SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2177—2008 危险品哺乳动物骨髓细胞 染色体畸变试验方法 Test method of in vivo mammalian bone marrow chromosome aberration for dangerous goods 2008-09-04发布 2009-03-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 豆丁网：国内外标准大全 http://www.docin.com/kmust 1 SN/T2177—2008 前言 本标准修改采用联合国经济合作与发展组织（OECD)化学品测试方法No.475《哺乳动物骨髓染色 体畸变试验》（1997）。 本标准与OECD化学品测试方法No.475相比，存在以下差异： 对OECD化学品测试方法No.475进行了编辑性修改； 一增加了前言部分； 增加了定义部分； 删掉了试验报告部分。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。 本标准由国家认证认可监督管理委员会归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。 本标准参加起草单位：中化化工标准化研究所。 本标准主要起草人：张园、赵好力宝、于智睿、赵琢、熊中强、李学洋。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 I 豆丁网：国内外标准大全 http://www.docin.com/kmust 1 SN/T 2177—2008 危险品哺乳动物骨髓细胞 染色体畸变试验方法 1范围 本标准规定了体内哺乳动物骨髓染色体畸变试验的术语和定义、试剂和仪器、试验方法、试验结果 及结果评价。 本标准适用于检测化学品对骨髓细胞的致突变性。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准 GB14925实验动物环境及设施 卫生部《消毒技术规范》 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 染色单体型畸变chromatid-typeaberration 染色体结构损伤，表现为染色单体断裂或染色单体断裂重组的损伤。 3. 2 染色体型畸变 chromosome-typeaberration 染色体结构损伤，表现为在两个染色单体的相同位点均出现断裂或断裂重组的改变 3.3 核内复制endoreduplication 在DNA复制的S期之后，细胞核未进行有丝分裂就开始了另一个S期的过程。其结果是染色体 有4，8，16…··倍的染色质。 3. 4 裂隙gap 染色体或染色单体损伤的长度小于一个染色单体的宽度，为染色单体的最小的错误排列。 3.5 染色体数目畸变chromosomalnumericalaberration 染色体数目发生改变，不同于正常核型。 3. 6 多倍体polyploidy 哺乳动物染色体数目正常是二倍体，在化学诱变剂的作用下，染色体数目成倍地增加成三倍体、四 倍体等。 豆丁网：国内外标滩大全 http://www.docin.com/kmust 1 SN/T2177—2008 3.7 染色体结构的畸变chromosomalstructureaberration 通过显微镜可以直接观察到的发生在细胞有丝分裂中期的染色体的结构变化。如染色体中间缺失 和断片，染色体互换和内交换等。 3.8 最高剂量highestdose 产生毒性体征的剂量，更高剂量将引发试验动物死亡。 4试剂和仪器 4.1试剂 ——0.1%秋水仙碱； —0.9%氯化钠溶液； —0.075mol/L氯化钾溶液； 一固定液：甲醇与冰乙酸以3：1混合，临用时现配； 一姬姆萨（Giemsa)染液、姬姆萨应用液，配制方法见《消毒技术规范》； 一磷酸盐缓冲液（pH7.4），配制方法见《消毒技术规范》。 4.2仪器和器材 实验室常用设备、生物显微镜、恒温水浴箱37℃士5℃、离心机、解剖剪、镊子、注射器、灌胃针头、 离心管、吸管、滴管、试管架、载玻片、塑料吸瓶、干净纱布、滤纸等。 5试验方法 5.1试验动物 成年小鼠（体重25g30g），或大鼠（体重180g220g）。每个剂量组每个性别动物不少于5只。 试验动物饲养条件应符合GB14924.1和GB14925有关规定。 5.2剂量分组 应进行预试验以选择最高剂量，为避免出现假阴性结果应适当增大剂量范围。如果受试样品具有 毒性，应在第一个采样时间点设三个剂量，设置的剂量应包括从最大毒性至最小毒性或无毒性的范围。 第二次采样时间点仅需设置最高剂量。按等比级数2向下设置中、低剂量组。 5.3限度试验 如果单次染毒剂量不小于2000mg/kg体重，未出现毒性效应，且根据资料预期受试物无遗传毒 性，则不需要进行其他染毒剂量的试验。 5.4样品处理 通常用蒸馏水、等渗盐水、植物油、食用淀粉、羧甲基纤维素钠等。如使用特殊溶剂或载体，应有参 考资料说明其成分。 5.5试验步骤 5.5.1染毒 5.5.1.1采用灌胃法，也可腹腔注射。一般情况下染毒一次，或者为便于大容量给药，也可分散剂量染 毒，即同一日染毒两次，其间隔时间不超过几小时。 5.5.1.2高剂量组动物分为A、B两个亚组，分两次采集样品，啮齿类动物采样时间一般为1.5个正常 的细胞周期，即A组于末次染毒后12h～18h采集样品；B组于末次染毒后36h～42h采集样品；中、 低剂量组均于末次染毒后12h～18h采集样品。如果采用多次染毒方式，只需在最后一次染毒后 12h～18h采一次样。 2 豆丁网：国内外标滩大全 http://www.docin.com/kmust1. SN/T2177-2008 5.5.2处死动物 于处死动物采集样品前3h～5h腹腔注射秋水仙碱（4mg/kg体重），用颈椎脱白法处死动物，迅速 取出股骨，剔去肌肉，擦净血污，剪去两端的骨骺，用带针头的5mL注射器吸取5mL生理盐水，插入骨 髓腔内，将骨髓冲洗入10mL离心管，然后用吸管吹打骨髓团块使其均匀，以1000r/min速度离心 10min，用滴管吸去上清液。 5.5.3低渗 加入0.075mol/L氯化钾溶液9mL，用滴管将细胞轻轻地混匀，放人37℃水浴中低渗20min。 5.5.4预固定 立即加入固定液（甲醇：冰乙酸=3：1)1mL，混匀，以1000r/min速度离心10min，用滴管吸去 上清液。 5.5.5固定 加入7mL固定液，混匀，固定10min，以1000r/min速度离心10min，用滴管吸去上清液。用同 法再固定2次。加入0.1mL～0.5mL新鲜固定液，用细口滴管充分混匀。 5.5.6制片 在洁净的冷冻玻片上方3cm～5cm处滴3滴～4滴细胞悬液于玻片上，轻吹细胞悬液扩散平铺于 玻片上，将玻片在酒精灯上微热烘烤，空气中自然干燥。每个标本制片2张～3张。 5.5.7染色 将制备好的标本片放入Giemsa应用液中染色15min（根据室温，冬天长些，夏天短些），用蒸馏水 冲洗、晾干。 5.5.8结果分析 5.5.9观察项目 染色体数目的改变：非整倍体（亚二倍体或超二倍体），多倍体，内复制。染色体结构的改变：断裂、 微小体、有着丝点环、无着丝点环、单体互换、双微小体、裂隙和非特定性型变化（如粉碎化、着丝点细长 化、粘着等）。 6试验结果 6.1数据处理 每一只试验动物作为一个观察单位，每组动物按性别分别计算染色体结构畸变细胞百分率。若雌、 雄动物之间无明显的性别感受差异时可合并计算结果。 6.2阳性结果判定方法 一有多个决定阳性结果的标准，如受试样品可引起剂量依赖的染色体畸变细胞数目或复制增加。 统计学方法可帮助计算结果，但统计学差异不应作为唯一的阳性结果判定因素。 一多倍体细胞数目的增加提示受试物可能抑制有丝分裂而导致染色体数目异常。核内复制染色 体细胞数目的增加说明受试物可能抑制细胞周期。 7结果评价 阳性结果表明受试样品具有引起受试动物骨髓细胞染色体畸变的能力。阴性结果表明在本试验条 件下受试样品不引起受试动物骨髓细胞染色体畸变。 豆丁网国内外标准大全 http://www.docin.com/kmust1. SN/T 2177—2008 中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 危险品哺乳动物骨髓细胞 染色体畸变试验方法 SN/T 2177—2008 * 中国标准出版社出版 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×12301/16 印张0.5 字数7千字 2008年11月第一版 2008年11月第一次印刷 印数1—2000 * SN/T 2177-2008 书号：155066·2-19258 定价6.00元 豆丁网：国内外标准大全 http://www.docin.com/kmust 1 国内外标准大全