SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2182—2008 两代繁殖毒性试验 Two-generation reproduction toxicity test 2009-03-16实施 2008-09-04发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 数码防伪 中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准 两代繁殖毒性试验 SN/T2182—2008 中国标准出版社出版 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×12301/16印张0.5字数8千字 2008年11月第一版2008年11月第一次印刷 印数1—2000 * 书号，155066·2-19262 SN/T 2182—2008 前 言 本标准修改采用联合国经济合作与发展组织（OECD)化学品测试方法No.416《两代繁殖毒性试 验》（1983，2001英文版）。 本标准与OECD化学品测试方法No.416相比，存在以下差异： -对OECD化学品测试方法No.416进行了编辑性修改； 增加了前言部分； 增加了繁殖指数的计算方法。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。 本标准由国家认证认可监督管理委员会归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。 本标准参加起草单位：中化化工标准化研究所、江南大学、天津市检验检疫科学技术研究院。 本标准主要起草人：张园、于艳军、赵琢、于智睿、周磊、熊中强。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T2182—2008 两代繁殖毒性试验 1范围 本标准规定了动物两代繁殖毒性试验的术语和定义、试验动物、受试物和分组、试验步骤、试验结果 评价、试验结果报告及试验结果的解释。 本标准适用于检测化学品的繁殖毒性。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准 GB14925实验动物环境及设施 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 生殖毒性 主reproductivetoxicity 由化学品引起的亲代雌性或雄性生殖功能的损伤或生殖能力的降低，如繁殖率的下降；或引起子代 的非遗传性不良效应，如生长发育毒性，包括致畸性和哺乳期中的健康损害效应。 3. 2 繁殖力的损害impairmentoffertility 表现为雌性或雄性动物生殖功能或能力的障碍。 3.3 发育毒性developmentaltoxicity 接触受试样品的妊娠动物的子代在出生以前、围产期和出生以后所显现出的机体缺陷或功能障碍。 4试验动物 大鼠或小鼠是首选的物种，试验组和对照组应该有足够的数量以保证获得大约20个孕鼠。动物饲 养和环境按GB14924.1和GB14925的要求进行。试验开始前亲代至少在笼内饲养5d以适应环境。 5受试物和分组 5.1受试物 全部动物在试验期用同一方法染毒。如果有一种溶剂或其他赋形剂用于染毒，它应该是已知无毒 的。每周按7d给药。 5.2分组 最少应设三个染毒组，一个对照组。最高剂量应该引起中毒但不导致亲代动物死亡。理想的中间 剂量要引起轻微的毒性效应，而低剂量不引起亲代和子代可观察到的有害作用。如果灌胃或胶囊染毒， 1 SN/T2182——2008 每个动物的剂量应以个体体重为基础，每周校正体重。母鼠孕期要按照每天体重或按怀孕0d或妊娠 5d的体重染毒。 5.3限度试验 假如受试化学物在多次剂量研究中表明是低毒的，剂量在1000mg/kg不影响生殖行为，就没有必 要考虑测试其他剂量。在高剂量预试验中，有母鼠中毒的肯定证据，而没有生殖方面的有害作用，也没 有必要测试其他剂量。 6试验步骤 6.1染毒时间 亲代雄鼠从断奶后5周～9周，适应5d后开始染毒，大鼠染毒持续10周（小鼠8周）。交配结束后 雄鼠进行剖检或保留作为第二窝的侗养对照，试验结束前剖检。亲代母鼠适应5d后开始染毒到交配 前至少持续2周。在3周交配期、蜓娠期，直到子代F，断奶整个试验期间，亲代母鼠每天持续染毒。 F断奶后继续给予受试物，一直建续，直到F。断奶。根据受试物的代谢和蓄积特性，剂量日程应考虑 适当的修正。 6.2交配程序 6.2.1两代繁殖试验可用1：1（雌、雄各1)或1：2(1雄对2雌）交配。 6.2.21：1交配，一个母鼠应该一直同一个雄鼠同笼直到出现怀孕或3周交配期完结，每天早晨检测 母鼠阴道是否有精子或阴栓，确定阴道有精子或发现阴栓的那天为妊娠0d。 6.2.3子代F，大鼠鼠龄13周（小鼠11周)才交配。对子代F，的交配，同一剂量组中随机选择与另一 窝子鼠1：1交叉交配产生子代F。没有被选中的F，雌性和雄性子鼠至断奶时处死。 6.3窝的规格 生育期问染毒的动物允许正常产仔以及抚养后代到断奶期。幼鼠出生后4d进行窝的调整，每窝 尽可能选4个雄鼠和4个雌鼠，也可根据实际情况进行部分调整，但一窝不少于8个幼鼠。F2按照同 样的方式进行调整。 6.4观察结果 6.4.1整个试验期间。每个动物最少每天观察1次与中毒相关的行为改变，产仔困难或延迟，所有的 中毒体征，包括死亡率都要记录。 6.4.2亲代（P和F,)染毒当天称量，此后每周一次。成年动物的这些结果应该按个体报告。 6.4.3在交配前和交配期，每天测量食物消耗量，妊娠期也每天测量一次。 6.4.4交配期间应检查雌鼠（P和F:)的阴道和子宫颈，以此判断雌鼠的发情周期有无异常。 6.4.5产仔后哺乳期，食物消耗量和窝仔称量应该同一天测量。 6.4.6为了确定幼鼠数量、性别、死胎、活胎和外观畸形，每窝应该产仔后尽快检查。死胎和第4天杀 死的幼鼠应该防腐保存并作缺陷检查。 6.4.7活幼鼠在出生后的当天上午、第4天和第7天计数和称量，此后每周1次直至试验结束。 6.4.8当动物单个称量时应该记录观察到的母鼠和子代生理活动异常。 6.5病理学检查 6.5.1大体解剖 试验动物不再继续做生殖毒性试验时，所有的亲代和子代F，成、幼鼠均应处死，没有选作交配的子 代F，和全部子代F2断奶时都应被处死。在研究期间死亡或宰杀的所有亲代和子代F，如有任何结构 异常或病变均应作大体解剖，应特别注意生殖系统器官。死亡或垂死的幼鼠应作缺陷检查。 6.5.2器官称量 6.5.2.1在大体解剖的基础上应对下列器官进行称量（对称器官应逐个记录）： SN/T2182—2008 子宫和卵巢； 睾丸和附睾； 前列腺； 精囊腺； 脑、肝脏、肾、脾、脑垂体、甲状腺和肾上腺和重要的靶器官。 6.5.2.2被选中做大体解剖的P和F，幼仔的体重和重要器官（脑、脾和甲状腺）的质量需要记录。 6.5.3病理组织学检查 选择交配的亲代和子代F，的卵巢、子宫、子宫颈、阴道、睾丸、副睾、精液小囊、前列腺、阴茎和靶器 官，保留作显微镜检查，雄鼠还应判断精子的数量是否改变，是否出现精子畸形。大体解剖中显示病变 的组织应作显微镜检查，建议怀疑不育的动物的生殖器官应当作显微镜检查。 7试验结果评价 7.1繁殖指数 繁殖指数见式(1)式(5)： 交配成功动物数 交配成功率： (1 ) 受孕动物数 受孕率= (2 ) (3) 受孕动物数 出生后4d幼仔存活数 出生存活率 ×100% (4) 出生当时存活幼仔数 21d断奶时幼仔成活数 哺育成活率： X100% (5) 出生后4d幼仔存活数 7.2数据处理 7.2.1数据摘要列表，显示每组试验开始时的动物数，能生育的雄性数和妊娠的雌性数，各种变化的类 型和百分率。 7.2.2应对数据用适当的统计学方法做出评价，统计学方法应作为研究设计的一部分。 8试验结果报告 结果报告应包含下列各试验数据项： 动物品、系； 按性别和剂量-毒性反应数据，包括生育能力、妊娠和生存指数； 试验期动物死亡的时间或试验动物是否生存到试验结束； 窝重，幼鼠的评价体重，试验终点幼鼠的个体体重； 生殖、子代和后期生长等方面的毒性和其他效应： 观察到各种休征的日期及其后果； 亲代和选作交配的F，代动物的体重数据； 一大体解的发现； 病理组织学检查结果的详细描述： 一结果的统计处理； 一结果解释。 SN/T2182—2008 试验结果的解释 两代繁殖试验将提供反复经口染毒引起毒性反应的信息。研究结果应该结合亚慢性、致畸和其他 试验结果作出解释。虽然在无效应水平和人允许暴露水平方面可以提供有用的信息，但是研究结果外 Lad 推到人的有效程度有局限性。 书号：155066·2-19262 SN/T 2182-2008