毒性研究的 生殖发育毒性筛选试验 Combined repeated dose toxicity study with the reproduction/ developmental toxicity screeningtest 2008-11-18发布 2009-06-01实施 中华人民共和国 发布 数码防优 国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 结合重复染毒毒性研究的 生殖发育毒性筛选试验 SN/T2241-—2008 中国标准出版社出版 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×12301/16印张0.5字数9千字 2009年2月第一版2009年2月第一次印刷 印数1—2000 书号：155066·2-19530 SN/T 22412008 本标准修改采用联合国经济合作与发展组织(OECD)化学品测试方法No.422《结合反复染毒毒性 研究的生殖发育毒性筛选试验》（1996）。 本标准与OECD化学品测试方法No.422相比，存在以下差异： 对OECD化学品测试方法No.422进行了编辑性修改； 一增加了前言部分。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。 本标准由国家认证认可监督管理委员会归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。 本标准参加起草单位：中化化工标准化研究所、江南大学和天津市检验检疫科学技术研究院。 本标准主要起草人：赵好力宝、张园、李学洋、于智睿、赵黎华、周磊。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T2241—2008 结合重复染毒毒性研究的 生殖发育毒性筛选试验 1范围 本标准规定了动物亚急性毒性联合繁殖/发育毒性筛选试验的术语定义、试验方法和临床检查及结 果报告。 本标准适用于检测化学品的亚急性毒性、繁殖毒性及生长发育的影响。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准 GB14925实验动物环境及设施 卫生部《化学品毒性鉴定技术规范》（2005） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 生殖毒性 reproduction toxicity 受试样品对亲代繁殖功能或能力的影响和(或）对子代生长发育的损害效应。 3. 2 母体毒性maternaltoxicity 引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应。 3. 3 繁殖力的损害 impairmentoffertility 表现为雌性或雄性动物生殖功能或能力的障碍。 3. 4 生长发育毒性 developmental toxicity 妊娠动物接触受试样品而引起的子代在出生前、围产期和出生后所显现出的机体缺陷或功能障碍。 4试验动物 4.1饲养环境 按GB14924.1及GB14925的要求进行。 4.2动物的选择 应选健康初成年的大鼠，未经交配，未参加过任何试验。避免选用繁殖力低和生长发育缺陷率高的 品系。试验初，动物的体重不应超过同性别平均体重的20%。如果试验分为预试验和正式试验，所用 动物的品系和来源应相同。所选动物应注明种类、品系、性别、体重和（或）周龄。最好使用7周龄～ 8周龄，至少经过5天适应期的动物。雌性动物必须是未产过仔的。 1 SN/T2241—2008 4.3动物数量 试验初，每个试验组至少应有20只动物，雌雄各半。如果试验中间需要处死一部分动物进行检查， 则试验初就需要增加这一部分的动物数。 5试验方法 5.1受试样品 受试样品可以是固体、液体、气体或蒸气。试验前应对受试样品的化学特性、纯度（含有的重要杂 质）、溶解性、挥发性、稳定性等进行了解。需要时还应知道其熔点/沸点或酸碱度。若需要赋形剂，首先 应考虑水溶液或水混悬液，再考虑选用油性的溶液、乳化剂(植物油)或其他溶剂。如果选用非水的溶剂 作为赋形剂时，应明确赋形剂的毒性及受试样品在赋形剂中的稳定性。 5.2剂量水平 试验至少设三个染毒组和一个对照组。剂量水平可以根据受试样品已知的毒性和毒代动力学的数 据来制定，同时还应考虑到妊娠动物对受试样品毒性的敏感程度不同于非妊娠动物。最高剂量应使亲 代动物出现毒性反应，但又不引发动物的死亡或显的痛苦；低剂量应不引起亲代及其子代动物的任何 毒性反应；中间剂量可引起轻微的毒性反应。组间距通常为2倍4倍。若试验设4个剂量组，第四个 剂量组的组距则可以考虑大一些，如10倍。 5.3染毒 将动物按体重随机分为染毒组和对照组，编号后进行染毒。受试样品可以通过灌胃经口染毒。应 该采用相同的灌胃体积。每只动物的给样体积应按其体重来确定，且每周进行调整。最大的灌胃量通 常不超过1mL/100g动物体重。 如果受试样品为水溶液，灌胃量则可以考虑增大到2mL/100g体重。 每周染毒7天，每天应在相同的时间进行。对照组动物除了不给予受试样品外，其余的处理应与剂量组 完全相同。如果受试样品使用赋形剂，对照组应采用赋形剂的最大使用量进行平行染毒。如果将受试 样品掺人饲料或溶于饮水中进行染毒，受试样品在饲料或饮水中的含量应恒定，但受试样品的添加量不 能破坏普通饲料或饮水中的营养平贫 5.4给样期限及繁殖程序 给样期限及繁殖程序见表1。 给样期限及繁殖程序 表1 试验周期 亲代(P) Fi(子代) 第1~第2周末 雄性与雌性亲代动物开始染毒 第3~第4周末 交配（给样），4周末处死雄性动物 第5～第7周末 孕鼠继续给样（妊娠及分娩） Fi出生 第8周 哺乳（给样），子代出生4d后处死雌性动物 出生4d后处死Fi 第9~第10周末 未处死的动物，继续染毒2周后予以处死 交配方法及妊娠检查：雄性和雌性动物按1：1比例合笼交配。雌鼠应始终与同剂量组的同一只， 但不是同窝所生的雄鼠合笼直至受孕，合笼时间最长可为2周。在交配过程中，每天早晨应对雌鼠进行 检查，查看阴道中是否有精子或阴栓。将检查到精子或阴栓的当天计为雌鼠妊娠的第0天。若交配两 周后仍未受孕，可以将不育的动物与证实过生育功能正常的同一剂量组的动物重新配对，再次合笼 交配。 5.5限度试验 如果受试样品以1000mg/kg体重的剂量经口给予，仍未观察到任何毒副作用时，则可以采用限量 试验，即试验不需要设其他剂量组。若试验采用的是其他的染毒途径：如吸入或经皮染毒，染毒的最高 浓度（或剂量）由受试样品的理化特性来决定。 2 SN/T2241—2008 6观察与临床检查 6.1观察 .6.1.1观察时间 一般每日至少对动物进行一次仔细的观察，观察时点应固定，并选择在染毒后毒性症状可能出现的 高峰期。但对动物发病或死亡的情况，每天至少观察两次。 6.1.2临床检查 在染毒前和给样后的每一周，都应对所有的动物进行详细的临床检查。检查皮肤、毛、眼晴、粘膜、 分泌物、排泄物、自律活动（如：流泪、竖毛、瞳孔的大小、异常的呼吸方式)的变化；观察动物的步态、姿势 的变化和对受试样品的反应（如：抽搐、僵直、呆滞、过度梳理毛发、反复地转圈）；记录动物有无行为改变 （如：自残、倒走），难产或滞产等现象。 6.1.3感官刺激、抓力和肌肉运动 在染毒结束后和采血进行血液和生化检查之前，从各组随机选择5雌5雄，对其进行感官刺激（如： 听力、视觉和肢体反应）、抓力和肌肉运动的检查。由于受检查的母鼠正处于哺乳期，母鼠离开仔鼠接受 检查的时间不能超过30min～40min。 6.1.4仔鼠的检查 妊娠周期应该从怀孕的当天开始计算。生产下的仔鼠应尽早分辨性别，记录每窝的出生数、活仔 数、死仔数、低体重仔数以及幼仔外观有无异常和畸形。 6.2体重 以每窝为单位，分别于仔鼠出生的当天和第4天进行称量。记录仔鼠的任何异常反应； 动物应在染毒的第一天进行称量，以后每周称量一次。雌鼠还应在妊娠的第0、7、14和20天， 以及分娩后的当天（或第1天）和第4天称量。数据应逐只进行记录。 6.3食物与水的消耗量 在交配前和交配期，应测定每天的食物摄人量（交配期间雌、雄动物的摄人量分别按交配前期的周 平均值计算）。如果受试样品是加人饮水中给予的，水的摄入量也应计算。 6.4血液学检查 到期处死动物之前，应从各组随机选择5雌5雄，对其进行一次血液学检查，包括血球容积、血红蛋 白含量、红细胞计数、白细胞计数及分类、血小板计数和一种检查血凝时间的试验。 6.5生化检验 到期处死动物之前，应从各组随机选择5雌5雄，对其进行一次生化检验。主要检测受试样品 对组织，特别是肝、肾的毒性作用。检验的标本可为血浆或血清，检验的指标包括钠、钾、葡萄 糖、总胆固醇、尿素、肌酐、总蛋白和白蛋白的含量，以及至少两项肝功能试验（如谷氨酸氨基转 移酶、天门冬氨酸氨基转移酶和山梨糖醇脱氢酶)和胆酸； -雄性动物也可以采用尿检代替血生化检查。检查的指标包括定时收集的尿量、外观、渗透压、 比重、pH值、尿蛋白、尿糖和隐血； 一若已知受试样品对其他一些生化指标有影响（如：钙、磷、空腹甘油三脂和葡萄糖，激素、高铁血 红蛋白和胆碱脂酶），应增加这些检测指标。 6.6大体解检查 所有成熟的动物都应解剖进行大体检查，肉眼观察有无外观和组织器官形态上的改变，包括口、头、